1.2: 酶标仪的介绍

酶标仪是一种应用广泛的仪器，它可以同时测量许多样品，就好像在同一时间进行很多小型实验。

这种仪器与多孔板，如96孔板结合使用。

无论在酶标仪内进行哪种实验，通常都要用到标准曲线来得到实验样品的数值，也包括正负对照的数值。

酶标仪有不同的形状、大小和设置。许多酶标仪都有多种模式，允许进行许多不同的分析。这些模式包括不同类型的测量，例如测定光吸收、物理荧光和化学荧光。

多孔板是酶标仪的一个部分，用于盛放要进行测量的样品。这些多孔板可以是不同的大小，不同的孔底部类型，以及不同的孔数。如何选取多孔板取决于分析类型的需要。

托盘用于将96孔板送进酶标仪。

通常用一个计算机界面来操作酶标仪，并控制它的设置和参数，例如波长和模式。酶标仪软件有一个图表式的用户界面来显示多孔板，这样您可以选择哪些孔有盛放实验样品。

多道移液器通常用于上样多孔板。溶液槽用来盛放多道移液器将上样的溶液。有时也会使用单道移液器来上样。

实验样品和标准样品通常要上样两个或三个重复，来避免移液中产生的误差。这里您看到的是在板中上样了三个重复。

标准曲线采用的是已知浓度的样品，它们产生不同的光吸收值。这些吸收值将会用于绘制一个最吻合线的标准曲线图。

空白对照用于确定与实验无关，仅来自于稀释缓冲液本身的测量值。这些数值被称之为本底。空白对照不含任何实验样品。

正对照用于确定分析过程是否正确。它会给出一个好结果。负对照则是一个对照值，应该检测不到任何数值或变化。它不应当有任何读取结果。

多孔板准备好后，就可以放入酶标仪中。为防止样品测量错误或多孔板放入方向错误，要注意将孔板以正确的方向摆放在托盘里。并且也不要用力将托盘推入或拉出酶标仪。

托盘放置好后，读板前在软件上设置好仪器参数，如模式、波长、和孔上样顺序。

参数设置好之后，开始读板，然后软件会产生酶标仪读出的数值。

读板之后，计算空白对照的平均值作为本底，从包括标准曲线样品在内的所有实验样品的读数中减去这个本底值。

读取数值后，标准样品的已知浓度和各自对应的测量值，也就是这里的光吸收值会被用来作图。作图时，采用线性回归来计算最佳的标准曲线。这个可以很容易用制表软件得到。

决定系数，在统计学上用来表明标准曲线是否能够准确预测数据点。它应该在0.90到0.99之间，0.99被认为是最佳数值，表明标准曲线能够准确反映数据。

使用最佳的标准曲线，我们能够计算每个孔的实验样品或者对照样品的浓度值。计算方法是将光吸收值设为Y，而后通过公式推导，得到浓度值X。浓度值还可以这样推导:在Y轴上找出光吸收值，而后划线到标准曲线，再向下划线到X轴得到浓度值。

许多类型的酶标仪测定的是光吸收值。所谓光吸收值指的是:被物体吸收的光和透过物体的光的比值的对数。

例如Bradford检测，就是一种读取光吸收的酶标仪检测法。蛋白质样品先和Bradford试剂混合，然后加到多孔板上。这种试剂可以和样品中的蛋白质结合，而后改变光吸收的峰值。

在读取物理荧光的检测中，荧光染料先被特定波长的光来激活，然后荧光染料进入激发状态，释放出不同波长的光。

使用光敏感试剂时，要保证避光，以避免光漂白而造成实验失败。

化学荧光检测是通过化学反应发光，通常要用到荧光素酶。荧光素酶的来源有很多种，例如萤火虫。在荧光素酶反应中，当荧光素酶遇到氧、ATP和镁离子，就会发出化学荧光。

化学荧光检测有许多不同的应用。例如，它可用于检测肿瘤中活性氧的产生和类型。

酶标仪的其它应用还包括使用384孔板和1536孔板的高通量分析。在这些检测中，多孔板是通过机器人来装载。它不是通常意义上的机器人，而是一种被程序设定、来非常精确地操作实验样品的自动仪器。

您刚观看的是JoVE对酶标仪的简介。本短片中我们演示了:什么是酶标仪;如何使用;如何操作;如何阐释酶标仪的数据以及酶标仪的一些应用。

感谢您的观看。