Name: 鉴定转基因鱼的完整的大脑中的神经元的电活动记录 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 学习在完整鱼脑制备中记录转基因鱼GnRH神经元的电活动。该方法使用膜片钳技术，在保留完整神经回路的情况下分析动作电位发放频率和膜电位变化，为神经内分泌学研究提供重要工具。

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我们感谢林梦真博士和董媛女士提供的技术协助。本工作获得了美国国立卫生研究院资助项目HD053767（子合同授予NLW）以及加州大学洛杉矶分校生理学系和研究副校长办公室资金的支持（NLW）。

1. 成年青鳉大脑的解剖
<ol>
	<li>将成年雄性或雌性鱼（图1A）浸入5 ml MS-222（150 mg/L，pH 7.4）中进行麻醉；待鳃部运动停止后等待数分钟，再进行断头。所有操作均经加州大学洛杉矶分校机构动物护理与使用委员会批准。</li>
	<li>在直径60 mm的培养皿中，用剪刀于鱼生理盐水中在鳃盖后端处将鱼断头。</li>
	<li>将鱼头转移至一个直径35 mm、盛有鱼生理盐水的培养皿中，皿底铺有Sylgard，并设有凹槽以固定鱼头用于脑组织解剖；用昆虫针将鱼头背侧朝上固定。</li>
	<li>用精细剪刀小心沿颅骨背侧边缘剪开，再用镊子轻轻取下颅骨，完全暴露脑的背侧部分，包括脊髓前部。</li>
	<li>用尖头镊子轻轻提起脊髓，用精细剪刀切断脑腹侧的双侧连接神经：包括脑神经、脊神经和视神经，以及脑前部的嗅神经。</li>
	<li>将完整解剖出的脑组织转移至盛有鱼生理盐水的新培养皿中，在显微镜下仔细检查，确保整个脑组织（包括垂体）完整无损，无任何切割或穿刺损伤。受损的脑组织不得用于实验。</li>
</ol>
2. 在记录室中安装脑组织
<ol>
	<li>用针头将少量氰基丙烯酸酯或其他快干胶滴在记录室中央，并将胶水涂抹至约1 cm2的范围。</li>
	<li>迅速转移脑组织，并将其腹面朝上固定在胶水上。</li>
	<li>加入1 ml鱼类生理盐水，使记录室充满并完全覆盖脑组织。以至少200 μl/min的流速持续灌注通入氧气的鱼类生理盐水。</li>
	<li>使用精细镊子小心去除脑记录区域表面的脑膜。</li>
</ol>
3. 电生理学
<ol>
	<li>动作电位发放的松散贴附记录
	<ol>
		<li>玻璃微电极（6-10 MΩ）采用硼硅酸盐玻璃毛细管（1B150F-4，World Precision Instruments）使用电极拉制仪制备例如 Sutter P-87）中，并用松散贴片记录液在电极内回填至一半高度。</li>
		<li>使用配备有冷却电荷耦合器件（CCD）相机的直立荧光显微镜，通过10倍物镜寻找表达GFP的TN-GnRH3神经元图1B），然后使用40倍水浸物镜（图1C位于嗅球腹侧表面或其附近，紧邻端脑前方。</li>
		<li>切换至提供显微镜实时图像的视频监视器，以定位TN-GnRH3神经元簇（图1C).</li>
		<li>将微电极置于浴液中，使电极尖端位于目标神经元上方。对微电极施加持续的轻微正压，以防止其堵塞，并轻柔地用电极尖端接近目标神经元。</li>
		<li>使用 AxoGraph 软件和 Axoclamp 200B 放大器（Axon Instruments）在电压钳模式下检查并监测电极电阻。当从视频监视器上可见电极尖端已到达神经元表面，且从 AxoGraph 显示中观察到电阻发生轻微变化时，释放正压，必要时施加轻微负压，以在神经元上形成低电阻封接&lt;100 MΩ</li>
		<li>切换至电流钳模式，持续记录膜电位，期间不施加任何电流输入，必要时调整电压量程和记录速率。数据由 Powerlab 软件（ADInstruments Inc.）采集并分析。</li>
		<li>在任何处理前，用正常鱼用生理盐水记录约5分钟的基础电活动图 2A）。药物、激素、肽类的浴式灌流 等等加入鱼生理盐水后，以200 μl/min的速率持续灌注，随后用正常鱼生理盐水进行洗脱 5, 6, 11.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>全细胞膜电位记录 
	全细胞膜片钳电生理实验步骤与上述细胞外游离膜片记录步骤3.1.1至3.1.4相同，之后操作流程相应改变：
	<ol>
		<li>在电压钳模式下检查并监测电极电阻。当从视频监视器上观察到电极尖端已接触神经元表面，同时从示波器上观察到电阻发生轻微变化时，释放正压并施加轻微负压，以在神经元上形成高阻封接（约 3 GΩ）。通过嘴部施加轻柔吸力以破裂封接区域的膜，此时将观察到电阻突然下降至约 120–250 MΩ。</li>
		<li>切换至电流钳模式，持续记录膜电位，期间不施加任何电流输入，必要时调整电压刻度和记录速率。</li>
		<li>在进行任何处理前，按照上述3.1.7步骤所述，在正常鱼用生理盐水中记录约5分钟的基础电活动。图2B).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Kah, O., Lethimonier, C., Lareyre, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gonadotrophin-releasing+hormone+%28GnRH%29+in+the+animal+kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Soc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) in the animal kingdom.</a> J. Soc. Biol. 198 (1), 53-60 (2004).</li>
<li>Ramakrishnan, S., Wayne, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+cues+from+conspecifics+alter+electrical+activity+of+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+in+the+terminal+nerve+via+visual+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Social cues from conspecifics alter electrical activity of gonadotropin-releasing hormone neurons in the terminal nerve via visual signals.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 297 (1), R135-R141 (2009).</li>
<li>Abe, H., Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+neuromodulation+by+a+nonhypophysiotropic+GnRH+system+controlling+motivation+of+reproductive+behavior+in+the+teleost%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of neuromodulation by a nonhypophysiotropic GnRH system controlling motivation of reproductive behavior in the teleost.</a> 57 (6), 665-674 (2011).</li>
<li>Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrodotoxin-resistant+persistent+Na%2B+current+underlying+pacemaker+potentials+of+fish+gonadotrophin-releasing+hormone+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tetrodotoxin-resistant persistent Na+ current underlying pacemaker potentials of fish gonadotrophin-releasing hormone neurones.</a> J. Physiol. 482 (Pt. 1), 1-6 (1995).</li>
<li>Zhao, Y., Wayne, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Kisspeptin1+on+Electrical+Activity+of+an+Extrahypothalamic+Population+of+Gonadotropin-Releasing+Hormone+Neurons+in+Medaka%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Kisspeptin1 on Electrical Activity of an Extrahypothalamic Population of Gonadotropin-Releasing Hormone Neurons in Medaka.</a> PLoS One. 7 (5), e37909(2012).</li>
<li>Wayne, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+electrophysiology+of+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+that+express+green+fluorescent+protein+in+the+terminal+nerve+of+transgenic+medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Whole-cell electrophysiology of gonadotropin-releasing hormone neurons that express green fluorescent protein in the terminal nerve of transgenic medaka (Oryzias latipes).</a> Biol. Reprod. 73 (6), 1228-1234 (2005).</li>
<li>Okubo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forebrain+gonadotropin-releasing+hormone+neuronal+development%3A+insights+from+transgenic+medaka+and+the+relevance+to+X-linked+Kallmann+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Forebrain gonadotropin-releasing hormone neuronal development: insights from transgenic medaka and the relevance to X-linked Kallmann syndrome.</a> Endocrinology. 147 (3), 1076-1084 (2006).</li>
<li>Okubo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+form+of+gonadotropin-releasing+hormone+in+the+medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">A novel form of gonadotropin-releasing hormone in the medaka, Oryzias latipes.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 276 (1), 298-303 (2000).</li>
<li>Ramakrishnan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquisition+of+spontaneous+electrical+activity+during+embryonic+development+of+gonadotropin-releasing+hormone-3+neurons+located+in+the+terminal+nerve+of+transgenic+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Gen.+Comp.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Acquisition of spontaneous electrical activity during embryonic development of gonadotropin-releasing hormone-3 neurons located in the terminal nerve of transgenic zebrafish (Danio rerio).</a> Gen. Comp. Endocrinol. 168 (3), 401-407 (2010).</li>
<li>Abraham, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gonadotropin-releasing+hormone-3+neuron+ablation+in+zebrafish%3A+effects+on+neurogenesis%2C+neuronal+migration%2C+and+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Targeted gonadotropin-releasing hormone-3 neuron ablation in zebrafish: effects on neurogenesis, neuronal migration, and reproduction.</a> Endocrinology. 151 (1), 332-340 (2010).</li>
<li>Wayne, N. L., Kuwahara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-endorphin+alters+electrical+activity+of+gonadotropin+releasing+hormone+neurons+located+in+the+terminal+nerve+of+the+teleost+medaka+%28Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Gen.+Comp.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Beta-endorphin alters electrical activity of gonadotropin releasing hormone neurons located in the terminal nerve of the teleost medaka (Oryzias latipes.</a> Gen. Comp. Endocrinol. 150 (1), 41-47 (2007).</li>
<li>Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+types+of+gonadotrophin-releasing+hormone+neurones+and+steroid-sensitive+sexually+dimorphic+kisspeptin+neurones+in+teleosts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroendocrinol%22%5BJournal%5D)">Three types of gonadotrophin-releasing hormone neurones and steroid-sensitive sexually dimorphic kisspeptin neurones in teleosts.</a> J. Neuroendocrinol. 21 (4), 334-338 (2009).</li>
<li>Molleman, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMolleman%2C+A+%22Patch+Clamping%3A+An+Introductory+Guide+To+Patch+Clamp+Electrophysiology%22">Patch Clamping: An Introductory Guide To Patch Clamp Electrophysiology</a>. , Wiley & Sons. England. (2003).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

GnRH3:GFP 转基因鱼类为研究神经元整合与调控的神经生理学机制提供了独特的模型，这些机制直接或间接参与生殖相关行为的中枢调控3, 8-10。该模型系统的一个显著优势在于，许多表达 GFP 的 GnRH3 神经元位于脑腹侧表面附近，使得在不破坏神经回路的前提下，相对容易地对这些神经元进行电生理记录6, 9, 11, 12（图 1B 和 图 1C；图 3A 和 图 3B）。在本视频中，我们展示了在青鳉鱼完整成年脑中对 TN-GnRH3 神经元进行的松散封接（loose-patch）和全细胞（whole-cell）记录。TN-GnRH3 神经元表现出持续性或节律性自发动作电位发放，频率为 0.5–6 Hz。在自发放电频率方面未观察到明显的性别差异5，但在胚胎发育过程中，GnRH3 神经元的电活动表现出显著的发育变化9。松散封接与全细胞电生理记录在方法学上各有优缺点。松散封接在技术上比全细胞记录更简便...

<table><tbody><tr><td>显微镜</td><td>Olympus</td><td></td><td>BX50W (直立式)</td></tr><tr><td>放大器</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>Axoclamp 200B </td></tr><tr><td>A-D转换器</td><td>Computer Interference Corp.</td><td></td><td>Digidata ITC-18 </td></tr><tr><td>制冷CCD相机</td><td>PCO Computer Optics</td><td></td><td>Sensicam</td></tr><tr><td>氙灯</td><td>Sutter Instruments Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GFP滤光片组</td><td>Chroma Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>成像软件</td><td>Intelligent Imaging Innovations</td><td></td><td>Slidebook软件 </td></tr><tr><td>电生理数据采集软件</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>Axograph软件 </td></tr><tr><td>电生理数据采集软件</td><td>AD Instruments Inc.</td><td></td><td>PowerLab </td></tr><tr><td>电生理用前置放大器</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>CV 203BU </td></tr><tr><td>微操纵器</td><td>Sutter Instrument Co</td><td>MP-285</td><td></td></tr><tr><td>记录室平台</td><td>Warner Instrument Corp.</td><td></td><td>P1 </td></tr><tr><td>记录室</td><td>Warner Instrument Corp.</td><td></td><td>RC-26G </td></tr><tr><td>电极拉制仪</td><td>Sutter instruments</td><td></td><td>P87 </td></tr><tr><td>电极拉制仪用灯丝</td><td>Sutter Instruments</td><td>FB330B</td><td>3.0 mm宽槽灯丝</td></tr><tr><td>1.5 mm玻璃毛细管</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B150-4</td><td>用于记录的微&amp;#8211;电极</td></tr><tr><td>注射器</td><td>Becton Dickinson</td><td>309586</td><td>3 ml</td></tr><tr><td>MS-222 </td><td>Sigma</td><td>E10521-10G</td><td>氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐</td></tr><tr><td>鱼用生理盐水</td><td></td><td></td><td>mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 1.2 MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 10 HEPES </td></tr><tr><td>电极液（松散贴附式记录）</td><td></td><td></td><td>mM: 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 1.3 MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 10 HEPES; 10 葡萄糖 </td></tr><tr><td>电极液（全细胞记录）</td><td></td><td></td><td>mM: 112.5 K-葡萄糖酸盐; NaCl; 17.5 KCl; 0.5 CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 1 MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0.1 亮肽素; 10 磷酸肌酸 </td></tr></tbody></table>

在转基因鱼类完整大脑中记录特定神经元的电活动

Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish

通过使用可在完整脑组织中进行研究的模式系统，能够显著增强对调控复杂行为的神经回路细胞生理学的理解，在这种系统中，中枢神经系统（CNS）的神经回路保持完整。我们采用转基因鱼类，其中促性腺激素释放激素（GnRH）神经元通过绿色荧光蛋白进行基因标记，以便在完整脑组织中识别这些神经元。鱼类具有多个GnRH神经元群体，其功能取决于它们在脑内的位置以及所表达的GnRH基因1。本演示聚焦于位于端神经（TN）并与嗅球相关联的GnRH3神经元，使用的是转基因青鳉鱼的完整脑组织（图1B 和 C）。研究表明，青鳉鱼的TN-GnRH3神经元具有神经调质功能，可将来自外界环境的信息传递至中枢神经系统；它们并不像众所周知的下丘脑GnRH1神经元那样直接参与垂体-性腺功能的调控2, 3。TN-GnRH3神经元自发动作电位的紧张性放电模式是一种固有特性4-6，其放电频率可受到同种个体视觉线索2 和神经肽kisspeptin 15 的调节。在本视频中，我们使用一种稳定的转基因青鳉鱼品系，其TN-GnRH3神经元表达一种包含Gnrh3 基因启动子区域与增强型绿色荧光蛋白融合的转基因7，向您展示如何在全脑制备中识别神经元并监测其电活动6。

在分离的青鳉鱼脑中，GFP标记的TN-GnRH3神经元双侧簇的示例如图1B和图1C所示。每个簇包含约8-10个GnRH神经元。在电流钳模式（I=0）下记录目标TN-GnRH3神经元的自发性神经活动，其典型的放电频率为0.5-6 Hz。动作电位的放电模式通常表现为紧张性或节律性放电，峰间间隔相对规则。图2显示了典型记录轨迹（2A：松散封接；2B：全细胞记录）。
这种实验方法在记录成年斑马鱼前脑中GFP标记的GnRH神经元时同样取得了成功（图3A和图3B）。在离体的完整脑组织中，神经元的电活动通过与上述青鳉实验类似的方法进行记录，包括松散贴附记录（图3C）和全细胞记录（图3D）。与青鳉的TN-GnRH神经元不同，斑马鱼位于视前区、腹侧端脑和下丘脑的GnRH神经元的自发动作电位发放模式通常不规则。
<p class="jove_content" ...

在本视频中，我们将演示如何在保留复杂神经环路的全脑标本中记录已鉴定单个神经元的电活动。我们使用转基因鱼，其中促性腺激素释放激素（GnRH）神经元通过荧光蛋白进行基因标记，以便在完整脑标本中识别这些神经元。

通过使用能够开展此项研究的模型系统，可以更深入地理解调控复杂行为的神经环路的细胞生理学。

本实验的总体目标是从完整鱼类脑组织中记录神经元的电活动。首先，使用 MS 222 对一条 4 至 6 个月大的转基因 meca 鱼进行麻醉，随后解剖取出其脑组织。接着，用记录电极接触由 GFP 标记的特定目标神经元，并通过松膜片钳或全细胞膜片钳电生理技术记录该神经元的电活动。最终，实验结果可显示在完整大脑中，不同处理条件下动作电位放电频率或膜电位的变化。与现有的细胞电生理、培养或脑片制备等方法相比，该技术的主要优势在于，我们能够在神经回路完整的全脑制备中表征神经元的电生理特性。尽管该方法为生殖神经内分泌学研究提供了重要见解，但也可通过使用斑马鱼等模式生物，应用于其他神经系统的研究，例如神经元调控动机与情感行为的研究。本演示使用了转基因斑马鱼，其中 GnRH3 神经元通过基因标记与 GFP 相连。首先，将成年斑马鱼浸入 5 毫升 MS-222 溶液中进行麻醉。当鳃部运动停止后几分钟内，将其转移至含有鱼用生理盐水的 60 毫米培养皿中。随后用剪刀在颅骨后端将鱼体断头。将头部转移至一个直径为35毫米的培养皿中，培养皿内装有一半鱼用生理盐水，并铺有yl护垫。培养皿底部需带有中央凹陷，用于放置头部，使其背侧朝上，并用昆虫针固定。用精细剪刀小心地沿颅骨周围切开其背侧部分。然后用镊子轻轻去除颅骨，暴露脑的背侧部分，包括脊髓的前部。接着用尖头镊子轻轻提起脊髓，再用精细剪刀切断双侧的连接神经。这包括切断颅神经、脊神经、腹侧视神经以及前嗅神经。将完全解剖出的脑组织置于盛有新鲜鱼类生理盐水的新培养皿中，在显微镜下仔细检查，确保整个脑组织和垂体完整无损，未被切割或刺破。若发现脑组织有损伤，应弃用并重新使用解剖针开始操作。在记录室中央滴一滴少量速效胶，如氰基丙烯酸酯。将胶水滴均匀涂抹至约一平方厘米的面积。随后迅速将脑组织转移至胶水上。将其腹侧朝上固定。现在向记录室中加入约一毫升鱼用生理盐水，以覆盖脑组织。使用尖头镊子，小心地从记录区域的脑表面向前逐步去除脑膜。以每分钟至少 200 微升的速度，持续用充氧的鱼类生理盐水灌注脑组织。制备 6 至 10 个电阻为兆欧级的玻璃微电极，并用松散的膜片钳记录液将其后向填充至约一半位置。使用配备冷却 CCD 相机的直立荧光显微镜，从 10 倍物镜开始，寻找表达 GFP 的终末神经 gnRH3 神经元。然后切换至40倍物镜，定位位于嗅球腹侧表面或其前方靠近头端的位置。现在切换至显微镜实时成像的视频监视器。该神经元簇包含8到10个GnRH神经元。将微电极置入记录室的灌流液中，使电极尖端位于目标神经元上方。施加持续的轻微正压，以防止微电极堵塞。用电极尖端轻柔地接近目标神经元，同时使用Axo graft软件检查并监测电极阻抗。在电压钳模式下使用封接测试时，当电极尖端接触神经元表面时，此时电极电阻会发生轻微变化。必要时释放正压，并施加轻微负压以形成低电阻封接。获得良好记录最关键的一步是选择一个干净的神经元突起，这有助于在电极与细胞膜之间形成理想的封接。现在切换到电流钳模式。打开 Chart（PowerLab 程序），开始连续记录膜电位，不施加任何电流输入；必要时调整电压的显示尺度和记录速率，在施加任何处理前，先用正常鱼用任氏液记录约五分钟的基础电活动。药物、激素、肽类等试剂应通过灌流方式加入脑组织标本，灌流速度为 200 微升每分钟。在定位细胞后，使用普通鱼用生理盐水进行冲洗期，并在电压钳模式下检查和监测电极电阻。当电极尖端位于神经元表面且电极电阻发生轻微变化时，释放正压并施加少量负压，以在神经元上形成高阻封接。轻轻用嘴吸液。使封接的细胞膜破裂。当膜破裂时，电阻会立即下降至约 120 到 250 兆欧。现在切换到电流钳模式，使用图表连续记录膜电位，不施加任何电流输入。根据需要再次调整电压的刻度和记录速率。在正常鱼用生理盐水中记录约五分钟的电活动基线后，施加处理，随后进行洗脱期。moca终末神经 GnRH3 神经元的自发性电活动在电流钳模式下记录。典型的放电频率为0.5至6赫兹动作电位。电位通常以强直性或节律性模式发放，峰电位间间隔相对规则，峰电位间的膜电位平均约为负48毫伏。该实验方法还可成功记录位于成年转基因动物前脑中GFP标记的促性腺激素释放激素神经元。在转基因斑马鱼离体完整脑中记录神经元电活动。斑马鱼神经元电活动的记录方法与DACA类似，采用松散贴片法。相同技术也可实现全细胞记录。与三叉终末神经中的GnRH神经元不同，斑马鱼位于前嗅区、腹侧头区及下丘脑的GnRH神经元在自发动作电位放电模式上通常表现为不规则。若操作得当，掌握该技术后可在一小时内完成一次持续15分钟的记录。祝你好运。

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鉴定转基因鱼的完整的大脑中的神经元的电活动记录

在本视频中，提供了多色共聚焦延时成像和靶向细胞消融的技术。延时成像用于监测多种目标细胞类型的行为...

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逆行荧光标记可实现对已鉴定神经元的靶向细胞外单单位记录 体内

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自由游动鱼类中通过可移动四极电极进行神经元无线电生理记录

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通过去除头骨和皮肤实现清醒斑马鱼幼虫和幼鱼全脑组织的活体成像

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体内 共聚焦荧光成像技术用于观察部分固定幼年斑马鱼在感觉刺激下诱导的神经活动

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在转基因鱼类完整大脑中记录特定神经元的电活动

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