Name: 哺乳期鼠害使用慢性社会压力型号产后抑郁症 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: 了解慢性社会压力模型在哺乳期啮齿动物产后抑郁症研究中的应用。该方法通过引入陌生雄性入侵者诱导社会压力，评估母性行为和后代发育，为产后情绪障碍的预防和治疗提供可靠研究工具。

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我们感谢Chantal Lau在评估乳汁摄入量方面的建议，Klaus Miczek在社会应激使用方面的指导，以及Sheryl Goodman对慢性社会应激临床相关性的反馈。本方案的开发得到了NICHD K99/R00 HD059943项目对BCN的资助支持。

成年雌性斯普拉格-道利大鼠在本实验动物设施中进行繁殖，每窝幼仔调整为8至10只，性别比例均衡，母性行为及攻击性测试均在大鼠的饲养笼内进行。实验动物在整个研究期间始终处于同一房间内。在妊娠第20或21天，将由透明有机玻璃制成的高约2.5厘米的笼内隔板放入笼中，将笼子均分为四个象限，以防止幼仔被放回后爬回母鼠身边。在分娩当天（哺乳第1天），通过直接观察幼仔的归巢、理毛、哺乳以及母鼠自梳理等行为，确认所有母鼠均表现出典型的母性行为。入侵雄鼠为体型较小或相近的斯普拉格-道利雄性大鼠，且雌性大鼠不会被同一只雄性重复测试。母性行为及母性攻击行为在哺乳第2、9和16天上午进行视频记录，具体方法如下所述：
<ol>
	<li>将幼崽从母鼠笼中移出，分别称量雄性和雌性幼崽的体重，并将整窝幼崽放入清洁的暂养笼中，持续60分钟。</li>
	<li>在60分钟分离期结束后，将雄性和雌性幼崽分别再次称重，然后将其放回母鼠的原笼中，并尽可能均匀地将幼崽分配到笼子的三个非筑巢象限区域。在重新引入幼崽前开始视频记录，以确保完整记录所有幼崽的回收行为。</li>
	<li>连续录像记录母鼠育幼行为30分钟。允许母鼠与其幼崽继续互动90分钟。在将幼崽放回母鼠笼中120分钟（30分钟录像加额外90分钟）后，再次称量幼崽体重，以确定两小时内摄入的乳汁量。在行为测试日，每次哺乳120分钟后，从每窝中安乐死一只幼崽，以从其胃中提取乳汁样本。采集幼崽胃内乳汁的目的是评估母鼠乳汁中激素及其他因子的水平，这些因子可能介导慢性社会应激对子代行为和/或生理的影响。</li>
	<li>称重后将剩余幼崽放回母鼠身边，并向笼中引入一只体型较小或相近的陌生雄性入侵者，持续30分钟，以检测母鼠攻击行为。在引入入侵者时即开始视频记录，确保所有攻击行为均被记录。对于对照组动物，30分钟记录结束后即移除陌生雄鼠；对于慢性社会应激组动物，雄性入侵者继续保留30分钟。在第2至16天期间的非行为测试日，向慢性社会应激组母鼠笼中放入陌生雄性入侵者一小时，但不进行录像记录。若出现受伤情况，则立即终止社会应激暴露，受伤动物接受治疗并从实验中剔除。</li>
	<li>在第2、9和16天下午3点，向母鼠笼中添加一瓶含0.02%糖精的饮水瓶，瓶子位置在左右两侧交替放置。在下午3点和次日早上8点分别称量糖精水瓶和普通水瓶的重量，以计算糖精偏好程度。</li>
	<li>幼崽于第23天断奶，此时将母鼠安乐死，采集基础状态下的血浆样本，并取出脑组织，用于对与生理和行为相关的关键核团进行基因表达分析。</li>
</ol>
母性行为评分
使用Odlog行为分析软件对表1和表2中描述的母性照料与攻击行为进行视频评分。每种行为均分配一个按键，当动物执行某项行为时持续按住对应按键，以记录该行为的持续时间。行为发生频率为每种行为对应的按键次数之和。该软件可生成两个数据文件：一个是包含每5秒时间戳的完整数据文件，另一个是汇总表格，其中列出了30分钟录像期间定义的各项行为的总频率和总持续时间。在母性攻击行为视频中，同时对母性攻击和母性照料行为进行评分，因为当雄性入侵者处于笼内时，母鼠仍会对幼崽表现出母性反应。
将幼崽放入笼子后不久，母鼠会逐一将每只幼崽叼回巢中。当所有幼崽均被带回巢内时，记为一次完整的归巢行为。通常情况下，完整归巢仅记分一次；但若母鼠在首次完成全部归巢后，又将整窝幼崽转移至新的位置，则可记分两次。每当母鼠用口或爪子整理筑巢材料时，即对筑巢行为进行记分。幼崽理毛行为包括母鼠用爪子舔舐或整理幼崽毛发。哺乳记分始于母鼠保持静止的蹲伏或俯卧哺乳姿势达10秒之后，以确保幼崽有时间开始吸乳。总的母性照料时长为筑巢、幼崽理毛和哺乳行为持续时间的总和；但若需重点关注针对幼崽的行为，可仅统计理毛和哺乳两项。自我理毛定义为母鼠用自己的口或爪子整理自身毛发。活动性记分适用于任何不属于上述已定义行为的运动行为。
母性攻击行为包括攻击、咬、踢和按压。攻击定义为母鼠对入侵雄鼠进行击打或扑压。当母鼠使用牙齿咬入侵者时记为咬行为，当母鼠用四肢或身体将雄鼠压住时记为按压行为。总攻击行为次数为攻击、咬、踢和按压行为的总和。
统计学
通过单尾t检验比较对照组和慢性社会应激（CSS）组母鼠在哺乳期各天的母性行为、乳汁摄入量及糖精偏好，以评估CSS在各单独天数上的效应。哺乳期第2、9、16天的生长数据采用单尾t检验进行比较，比较指标为第2天的体重（克）或相对于第2天的体重增长百分比（第9天或第16天体重 / 第2天体重 × 100）。OXT mRNA表达水平以三个内参基因（β-actin、次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH））的均值进行标准化。各脑区中每种肽或受体的相对OXT mRNA表达水平采用独立t检验进行比较。所有图表结果均以组均值 ± 标准误（SEM）表示，统计学显著性水平设定为p ≤ 0.05。

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</ol>

作者无竞争性财务利益。

在稳定的行为学研究环境中，采用CSS范式获得的数据最有可能具有一致性和可重复性。有观点认为，在各类研究中，尤其是行为学研究中，实验动物的饲养和管理是需要更加仔细考虑的一个组成部分。可能引入混杂因素的饲养和管理操作包括：使用从供应商处运输来的怀孕母鼠作为起始动物、在行为学测试期间每天将母鼠在不同房间之间转移、行为学测试时间在一天中的不一致、母鼠过度暴露于新的视觉、听觉或嗅觉刺激、未使用饲养笼进行行为学测试、筑巢材料缺乏或不一致，以及日常动物护理不良（例如，长期接触潮湿或被污染的垫料）。此外，在哺乳期间加入其他行为学测试（例如，强迫游泳测试或高架十字迷宫）也可能引入混杂因素。然而，使用新的笼具环境或其他急性应激源可能有助于揭示在饲养笼测试中不明显的行为差异，这可能是由于慢性应激、急性应激与行为之间潜在的相互作用所致。
目前描述的方案适用于 Sprague Dawley 大鼠，但其他品系或物种可能需要对该方案进行修改。例如，必须使用屏障保护幼仔，防止具有高度攻击性的 Long Evans 雄性个体造成伤害。实施社会应激的关键操作包括：使用体型较小或体型相近的雄性个体，并让雄性入侵者在第 2 天与具有高度攻击性的哺乳期雌性首次接触，以确保雄性被击败并表现出持续的顺从行为。如果雄性攻击了幼仔，应将其从实验中剔除，因为其很可能继续攻击后续的幼仔。为降低雄性过度攻击的可能性，一种可选方法是在研究开始前使其被体型更大的雄性击败。在行为评分方面，必须对大多数行为的发生频率和持续时间进行记录和分析，以全面反映行为特征；若采用较短的记录间隔或瞬时观察法，可能无法收集到足够数据，难以充分验证假设。评分人员可通过观看先前已评分的行为视频进行系统且一致的培训。
CSS模型的主要应用是测试当前和新型药物对产后抑郁和焦虑的治疗效果。该模型的另一个用途是研究常见实践和操作对母体护理行为的影响，例如剖宫产、引产以及各种哺乳时间表。鉴于目前关于压力对哺乳影响的研究较少，进一步探究压力对哺乳的潜在影响将具有重要价值。尽管采集母鼠乳汁样本可能有用，但样本采集过程中需要使用麻醉剂和外源性催产素（OXT），这会引入多种行为和生理上的混杂因素，因此关于压力对哺乳影响的研究可能难以同时进行行为学分析。利用CSS模型开展跨代研究具有广阔前景，这些研究还可包括对成年后代施加各种应激处理，以探讨生命早期应激与后期应激暴露之间可能存在的相互作用。
CSS 模型及相关行为测试的重要性在于其在动物行为学和转化研究中的相关性。目前认为，现有抑郁症和焦虑症治疗方法效果不佳，原因在于动物研究与人类研究之间缺乏行为学上的重叠。动物的抑郁和焦虑模型通常依赖强烈的物理应激源或高度筛选的品系，这或许可以解释为何当前的抗抑郁治疗对重度抑郁最为有效。诸如束缚以及暴露于多种随机应激源等物理应激方式，并不能模拟人类常见的生活经历。慢性轻度应激范式中采用随机暴露的原理是为了防止动物产生适应。尽管这是一个重要的考虑因素，但更理想的情况是采用一种动物不会适应且更接近人类抑郁和焦虑病因的实验方案，例如社会性应激。除了推动使用更具行为学相关性的应激源外，CSS 模型的另一优势在于采用了一项与快感缺失相关的有意义测量指标——母性行为。这是一种由强烈奖赏介导的行为，可直接反映抑郁母亲对后代产生的不良影响。在抑郁与焦虑研究中，同时结合行为学相关的应激源和对快感缺失的测量，将特别有助于识别安全有效的预防措施和治疗方法。
社会应激模型在雄性及未产雌性动物中已成功应用多年，将该研究拓展至哺乳期雌性动物，有望为产后抑郁症以及与早期生活应激相关的疾病（在雄性和雌性中均存在）提供大量新颖的数据。人们推测，在抑郁和焦虑研究中更多地采用行为学动物模型，将有助于收集到更具行为学意义和转化价值、变异性更小且可重复性更高的行为学数据，从而推动更有效治疗方法的开发。

情绪障碍（包括产后抑郁症）的病因通常涉及长期应激的暴露1,2。尽管母亲抑郁会对育儿行为3以及子代的心理发育4产生负面影响，但目前绝大多数关于抑郁和焦虑的研究都集中在雄性动物和人类身上。虽然已有少数利用慢性应激建立的母性行为改变动物模型，但大多数模型具有显著的生理学成分，可能并不适用于人类常见的慢性心理社会应激，或主要集中于产前阶段。在大鼠妊娠期间施加慢性束缚应激，在某些研究中会增加母性照料和焦虑水平，并降低母性攻击性5，但在其他研究中却会减少母性照料行为6。束缚应激是一种强烈的生理应激源7，且部分研究结果与临床上产后抑郁症患者母亲表现出的母性照料减退现象不一致4。产前超轻微应激不会影响对幼崽的照料行为，但可降低母性攻击性8。超轻微应激范式在数天内采用多种随机化的应激因素（如笼具倾斜30度、光照周期颠倒、限制活动、整夜照明以及脏笼等），但各个单一因素的具体影响往往尚不明确。超轻微应激范式中使用的某些应激因素（例如光照周期颠倒和整夜照明）很可能独立于应激效应之外直接干扰母性照料行为，因为大鼠的母性照料行为具有昼夜节律性。潮湿垫料对幼崽构成显著的热应激，在幼龄仔鼠中可在不到24小时内导致死亡（个人观察）。
近期的啮齿类动物研究主要关注使用生态学上相关联的应激源（如慢性社会应激，CSS），来研究应激对子代行为及情绪障碍的影响9-13。为了建立一种具有生态学意义的产后抑郁模型，减少所用应激源的生理成分，并获得稳定的行为学和生理学结果，本实验室专注于社会应激的应用。虽然慢性社会挫败已被有效用作雄性啮齿类动物社会应激诱导抑郁的模型14，但如果使用雄性入侵者，则该模型对许多母体啮齿类动物而言并不符合生态学实际，因为单次社会挫败通常会导致雄性入侵者对整窝幼仔进行同类相食。然而，让哺乳期雌性短暂接触陌生雄性入侵者而不发生社会挫败，即可引发强烈的应激行为和内分泌反应15-18。另有证据表明，哺乳期的慢性应激（包括暴露于雄性入侵者）会直接损害乳汁分泌19,20，从而可能影响幼仔的生长发育。母鼠中的这些结果得到了未交配雌性研究的支持：在后者中，慢性社会不稳定（交替的隔离与拥挤环境）可增加下丘脑-垂体-肾上腺轴的活动性11,21，改变体温调节，减少蔗糖摄入和食物摄取，并已被提出作为女性抑郁症的动物模型11。自我理毛行为是焦虑的一种测量指标22,23，也对社会应激操作敏感24,25。
哺乳期的慢性社会应激（CSS）可破坏母体行为，并抑制母体及其子代的生长发育。在哺乳期间每天引入陌生雄性入侵者会减少母体的育幼行为，增加母体对陌生雄性入侵者的攻击性以及自我理毛行为，同时抑制母体和子代的生长10。这些效应表明，CSS是一种符合动物自然行为特征且有效的模型，可用于研究涉及母体护理受损、快感缺失、焦虑升高以及子代生长迟缓等特征的情绪障碍，例如产后抑郁。母体护理行为和子代相关数据均提示，CSS可能对后代产生持久影响；关于慢性应激对母体行为影响的研究支持这一假说：慢性应激对母体行为的作用是由激素介导的（Murgatroyd 和 Nephew，2012）。此外，近期来自经历应激母体的成年雌性子代的数据支持另一假说：CSS作为一种早期生活应激形式，会引起中枢催产素（OXT）和催乳素（PRL）的改变，进而导致哺乳行为效率下降12。CSS模型补充了其他有效的应激诱导母体行为紊乱模型，例如限制筑巢材料26,27和母婴分离28,29。CSS模型的独特之处在于，它在啮齿类动物和人类中均具有行为学相关性，生理应激成分相对较小，并且可与其他生命阶段的类似应激源（如社会挫败、慢性社会不稳定）联合使用。
开发慢性社会应激（CSS）范式的主要目标是采用一种在行为学和临床意义上均相关的应激源，诱导快感缺失（通过母体照料行为和糖精偏好来衡量），增加焦虑相关的行为学指标，并损害幼崽的生理、行为和/或内分泌发育。该模型的目的是用于评估当前及新型的产后抑郁和焦虑治疗方法与干预措施。

<table><tbody><tr><td>ODlog 视频分析</td><td>Macropod 软件</td><td>版本 2.7.2</td><td>适用于 PC 或 Mac</td></tr><tr><td>录像设备</td><td>Sony</td><td>HDR-CX130</td><td></td></tr></tbody></table>

利用慢性社会应激建立哺乳期啮齿类动物的产后抑郁模型

Using Chronic Social Stress to Model Postpartum Depression in Lactating Rodents

长期压力暴露是抑郁障碍的可靠预测因素，而社会压力在动物和人类中均是一种常见的、符合自然行为学的相关压力源。然而，许多抑郁症动物模型是在雄性动物中建立的，不适用于或对产后雌性动物的研究无效。最近的研究报道了哺乳期长期社会压力（一种符合自然行为学且有效的压力刺激）对母体行为、生长以及行为神经内分泌学具有显著影响。本文将描述这一长期社会压力范式，即反复让哺乳期雌性动物暴露于陌生雄性入侵者，并评估该模型对行为、生理和神经内分泌方面的影响。长期社会压力（CSS）是研究压力对母体及其后代乃至未来几代行为与生理影响的有价值模型。将幼崽暴露于长期社会压力（CSS）也可作为一种早期生命压力，对行为、生理和神经内分泌产生长期影响。

暴露于慢性社会应激（CSS）的哺乳期母鼠在哺乳第9天的30分钟视频记录中，其对幼鼠的理毛持续时间及总体母性照料行为均减少（Nephew and Bridges 2011， 图2。在哺乳的第16天，攻击行为和自我理毛行为（焦虑的指标）增加（Nephew 和 Bridges 2011， 图3). CSS 亲代母鼠的幼鼠在哺乳期第 9 天和第 16 天的乳汁摄入量比对照组母鼠的幼鼠减少 40%（图4），且在这两天幼崽的生长受到抑制（Nephew 和 Bridges，2011）。 图5。在第16天，经CSS处理的母鼠对糖精的偏好降低（图6). 
在经CSS处理的母鼠所产的成年F1代雌性子代中，第2天和第16天的乳汁摄入量（图7）和糖精偏好（图8）均下降。这些母鼠的视上核中催产素基因表达降低（图9），在室旁核、中央杏仁核和内侧杏仁核中也观察到类似结果（Murgatroyd 和 Nephew，2012）。
<table border="1">
<tbody>
 	<tr>
 	<td>行为</td>
 <td>描述</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> retrieval（取回）</td>
 <td>将幼崽叼回巢中</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Full Retrieval（完全取回）</td>
 <td>取回全部8只幼崽所需的时间</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Nesting（筑巢）</td>
 <td>用口或爪子在巢区整理垫料</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Pup Grooming（幼崽理毛）</td>
 <td>舔舐或用爪子整理幼崽毛发</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Nursing（哺乳）</td>
 <td>母鼠呈蹲伏或俯卧姿势进行哺乳时</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Total Maternal Care（总育幼行为）</td>
 <td>Nesting（筑巢）、Pup Grooming（幼崽理毛）和 Nursing（哺乳）的总持续时间</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Self Grooming（自我理毛）</td>
 <td>母鼠用口或爪子整理自身毛发</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td> Activity（活动）</td>
 <td>与上述行为无关的任何运动行为</td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>
表1. 母体护理。
<table border="1">
<tbody>
	<tr>
 	<td>行为</td>
 <td>描述</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>攻击</td>
 <td>对入侵雄性进行拳击或扑击</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>啃咬</td>
 <td>使用牙齿攻击入侵雄性</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>踢击</td>
 <td>使用足部击打入侵雄性，类似于兔子的踢腿动作</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>按压固定</td>
 <td>母性雌性用肢体或身体将雄性压住使其无法动弹</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>总攻击行为</td>
 <td>攻击、啃咬、踢击和按压固定持续时间的总和</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
表2. 母性攻击行为。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig1.jpg" alt="母体行为实验示意图：称量幼崽、分离、记录照料行为、攻击性分析。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. 慢性社会应激实验方案的时间安排。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig2.jpg" alt="母体护理柱状图；对照组与应激组；第9天；幼崽理毛、哺乳时间；p=0.06。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图2"> 
图2. 慢性社会应激在泌乳第9天减少母体护理行为。 在连续7天内，每天将泌乳期母鼠暴露于一只新的雄性入侵者面前一小时，导致其在30分钟母体行为录像期间用于幼崽理毛及总体母体护理（包括幼崽理毛、哺乳和筑巢行为）的时间减少（Nephew 和 Bridges，2011年）。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 9–10。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig3.jpg" alt="行为反应分析，柱状图；应激组与对照组；持续时间、频率；研究数据。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图3"> 
图3. 慢性社会应激在哺乳第16天增加母性攻击行为和焦虑水平。 在14天内，每天将哺乳期母鼠暴露于一只新的雄性入侵者面前一小时，可增加攻击行为和自我理毛行为的持续时间 (A) 和频率 (B)，并在30分钟的母性攻击行为视频记录中降低运动活性（Nephew 和 Bridges，2011）。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 9–10。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig4.jpg" alt="母乳摄入量对比图表；对照组与应激组；第2、9、16天；柱状图；科学数据。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图4"> 
图4. 慢性社会应激降低子代的乳汁摄入量。 在哺乳第9天和第16天，经历应激的母鼠所产幼崽在两小时哺乳期内的总乳汁摄入量减少。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 12–14。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig5.jpg" alt="幼鼠体重增长曲线；对照组与应激组在第9天和第16天的比较；体重增长百分比。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图5"> 
图5. 哺乳期第9天和第16天，慢性社会应激减弱幼鼠生长。 在哺乳期连续15天使母鼠暴露于慢性社会应激，会导致幼鼠生长减缓（Nephew 和 Bridges，2011）。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 9–10。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig6.jpg" alt="比较应激组与对照组在第2、9、16天糖精偏好的柱状图" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图6"> 
图6. 慢性社交应激导致哺乳第16天糖精摄入量减少。 持续15天的社交应激降低了在17小时时间内糖精相对于水的摄入百分比。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 9–10。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig7.jpg" alt="F1代乳汁摄入量柱状图；对照组与早期生活应激组比较；第2、9、16天对比；以克为单位测量。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图7"> 
图7. 慢性早期生活社交应激降低F1代母鼠后代的乳汁摄入量。 F1代母鼠后代（每窝8-10只幼鼠）在2小时哺乳间隔内的总乳汁摄入量在哺乳第2天和第16天均有所减少。*表示对照组与应激组之间差异显著，p&lt;0.05，n = 12-14。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig8.jpg" alt="糖精偏好柱状图；百分比摄入量在第2、9、16天的变化；统计分析结果。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图8"> 
图8. 慢性早期生活社会应激导致哺乳期第2天和第16天糖精摄入量减少。 持续15天的社会应激降低了在17小时期间内糖精相对于水的摄入百分比。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 12–14。
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig9.jpg" alt="OXT 相对表达量柱状图，对照组与应激条件下的RNA分析结果。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图9"> 
图9. 慢性早期生活社会应激降低视上核中催产素mRNA的表达水平。 暴露于慢性社会应激的母鼠所产的成年雌性子代，其中枢催产素活性减弱，且与哺乳效率下降相关（Murgatroyd 和 Nephew，2012）。OXT mRNA 的表达水平以三个内参基因（β-actin、次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH））的均值进行标准化。* 表示对照组与应激组之间存在显著差异，p&lt;0.05，n = 16–18。

本文描述了使用慢性同域入侵者社会应激作为一种符合动物行为学的范式，以模拟哺乳期啮齿类动物的产后抑郁和焦虑。

长期暴露于慢性压力是抑郁症的可靠预测因素，而社会压力在动物中是一种常见的、具有生态学意义的压力源……

以下实验的总体目标是建立一种具有生态学意义的啮齿类动物模型，用于研究产后情绪障碍。首先，让幼鼠经历一段时间的母鼠分离。随后将幼鼠放回原笼，记录母鼠的照料行为以诱发社会应激。引入一只新的雄性入侵者。记录母性攻击行为30分钟或更长时间，以诱导慢性社会应激。我们的结果表明，慢性社会应激是一种有效且可靠的抑制母性照料行为的范式。与现有的应激诱导抑郁模型（如反复束缚、社会挫败或慢性轻度应激范式）相比，该技术的另一优势在于，这些模型通常采用随机组合的多种应激源，可能引入显著的实验操作或生理干扰因素，而社会应激则不会。采用慢性社会应激范式可能有助于发现更有效的预防措施和治疗方法，以应对母亲及其后代的情绪障碍。实验所用成年雌性小鼠为本实验室自行繁育，所有行为测试均在动物的饲养笼内进行，且在整个研究过程中始终位于同一房间内。在妊娠第20或21天，将由透明有机玻璃制成的1英寸高笼内隔板放入动物饲养笼中。这些隔板将笼子分隔成四个象限，以防止幼仔在实验过程中爬回母鼠身边。在分娩当天，确认所有母鼠均表现出典型的母性行为。通过直接观察幼崽回收、理毛、哺乳以及自我理毛行为。本研究中使用的入侵雄性小鼠体型较小或与实验对象体型相似。Sprague Dawley 小鼠的雄性和雌性个体不会被同一只雄性重复呈现。使用与雌鼠体型相近的雄鼠有助于防止攻击行为和食仔现象。在笼子附近安装摄像机，以便在实验过程中记录动物行为。开始时，将仔鼠从母鼠身边取出，分别称量雄性和雌性仔鼠的体重，然后将其放入清洁的暂养笼中静置60分钟。在完成60分钟的分离后，再次称量幼鼠的体重。在将幼鼠放回其原笼之前，开始视频记录，以确保完整捕捉所有幼鼠回收行为。将幼鼠尽可能均匀地分布在笼子的三个非测试象限中。在此重新引入后，记录母鼠的育幼行为30分钟。育幼行为通常包括将幼崽带回巢穴、筑巢行为、对幼崽或自身的理毛行为，以及哺乳。当母鼠与幼崽累计互动达到120分钟时，再次称量幼崽体重，以确定乳汁摄入量。在连续两小时的时间段内，在哺乳期结束后的行为测试日，每窝幼仔中将有一只被实施安乐死。为了从胃中提取乳汁样本，我们将幼仔送回母鼠身边。称重后，在开始视频记录的情况下，将一只体型较小或体型相似的陌生雄性入侵者引入笼中，持续30分钟，以检测母性攻击行为。母体攻击行为通常包括母鼠对入侵雄鼠的攻击、撕咬、踢打或将其按住。对于对照组动物，在产后第2、9和16天，雄鼠在母体攻击行为录像记录30分钟后即被移除；而对于慢性社会应激组动物，雄鼠每天与母鼠共处60分钟。在产后第2天至第16天共15天的实验期间，于第2、9和16天的前30分钟进行录像记录，方法与对照组相同。在测试的第2、9和16天，于下午3:00将装有0.02%糖精溶液的瓶子交替放置于母鼠饲养笼的右侧或左侧。随后对瓶子进行称重，以确定糖精偏好。幼鼠在第23天断奶，母鼠被实施安乐死以获取样品用于进一步分析。经历慢性社会应激的成年雌性子代母鼠之后会生产自己的幼鼠。为进一步研究，使用 odd log 行为分析软件对研究期间记录的母性行为进行评分。所有母性攻击行为视频均需对母性攻击和母性照料行为进行评分。该程序可生成一个包含以5秒为时间间隔的带时间戳的完整数据文件，以及一个汇总表格，其中列出了在30分钟录像期间所选行为的总发生频率和持续时间。在15天内，每天将哺乳期母鼠暴露于一只雄性入侵鼠中一小时，由此引发的慢性社会应激导致幼鼠理毛时间及总体母性照料行为持续减少。在哺乳第9天至第16天期间，母鼠自身理毛行为增加，表明其焦虑和攻击性行为上升。相应地，与对照组相比，幼鼠在哺乳第9天和第16天的乳汁摄入量减少，且在这两天幼鼠的生长均显著受到抑制。社会应激还降低了幼崽对糖精的偏好，这是成年雌性动物通过测试哺乳量来评估快感缺失的一个指标。经历社会应激的母鼠所产的子代在哺乳期第2天和第16天的糖精偏好均降低，早期生命阶段经历慢性社会应激的F1代母鼠也表现出更低的糖精偏好。在哺乳期第2天和第16天，早期生命应激F1代母鼠的视上核中催产素mRNA表达受到抑制，室旁核中也观察到类似效应。在建立慢性社会应激方案时，重要的是尽量减少额外应激源的暴露，例如带幼仔的母鼠在运输过程中受到的干扰、过度的人为干扰、脏污的笼具，以及其他有害的声学或工厂刺激。稳定的饲养环境和一致的动物饲养管理将获得最为一致的数据。按照本方案，可在多个时间点采集多种组织样本，以研究慢性社会应激对其他器官系统的影响。此外，可以在多个生活史阶段施加社会应激源，以研究个体对应激诱导疾病的易感性与适应力。

using-chronic-social-stress-to-model-postpartum-depression-lactating

Research

科研

JoVE Journal

Behavior

行为

哺乳期鼠害使用慢性社会压力型号产后抑郁症

本文描述并采用了一种建立小鼠亚慢性轻度社交挫败应激模型的方法，用于研究抑郁症的致病特征，包括体重增加后出现的类似多食和多饮的症状。...

一种用于研究应激诱导行为与生理功能缺陷的亚慢性轻度社交挫败应激小鼠模型

不可预测的慢性轻度应激（UCMS）方案是一种经过验证的研究慢性应激及相关抑郁症状所导致的行为和生理变化的方法。实施八周UCMS方案可诱导任一性别的啮齿类动物出现行为改变及不良健康后果。...

一种用于诱发啮齿类动物抑郁症状、行为改变及负面健康后果的不可预测性慢性轻度应激方案

本文介绍了小鼠中不可预测的慢性温和应激方案。该方案可诱导长期的类抑郁表型，并可用于评估潜在抗抑郁药物在逆转行为学及神经分子水平类抑郁缺陷方面的有效性。...

小鼠快感缺失诱导的不可预测性慢性轻度应激方案

本文提供了一种使用固定装置对慢性固定小鼠诱导类抑郁行为的简化且标准化的实验方案。此外，还介绍了用于验证抑郁状态诱导的行为学和生理学技术。...

一种用于诱导小鼠抑郁样行为的慢性制动应激方案

Y迷宫屏障任务是一种行为测试，用于检测个体为获得奖励而付出努力的动机。本文中，我们讨论了将该行为测试应用于多种经过充分验证的慢性应激模型，包括慢性皮质酮处理和社会挫败应激，以及一种新型的慢性非选择性社会挫败应激（CNSDS），后者在雌性动物中同样有效。...

慢性应激改变小鼠在Y迷宫障碍任务中的努力相关选择行为

慢性心理社会应激（CGS）范式在小鼠妊娠期间采用临床相关应激源，以模拟母亲及婴儿的精神疾病。本文提供了应用CGS范式及后续评估方法的逐步操作流程，以验证该模型的有效性。...

使用妊娠期心理社会应激的小鼠模型作为母体与婴儿精神疾病具有转化相关性的研究范式

本文介绍了一种由社会隔离（SI）诱导的焦虑小鼠模型，该模型利用野生型C56BL/6J小鼠，在最少操作干预且无创的情况下诱导应激和类似焦虑的行为。该模型反映了现代社会生活中社会隔离的模式，是研究焦虑及相关疾病的理想模型。...

社会隔离模型：一种非侵入性啮齿类动物应激与焦虑模型

本方案描述了一种动物模型，用于研究生命早期逆境（由贫瘠的环境和出生后早期阶段不可预测的母体照料所引发）对大脑发育及未来精神障碍风险的影响。...

有限垫料和筑巢作为小鼠早期生活逆境的模型

本方案详细介绍了如何对青春期早期雄性小鼠进行为期10天的慢性社交挫败应激处理，以在超过60%的小鼠成年后诱导出持久的社交回避行为。...

青春期早期雄性小鼠的慢性社交挫败应激

通过整合四种日常社会应激源，本研究描述了一种用于雌性C57BL/6J小鼠精神疾病研究的多重整合社会应激（MISS）模型。经过连续十天重复暴露于MISS后，小鼠表现出类似抑郁和焦虑的表型，从而为研究女性精神疾病提供了一种自然的、基于病因的动物模型。...

一种用于雌性C57BL/6J小鼠精神疾病研究的多重整合社会应激模型

了解慢性社会压力模型在哺乳期啮齿动物产后抑郁症研究中的应用。该方法通过引入陌生雄性入侵者诱导社会压力，评估母性行为和后代发育，为产后情绪障碍的预防和治疗提供可靠研究工具。

利用慢性社会应激建立哺乳期啮齿类动物的产后抑郁模型

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