细菌性前列腺炎小鼠模型的测量触觉异常

该程序的总体目标是测量由前列腺细菌感染引起的小鼠触觉异常性疼痛。这是通过首先准备细菌悬浮液以安装到麻醉下的雄性小鼠中来实现的。第二步是轻轻挤出小鼠的阴茎，然后进行尿道内导管插入术。

接下来，细菌被滴注并引发小鼠前列腺的上行性感染。最后一步是测量感染后的触觉异常性疼痛。最终，对应用于骨盆区域的 vray 纤维的反应频率增加用于显示骨盆区域对细菌性前列腺炎的反应增强 elo DIA。

与激素诱导的路径前列腺炎或自身免疫性前列腺炎等现有方法相比，该技术的主要优势在于，如果它使用临床上不相关的细菌和对前列腺疾病发病机制非常重要的自然上行感染方法，通常，刚接触这种方法的个体会因为无法始终如一地记录对 vray 纤维刺激的积极反应而挣扎。本协议中的所有程序必须根据机构和政府指南执行。使用标准方法在一天中的固定时间进行牵涉痛觉过敏和触觉异常性疼痛的测试，由一名实验员测试所有动物。

应利用群体盲法测试来对抗动物模型中基于行为的疼痛测试的局限性。为了获得实验中所有动物的基线测量值，首先将 5 到 7 周龄的雄性小鼠置于测试室 30 分钟，然后将每只小鼠放入带有不锈钢丝网格地板的单独有机玻璃室中，以测试触觉异常性疼痛。将单根 von Fray 细丝以 0.04、0.16、0.4、1.0 和 4.0 克的力涂抹在前列腺附近的下腹部区域。

以增加力度顺序应用每根细丝 1 到 2 秒，刺激之间至少间隔 5 秒，总共 10 次。注意刺激该区域内的不同区域，以避免脱敏或缠绕效应。三种类型的行为被认为是对细丝刺激的积极反应。

腹部 1 次急剧回缩，2 次，立即舔或抓挠细丝刺激区域。三。跳转将响应频率计算为积极响应的百分比，并将数据报告为响应的平均百分比。频率加减去标准误差。

具有超过 25 个阳性基线反应的动物被排除在研究之外，以检查异常性疼痛反应的特异性。在骨盆区域测试后立即通过将 von Frey 细丝涂抹在后孔的种植区域直到细丝略微弯曲来测试孔区域的触觉异常性疼痛反应。按升序测试细丝，直到观察到定义为急剧退出或舔舐测试孔的阳性反应。

观察到阳性反应后，使用较弱的细丝以识别力最大但未引起反应的纤维。首先，通过将聚乙烯导管插入 30 号针头的针座来准备导管，该针头连接到一个 1.5 至 2 厘米的玻璃汉密尔顿注射器，该注射器在有机玻璃室中用 1 至 4% 的氟进行麻醉后装有细菌悬浮液。转移量到鼻锥背侧朝下以维持麻醉，通过施加轻柔的压力挤压阴茎。

然后用棉签将大量人工泪液作为润滑剂涂抹在尿道入口处。小心地将导管插入尿道。然后通过缓慢减压注射器的柱塞，将 10 微升含有 1 乘以 10 的 PBS 引入 8 个 CP 1 细菌中。

一旦细菌悬浮液给药，小心地取出导管。将鼠标放回麻醉室 15 分钟，以允许细菌附着并防止立即排尿。15 分钟过后，将鼠标放回笼中，并在接下来的 24 小时内进行监控。

在适当的时间间隔重复测试牵涉痛觉过敏和触觉异常性疼痛反应。建议在感染后第 3、7、14、21 和 28 天进行检测。触觉 EAL 使用五种校准力的 Von Fray 细丝测量其对骨盆区域机械刺激的反应。

数据以阳性反应的平均百分比报告。在细菌安装前和感染后第 7、14、21 和 28 天及以上的加负标准误差表明，与基线相比，感染后第 7 至 28 天的反应频率显着增加，对于在 UPEC 感染的所有细丝测试，而不是小鼠。每个 PID 的响应百分比计算为相对于基线响应对所有纤维的总响应。

看完这个视频，你应该对如何在雄性小鼠中引发细菌性前列腺炎有一个很好的了解，然后进行行为测试以测量这些小鼠的盆腔触觉 nia。