Name: 清醒小鼠滴鼻的CNS药物治疗管理 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 学习清醒小鼠滴鼻给药技术，通过改良抓握法固定头部，实现中枢神经系统靶向递送。该方法无需麻醉，可重复给药，适用于神经疾病药物开发的长期研究。

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作者谨此感谢 Regions 医院 HealthPartners 机构动物护理与使用委员会。

1. 对清醒小鼠进行鼻内给药前的抓取适应
引言
在开始经鼻给药前，小鼠需经过两到四周的抓握适应期。抓握适应非常重要，因为它有助于确保小鼠保持正确的体位，从而最大限度地提高清醒状态下经鼻给药的效果。此外，未充分适应此过程的小鼠在给药后可能出现严重的焦虑反应。根据小鼠对抓握的适应程度，每一步骤应持续约2至3天后再进入下一步。应以小鼠的应激水平作为评估进展的指标，即通过监测小鼠的活动情况、排尿量/频率、排便、颤抖及咬人行为来判断。若小鼠表现出较高的应激反应，则应在当前步骤停留更长时间，直至反应减轻后再进入下一步。示例性适应程序见表1。小鼠的适应过程应按以下每日一次的步骤依次进行。不建议每日执行超过一次这些步骤以试图加快适应进程。
<ol>
 <li>将小鼠置于手掌中2至3分钟，高度不超过笼顶一英尺，因为动物在此初始步骤中常会跳跃。如果小鼠试图爬出手掌并沿手臂向上移动，只需抓住其尾根部将其轻轻提起，放回手掌中。</li>
 <li>将小鼠置于手掌中3分钟，并轻柔抚摸动物。抚摸时应沿头部向尾部方向进行，同时允许小鼠在手中自由活动。</li>
 <li>将小鼠置于手掌中3分钟，同时按摩其耳后区域（用拇指和食指轻轻捏住颈部后方皮肤）。</li>
 <li>用手抓住小鼠颈部皮肤（scruff）提起并保持30秒，然后将其放回笼顶休息30秒，之后重复一次抓握操作。</li>
 <li>使用第2节所述的鼻内给药抓握法（intranasal grip）抓持小鼠，但不要将小鼠倒置（完成至步骤2.4即可）。以此姿势保持30秒后，将小鼠放回笼顶。休息1分钟后重复操作一次。</li>
 <li>按照第2节所述方法使用鼻内给药抓握法抓持小鼠，包括将小鼠倒置，使其腹面朝上面对天花板。确保小鼠颈部与地面平行。保持此姿势30秒，休息1分钟后重复一次。部分小鼠对此抓握方式的抗拒程度较高，尤其是在适应程序首次进行到此步骤并实施倒置时。若小鼠挣脱抓握，应将其放回笼顶重新抓握。必要时可重复抓握操作，但需密切观察小鼠的应激水平，如有需要应及时将其放回笼中。此外，在此阶段适应过程中抓握失败的另一个可能因素是操作人员对鼻内给药技术尚不熟练。</li>
 <li>使用鼻内给药抓握法抓持小鼠，倒置后短暂将装有空吸头的移液器分别覆盖于左右鼻孔，保持该姿势30秒。休息1分钟后重复一次。</li>
 <li>使用鼻内给药抓握法抓持小鼠，倒置后按照第3节所述方法（至步骤3.7）向左右鼻孔各给予6 μl生理盐水。</li>
 <li>使用鼻内给药抓握法抓持小鼠，倒置后按照第3节所述方法向左右鼻孔各给予6 μl生理盐水，两次给药之间将小鼠放回笼顶，重复一次给药过程。</li>
</ol>
2. 通过鼻部抓握法固定清醒小鼠
<ol>
 <li>将小鼠放在笼盖上。</li>
 <li>用惯用手的拇指和食指抓住小鼠的尾巴。用中指、无名指和小指轻轻将小鼠身体的下半部分固定在笼盖上（图1A）。让小鼠抓住笼条，同时轻轻将其身体拉直，以便更好地抓取颈背部的皮肤。</li>
 <li>用非惯用手的拇指和中指，牢固地捏住小鼠颈肩后方的颈背部皮肤（多余皮肤），向上提起松弛的皮肤，使其在肩胛骨区域形成一个帐篷状（图1B）。尽可能多地提起皮肤，但注意不要带起肌肉，以免引起小鼠不适。操作时需谨慎，避免对小鼠的肋骨或脊柱施加过大压力。过度的压力或牵拉皮肤在某些情况下可能导致呼吸抑制。</li>
 <li>迅速用非惯用手的食指尽可能靠近小鼠鼻部按住其头部，并向后拉紧皮肤（图1C, 1D）。同时，将拇指和中指沿皮肤向头部滑动，以达到最佳固定位置。理想状态下，小鼠的头部应无法进行垂直或水平移动。</li>
 <li>在保持颈背部皮肤抓握的同时，将小鼠翻转至仰卧位。小鼠的背部应贴合于手掌中。用最后两根手指（无名指和小指）将小鼠尾巴（靠近基部）紧贴手掌固定，以稳定小鼠；也可用手指横跨小鼠下腹部进行固定（图1E, 1F）。</li>
 <li>此时应确保小鼠的颈部和下巴平坦且与地面平行。下巴与颈部之间的夹角应尽可能接近180度，以利于鼻内给药。角度的微小变化可能导致药物进入错误部位。通过观察腹部运动确保小鼠能够正常呼吸。小鼠应无法移动，但应处于舒适状态，无任何疼痛表现。若发现小鼠颈部与下巴形成“V”形，则需重新调整抓握方式。</li>
</ol>
3. 向清醒小鼠进行鼻内给药
引言
采用鼻内给药夹持法，每只小鼠需被固定两次，使其颈部与地面平行，然后给予20-30 μl的液体。该体积对小型至大型小鼠均安全且有效；我们通常使用24 μl，本方案中所述即为此体积。清醒状态下鼻内给药法可用于任何年龄的小鼠，例如在新生小鼠中用于发育神经科学研究。对于新生小鼠，应使用较小的总体积（8 μl）和液滴体积（1 μl），以适应其较小的鼻腔容积。通常同时对两只小鼠进行给药，交替安排休息时间，以最高效地利用时间并保持操作节奏。具体操作设置会因群养小鼠或单养小鼠而略有不同。对于单养小鼠，建议将所有实验材料放置在笼子之间，以防止小鼠爬到其他笼盖上。对于群养小鼠，则仅从同一笼中进行给药。必须确保群养笼内的每只小鼠接受相同的鼻内处理，因为药物可能通过空气喷出或皮肤接触导致不同处理之间的交叉污染。强烈建议提前打印给药记录表，以便技术人员核对处理分组、记录遗漏滴数、备注每只动物的一般健康状况等信息。
步骤
<ol>
 <li>将笼子放置在给药所需的位置，并设置给药操作台（图2）。</li>
 <li>将小鼠从笼中取出，在给药期间将其置于笼盖上。</li>
 <li>使用第2节中所述的鼻内给药抓握法抓取小鼠。</li>
 <li>用惯用手将移液器吸取6 μl药物或溶媒。将装有液体的移液器尖端靠近小鼠左侧鼻孔，通常呈45度角（图1G、1H）。若溶液黏稠，可能需要将角度增加至90度，以防药物沿移液器尖端侧壁上行而不形成液滴。若溶液非常黏稠，可在排出液体前用纸巾轻轻擦拭移液器尖端，以帮助操作。缓慢推出药物，形成约一半体积（3 μl）的小液滴。</li>
 <li>液滴应靠近小鼠鼻孔，使其能够吸入。在小鼠吸入该小液滴后，立即在约2–3秒内将移液器尖端中剩余药物推出，形成第二个小液滴，通过同一鼻孔吸入。务必观察小鼠口腔。若发现口腔内有液体，说明液滴未完全进入鼻腔，应予以记录。</li>
 <li>保持小鼠此姿势15秒。强烈建议使用计时器，以确保15秒停留时间的标准化。</li>
 <li>对右侧鼻孔重复步骤3.3–3.6。若任何液滴被喷出，则应补充该液滴并予以记录。</li>
 <li>将小鼠放回笼盖上静置2分钟。在首次给药2分钟后，重复整个给药过程。此方案共给予小鼠四次6 μl液滴，总计24 μl溶液。一次给药一至两只小鼠的示例时间安排见表2。</li>
 <li>在小鼠完成全部给药后，将其放回原笼中。</li>
</ol>
4. 用于清醒小鼠适应性及鼻内给药的常规动物操作技术
每次适应性处理或经鼻给药后，应给予小鼠零食作为正向强化，例如麦圈或去壳葵花籽。提供零食既是一种奖励，也可分散小鼠注意力，防止其抓挠鼻部，从而避免造成自身损伤。在处理群养小鼠时，应为每只小鼠提供足够的零食。在将动物放回笼具前，务必将其巢穴恢复至原始状态，以减少应激反应。在对群养动物进行给药操作时，必须在不同笼具之间更换手套，以避免将一个笼具群体的气味带入另一个笼具群体，否则小鼠之间可能发生攻击行为。

<ol><li>Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+to+the+central+nervous+system%3A+mechanisms+and+experimental+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations.</a> J. Pharm Sci. 99, 1654-1673 (2010).</li>
<li>Thorne, R. G., Pronk, G. J., Padmanabhan, V., Frey, W. H. 2nd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+insulin-like+growth+factor-I+to+the+rat+brain+and+spinal+cord+along+olfactory+and+trigeminal+pathways+following+intranasal+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Delivery of insulin-like growth factor-I to the rat brain and spinal cord along olfactory and trigeminal pathways following intranasal administration.</a> Neuroscience. , 127-481 (2004).</li>
<li>Benedict, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+insulin+as+a+therapeutic+option+in+the+treatment+of+cognitive+impairments%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Intranasal insulin as a therapeutic option in the treatment of cognitive impairments.</a> Exp. Gerontol. 46, 112-115 (2011).</li>
<li>Francis, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+insulin+prevents+cognitive+decline%2C+cerebral+atrophy+and+white+matter+changes+in+murine+type+I+diabetic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Intranasal insulin prevents cognitive decline, cerebral atrophy and white matter changes in murine type I diabetic encephalopathy.</a> Brain. 131, 3311-3334 (2008).</li>
<li>Francis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+insulin+ameliorates+experimental+diabetic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Intranasal insulin ameliorates experimental diabetic neuropathy.</a> Diabetes. 58, 934-945 (2009).</li>
<li>Marks, D. R., Tucker, K., Cavallin, M. A., Mast, T. G., Fadool, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Awake+intranasal+insulin+delivery+modifies+protein+complexes+and+alters+memory%2C+anxiety%2C+and+olfactory+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Awake intranasal insulin delivery modifies protein complexes and alters memory, anxiety, and olfactory behaviors.</a> J. Neurosci. 29, 6734-6751 (2009).</li>
<li>Hanson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+deferoxamine+reduces+spatial+memory+loss+in+APP%2FPS1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery+and+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of deferoxamine reduces spatial memory loss in APP/PS1 mice.</a> Drug Delivery and Translational Research. 2, 160-168 (2012).</li>
<li>Danielyan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+intranasal+losartan+in+the+APP%2FPS1+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rejuvenation+Research%22%5BJournal%5D)">Protective effects of intranasal losartan in the APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer disease.</a> Rejuvenation Research. 13, 195-201 (2010).</li>
<li>Fine, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+deferoxamine+improves+performance+in+radial+arm+water+maze%2C+stabilizes+HIF-1alpha%2C+and+phosphorylates+GSK3beta+in+P301L+tau+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Intranasal deferoxamine improves performance in radial arm water maze, stabilizes HIF-1alpha, and phosphorylates GSK3beta in P301L tau transgenic mice.</a> Exp. Brain Res. 219, 381-390 (2012).</li>
<li>Lochhead, J. J., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+biologics+to+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of biologics to the central nervous system.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 64 (11), 614-628 (2012).</li>
<li>Hanson, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+deferoxamine+provides+increased+brain+exposure+and+significant+protection+in+rat+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Intranasal deferoxamine provides increased brain exposure and significant protection in rat ischemic stroke.</a> J. Pharmacol. Exp Ther. 330, 679-686 (2009).</li>
<li>Reger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+intranasal+insulin+on+cognition+in+memory-impaired+older+adults%3A+modulation+by+APOE+genotype%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Aging%22%5BJournal%5D)">Effects of intranasal insulin on cognition in memory-impaired older adults: modulation by APOE genotype.</a> Neurobiol. Aging. 27, 451-458 (2006).</li>
<li>Kim, C. H., Song, H. yun, M, E. unA. hn, Lee, Y., G, J., Yoon, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+hypo-%2C+iso-+and+hypertonic+saline+irrigation+on+secretory+mucins+and+morphology+of+cultured+human+nasal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Effect of hypo-, iso- and hypertonic saline irrigation on secretory mucins and morphology of cultured human nasal epithelial cells.</a> Acta Otolaryngol. 125, 1296-1300 (2005).</li>
<li>Greiff, L., Andersson, M., Wollmer, P., Persson, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertonic+saline+increases+secretory+and+exudative+responsiveness+of+human+nasal+airway+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Hypertonic saline increases secretory and exudative responsiveness of human nasal airway in vivo.</a> Eur. Respir. J. 21, 308-312 (2003).</li>
</ol>

无利益冲突声明。

本方法展示了如何在不使用麻醉剂的情况下，通过鼻内给药的方式向小鼠定期递送药物以靶向大脑。鼻内给药可轻松地对大量小鼠进行长期给药。单人可在一小时之内完成对多达20只小鼠组成的单一群体的鼻内给药处理。已有大量分子被证实可通过该途径快速靶向中枢神经系统，并在啮齿类动物模型中显示出疗效，这些分子包括从小分子铁螯合剂到生长因子乃至间充质干细胞等多种类型。从鼻腔直接递送药物至大脑的潜在机制包括沿嗅神经和三叉神经的细胞外运输，以及血管周围间隙内的大分子流动1,10。鼻内递送至中枢神经系统是一种尤为有用的技术，因其不仅起效迅速，而且可特异性靶向中枢神经系统，从而减少全身暴露。例如，将去铁胺经鼻内给予大鼠后，脑区药物浓度升高了3–19倍，而血液中药物浓度则降低了28倍11。另一个例子中，经鼻给予胰岛素可在15分钟内改善阿尔茨海默病患者的记忆功能，且不改变血浆中胰岛素或葡萄糖的水平12。该技术另一优势在于其非侵入性。
该方法存在若干局限性。首先，单次给药的递送量仅限于约 20–30 μl，因此治疗药物的溶解度将影响剂量上限的确定。此外...

<table><tbody><tr><td>设置为 6 &amp;mu;l 的 P20 移液器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>凝胶上样用移液器吸头</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>计时器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>废弃吸头用废液容器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>用于记录的给药记录表</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>笔</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>药物及溶剂</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>用于盛放药物小瓶的容器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>待给药动物</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>备用手套</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>用于擦拭尿液的纸巾</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;表 3. &lt;/strong&gt; 所需材料</td></tr></tbody></table>

清醒小鼠中枢神经系统治疗药物的鼻内给药

Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice

鼻腔给药是一种将治疗剂递送至中枢神经系统（CNS）的方法。该方法具有非侵入性，可使无法通过血脑屏障的大分子物质进入中枢神经系统。通过鼻腔给药，药物可直接靶向中枢神经系统，减少全身暴露，从而降低不必要的全身性副作用1。药物从鼻腔到中枢神经系统的递送可在数分钟内通过嗅觉和三叉神经通路经细胞外途径完成，无需药物与任何受体结合或依赖轴突转运2。鼻腔给药是一种广受关注的方法，目前已被用于人类临床试验3。
在动物模型中进行鼻内给药可实现对药物药代动力学分布和疗效的初步评估。使用小鼠时，可通过一种特殊的鼻内固定手法，定期对清醒（非麻醉）状态的动物进行给药。清醒状态下给药具有多种优势：可实现长期慢性给药而无需麻醉，操作时间较麻醉条件下更短，且该技术易于学习和掌握，使得多个技术人员组成的团队可在短时间内完成大量小鼠的给药操作。已有多个研究证实了此类鼻内给药方式在小鼠中的治疗效果，例如在糖尿病小鼠模型中应用胰岛素4-6，以及在阿尔茨海默病小鼠模型中应用去铁胺7,8。
小鼠的鼻内给药抓握方法可以学会，但并不容易，需要练习、技巧和精确的抓握，以有效将药物递送至大脑，并避免药物流入肺部和胃部。操作时，用非惯用手以改良的背部抓握法固定小鼠，使其颈部与地面平行，同时用惯用手使用移液器进行给药。通常需要经过3至4周的适应性操作训练，小鼠才能在此抓握方式下不再产生应激反应。我们制作了本JoVE视频，以使这一鼻内给药技术更易于掌握。

评估药物递送效果的方法有多种。第一种方法是通过鼻内给予染料（如印度墨水或亚甲蓝），在动物安乐死后观察染料在嗅上皮内的分布情况，并在取出脑组织后观察其是否经筛板进入中枢神经系统（CNS）。第二种方法是通过放射性标记示踪或酶联免疫吸附测定（ELISA）检测未标记分子，以定量测定递送至目标部位的药物含量。关于清醒小鼠给药后药物在中枢神经系统内分布的一个良好示例，可参见Hanson et al. 20127。我们预期给药后药物在嗅球和三叉神经中浓度较高。在鼻内给予3.65 μmol去铁胺30分钟后，三叉神经和嗅神经中的药物浓度分别为29 μM和13 μM。药物浓度在整个脑区均可检测到（本例中测得浓度范围为0.6 μM至4.1 μM），其中接受嗅神经和三叉神经传入的区域浓度更高。例如，大脑皮层的吻侧区域药物浓度高于尾侧皮层，脑桥的药物浓度高于中脑或延髓。在脊髓中，通常可观察到从颈段到腰段呈递减的药物浓度梯度（本例中梯度范围为1.5 μM至2.0 μM）。鼻内给药还可使药物在脑膜和颈部淋巴结中达到较高浓度。证明递送有效的第三种方法是检测药物引起的生物学行为或生化反应。例如，对转基因阿尔茨海默病小鼠进行鼻内去铁...

本文介绍了一种在非麻醉状态下通过鼻内给药以靶向小鼠大脑的方法。该方法可在无需麻醉的情况下，通过鼻腔途径进行长期、重复给药，实现药物从鼻腔到大脑的递送，并使全身暴露最小化。

经鼻给药是一种将治疗剂递送至中枢神经系统（CNS）的方法。该方法无创，且允许大分子药物直接通过鼻腔黏膜吸收， bypass 血脑屏障，实现快速起效。

本实验的总体目标是通过在小鼠中采用无麻醉的鼻内给药方式，将药物靶向递送至中枢神经系统。首先需使小鼠适应操作处理，以完成第一步；第二步则采用改良的抓颈法固定动物头部，以实现动物的稳定不动。接下来，使用移液器将药物液滴经鼻腔给予小鼠。最后一步是将小鼠放回笼中，并给予奖励。该技术的主要优点在于，经鼻给药可将药物直接递送至中枢神经系统，避免全身暴露；同时，在清醒状态下进行经鼻给药，可在无需麻醉的情况下实现小鼠的长期慢性治疗。该方法可用于帮助回答神经疾病治疗药物研发中的关键问题。通常，初次接触该方法的研究人员会遇到困难，因为难以牢固固定小鼠口腔以防止其头部移动。该方法的可视化演示至关重要，因为正确握持时手指的位置非常关键，仅通过文字和照片难以清楚说明。在进行鼻内给药前两至四周，需通过以下步骤对小鼠进行抓取适应训练，每步持续两到三天，并确认小鼠无任何应激表现后，再进入下一步。在第一次适应步骤中，将小鼠置于手掌中，持续两到三分钟，位置应距离笼子不超过一英尺。接下来，将小鼠再次放在手掌中三分钟，并从头部到尾部轻轻抚摸动物，允许其在手掌中自由活动。当动物能够耐受抚摸后，将小鼠置于手掌中持续三分钟，然后用拇指和食指轻轻捏住动物颈部背部的皮肤。在接下来的适应步骤中，捏住小鼠颈部皮肤使其离地悬空30秒。随后让动物在笼盖上休息30秒，再重复一次该操作。现在练习经鼻给药的抓握方法：首先用惯用手的拇指和食指抓住小鼠的尾巴，然后用中指、无名指和小指轻轻将动物身体的下半部分固定在笼壁上。让小鼠轻轻抓住笼条，将身体适度拉直，以便更好地抓取颈背部皮肤。用非优势手的拇指和中指捏住小鼠颈肩部后方的颈背部皮肤，用力提起上背部的松弛皮肤，使其在肩胛骨区域形成一个帐篷状。然后迅速将非优势手的食指尽可能靠近小鼠鼻部的位置压住其头部，并向后拉紧皮肤。同时，将拇指和中指沿着背部向头部方向滑动，以达到最佳固定位置。理想情况下，小鼠的头部应无法垂直或水平移动。在接下来的操作中，按照刚刚演示的方法进行鼻部夹持。此次将动物倒置，使其腹侧朝向天花板，颈部与地面平行。当小鼠已适应倒置的经鼻给药握持方法后，可练习短暂地将带有空吸头的微量移液器靠近每个鼻孔。最后，先向单侧鼻孔给予6 µL生理盐水，下一次操作时再向双侧鼻孔给药，具体操作步骤详见下一节所述的经鼻给药方法。在开始经鼻给药前，首先应将鼠笼和给药器械摆放妥当，以便于取用。然后将第一只小鼠从笼中取出，使用刚刚演示的鼻内握持法抓取动物。接着，用惯用手将六微升药物吸入微量移液器中。将装有药物的移液器尖端以45度角靠近小鼠左侧鼻孔。然后缓慢推出药物，在吸头尖端形成一小滴，体积约为总量的一半；将液滴置于靠近小鼠鼻孔的位置，使小鼠在吸气时能立即吸入该液滴；在小鼠吸入第一滴后约两到三秒，将吸头中剩余的药物推出，形成另一小滴，通过同侧鼻孔再次吸入；保持小鼠此体位15秒，随后以相同方式对

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科研

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Medicine

医学

清醒小鼠滴鼻的CNS药物治疗管理

对作用于中枢神经系统的药物进行全面的临床前测试，通常需要评估和比较不同给药途径下的药物生物分布。本文在小鼠中展示了三种常用的全身给药方法（静脉注射、腹腔注射和口服）以及一种局部给药方法（对流增强输送）。...

啮齿类动物模型中治疗中枢神经系统疾病的全身与局部药物递送

本文展示了两种截然不同的注射方法：1）脑内注射（脑室内注射）和...

通过脑室内（ICV）和静脉内（IV）注射在小鼠中递送治疗剂

神经元反应的电生理表征对于理解脑功能以及指导通路示踪染料的放置具有重要意义。然而，许多研究是在麻醉动物中进行的。为了在无麻醉条件下理解脑功能，我们建立了一种在清醒小鼠中记录神经元反应特性并注射染料的方法。...

清醒小鼠的制备以记录神经反应和注射示踪剂

本视频展示了将携带溶瘤病毒的治疗性神经干细胞通过鼻内递送至脑肿瘤小鼠模型的方法。这种非侵入性的干细胞鼻内给药方式可绕过血脑屏障，促进干细胞向脑内肿瘤部位的递送，从而实现治疗目的。...

小鼠模型中治疗性神经干细胞（NSCs）的鼻内递送：一种将携带溶瘤病毒的NSCs靶向递送至脑肿瘤小鼠模型的实验方法

来源：Shahror, R. A. et. al., 利用磁共振成像追踪经鼻递送后在创伤性脑损伤小鼠模型中分布的超顺磁性氧化铁标记间充质干细胞。J. Vis. Exp. (2019)本视频展示了在小鼠模型中进行鼻内间充质干细胞（MSC）递送的方法。MSC...

小鼠创伤性脑损伤模型中的鼻内间充质干细胞递送

来源：Ullah, I., et.al. 一种用于小鼠经鼻递送siRNA至中枢神经系统时固定体位的装置。J. Vis. Exp. (2019)本视频展示了一种精确的经鼻给药技术，用于通过特制的定位装置将靶向神经元的肽-siRNA 复合物递送至小鼠脑部。将麻醉后的小鼠固定于头朝下并前倾的位置，以优化 siRNA 的吸入效果并防止其流入肺部。靶向肽可促进神经元中受体介导的摄取，从而实现脑内 siRNA...

使用定位装置将siRNA递送至小鼠脑部的鼻内给药方法

来源：Kanazawa, T., et al. 在吸入麻醉下评估鼻脑药物递送的新型鼻内给药方法。J. Vis. Exp.

通过移液器和反向插管法在小鼠中进行鼻内给药以实现鼻脑药物递送

由于干细胞具有内在的肿瘤趋向性，它们作为治疗脑肿瘤的载体具有广阔前景。非侵入性的经鼻干细胞递送可绕过血脑屏障，在临床转化方面展现出巨大潜力。本文总结了在胶质瘤小鼠模型中经鼻干细胞递送的基本原理。...

小鼠模型中通过鼻内递送治疗性干细胞至胶质母细胞瘤

本文介绍了两种在吸入麻醉下对实验动物进行稳定经鼻给药的新方法，这些方法可最大限度地减少动物的生理应激。同时，我们还描述了一种利用放射性标记的[14C]-菊粉（一种水溶性大分子的模型底物）通过鼻-脑通路定量评估药物在脑内分布水平的方法。...

用于评估鼻腔至脑部药物递送的吸入麻醉下鼻内给药新方法

本文介绍了一种使用小鼠定位装置的实验方案，该装置可实现小鼠在经鼻给予靶向脑部的肽-siRNA...

用于小鼠中枢神经系统鼻内递送siRNA时的小鼠定位装置

学习清醒小鼠滴鼻给药技术，通过改良抓握法固定头部，实现中枢神经系统靶向递送。该方法无需麻醉，可重复给药，适用于神经疾病药物开发的长期研究。

清醒小鼠中枢神经系统治疗药物的鼻内给药

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