评估抗小鼠动脉功能使用压力Myography

以下实验的总体目标是确定小鼠耐药动脉在近生理条件下体外的实时血管反应性。这是通过将血管的一小部分安装在两个微型插管上并将其保持在生理管腔压力来实现的。然后用 α 1 受体激动剂去氧肾上腺素收缩血管，以研究任何药物扩张血管的能力。

用乙酰胆碱挑战收缩的血管，评估其通过内皮依赖性机制实时扩张的能力。结果显示了响应乙酰胆碱的管腔直径百分比变化，并验证了 SGC α 1 缺陷导致内皮依赖性血管舒张受损。与现有方法（如金属丝乳房 X 线摄影）相比，该技术的主要优点是压力乳房 X 线摄影允许表征小微血管，这些微血管比较大的电导血管更与维持血压稳态相关。

这种方法可以帮助回答心血管领域的关键问题，例如高血压，其中宏观抵抗血管起着关键作用。首先用戊巴比妥对小鼠实施安乐死。现在打开腹腔并开始解剖肠系膜组织。

现在确定第三级肠系膜动脉并将其与结缔组织和脂肪组织分离。当血管中没有血液时，在微血管水平区分动脉和静脉是有问题的。因此，在完整的动物中执行此作是可取的。

接下来，切下一段 2 到 3 毫米长的第三级肠系膜动脉，并将其放入装有堆的培养皿中。PSS 缓冲区。动脉段不应包含任何分支。

通过入口和出口阀轻轻填充插管来准备肌腔 堆 PSS 溶液 从 10 毫升注射器中，请注意过大的压力会损坏连接到插管的脆弱换能器。将套管塞紧后，关闭两个瓣膜。现在将分离的动脉段转移到腔室中，并将血管的一端安装到右侧套管上。

使用注射器冲洗，用细尼龙缝合线小心地系扎，然后通过入口阀将堆溶液填充到容器中。现在将容器的另一端安装到左侧套管上，并用尼龙缝合线将套管固定在容器上。用最多 10 毫升的堆溶液填充腔室。

在注射器的帮助下，通过入口阀轻轻推动堆溶液，检查是否有泄漏。现在将腔室放在摄像机下方。启动氧气并将腔室加热至 37 摄氏度，同时入口阀关闭，从第一个堆溶液储液罐连接到 P 一根管。

让任何气泡和溶液通过试管，直到试管中没有气泡。然后打开阀门。用管 P 2 连接到腔室的左阀。

来自压力调节器，确保整个系统没有气泡或泄漏。转到 myo 界面面板或软件中的压力菜单，然后在关闭流量的同时打开泵。打开程序并单击 collect。

现在可以监测和分析血管管腔、血管直径和壁厚。要逐渐提高腔内压力，请选择 P 1 压力并输入一系列上升压力。5 到 60 毫米的汞容器的值，有时会在压力增加时扭曲或卷曲，因此请借助垂直或纵向微型定位器相应地调整张力或应变。

一旦压力达到 60 毫米，浴槽温度为 37 摄氏度，在平衡期间将容器平衡至少 45 分钟，最多一小时。用预热的堆更换一次浴液。现在动脉切片已平衡，在 10 摄氏度下施用 37 毫升氯化钾去极化溶液。

平滑肌将完全去极化并实现最大收缩。获得稳定的收缩后，用堆积溶液冲洗浴槽 3 次，间隔 10 分钟。现在检查血管的活力和内皮的完整性。

首先，通过添加去氧肾上腺素来预收缩容器，以趋向于每升负 5 摩尔。当获得稳定的收缩时，在最后一次乙酰胆碱剂量后，通过依次添加递增剂量的乙酰胆碱（从 10 到负、9 到 10 到负 5 摩尔/升）来执行累积浓度血管舒张反应曲线。用堆清洗制剂 3 次，间隔 10 分钟。

现在，通过从记录的描摹中应用每升含有 2 毫摩尔 EGTA 的无钙 PSS 来确定被动管腔直径。测量每个剂量反应的管腔直径，这将用于计算所有参数。将乙酰胆碱松弛反应表示为激动剂和无钙缓冲液治疗之间的比较，即去氧肾上腺素诱导的收缩对管腔直径的改变程度。

状态压力肌层扫描用于研究从野生型和 SGC α 1 敲除小鼠分离的肠系膜抵抗动脉中乙酰胆碱的血管舒张，这些动脉在 S 6 和黑色 6 背景上被去氧肾上腺素预收缩。SGC α 1 缺陷与乙酰胆碱诱导血管舒张的能力降低有关，无论所研究小鼠的遗传背景如何。然而，SGC Alpha 1 缺失小鼠的内皮依赖性松弛在 S 6 背景下比黑色 6 背景更明显受损。

总之，这些发现表明，脉管系统对内皮依赖性松弛的敏感性降低可能导致 SGC Alpha one 敲除小鼠的菌株特异性高血压一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在一两个小时内完成。除了此程序之外，还可以同时对生命血管进行共聚焦显微镜等其他方法。例如，这将允许测量细胞内铁浓度，这有助于识别潜在的信号转导机制。