Name: 评估抗小鼠动脉功能使用压力Myography (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: 了解使用压力肌动描记法评估小鼠肠系膜动脉血管舒张功能的技术。该方法可在近生理条件下实时检测血管反应性，为心血管研究提供关键数据。

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作者感谢 Paul Huang 和 Dmitriy Atochin 博士提供 DMT 压力气动显微镜的使用，以及 Binglan Yu 和 Chong Lei 博士提供喂食高脂饮食或标准饮食的小鼠。
资金来源
本研究得到了美国心脏协会的科学家发展资助（10SDG2610313，授予 E. S. Buys）以及哈佛医学院 Eleanor 和 Miles Shore 医学学者50周年奖学金项目（授予 E. S. Buys）的支持。

1. 溶液的配制
<ol>
	<li>500倍EDTA储备液：称取500 mg EDTA-Na2•2H2O，溶于50 ml去离子水中。室温保存。</li>
	<li>KCl去极化溶液。
	<ol>
		<li>配制K10X储备液：3.69 g NaCl、18.64 g KCl、0.36 g无水MgSO4、0.41 g KH2PO4、0.46 g CaCl2•2H2O，溶于250 ml去离子水中。室温保存。</li>
		<li>配制100 ml终浓度为1X的KCl去极化溶液：将0.21 g NaHCO3和0.18 g葡萄糖溶于90 ml去离子水中，加入10 ml K10X储备液，再加入95 μl 500X EDTA溶液，充分混匀。4 °C保存，一周内使用完毕。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>实验当天新鲜配制HEPES-PSS溶液（配制1升）。
	<ol>
		<li>6.96 g NaCl、0.35 g KCl、0.288 g MgSO4•7H2O、0.1605 g KH2PO4、2.38 g HEPES，溶于100 ml去离子水中，标记为A瓶。</li>
		<li>0.312 g CaCl2•2H2O，溶于100 ml去离子水中，标记为B瓶。</li>
		<li>1.25 g NaHCO3、0.991 g葡萄糖，溶于98 ml去离子水中，标记为C瓶。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>向C瓶中加入2 ml 500X EDTA溶液。取一个大烧杯，加入700 ml去离子水，将A、B、C三瓶溶液在持续涡旋混匀的条件下依次倒入大烧杯中，用NaOH调节pH至7.4。</li>
</ol>
2. 使用的药物
<ol>
	<li>去甲肾上腺素（10-2 M）：将 20.37 mg 溶于 10 ml 去离子水中。分装 1 ml，于 -80 °C 保存。实验当天进行系列稀释，获得 10-3、10-4、10-5 和 10-6 mol/L 的溶液。</li>
	<li>乙酰胆碱（10-2 M）：将 18.17 mg 溶于 10 ml 去离子水中。分装 1 ml，于 -80 °C 保存。实验当天进行系列稀释，获得 10-3、10-4、10-5 和 10-6 mol/L 的溶液。</li>
</ol>
3. 小鼠
在整个研究过程中，使用了S6和B6背景的雄性野生型（WT）和sGCα1-/-小鼠。sGCα1-/-小鼠的制备方法如前所述4,5。涉及实验动物（小鼠）的饲养和操作程序均经马萨诸塞州波士顿麻省总医院实验动物护理委员会批准。
4. 肠系膜动脉血管反应性的测量
<ol>
	<li>使用戊巴比妥（200 mg/kg，腹腔注射）处死小鼠。打开腹腔，分离肠系膜组织。分离并取出一段直径约3 mm的肠系膜动脉rd 去除结缔组织和脂肪组织后，将动脉置于预先用95% O₂平衡的冰冻HEPES-PSS溶液中2 / 5% CO₂2 孵育15分钟。从肠系膜动脉上切取2-3 mm长、无分支的血管环。当血管内无血液时，在微血管水平区分动脉与静脉较为困难。因此，我们建议在将血管从动物体内解剖分离之前，先在其仍完整存在于动物体内时进行辨认。</li>
	<li>在压力肌动图仪腔室（DMT Model 110P）中填充玻璃套管&amp;11P 版本 1.31， 图2使用10 ml注射器通过进液阀和出液阀，用HEPES-PSS溶液灌注导管。灌注过程应轻柔谨慎，避免施加过大的压力，以防损坏与导管相连的脆弱传感器。导管灌注完成后，应紧密关闭进液阀和出液阀。</li>
	<li>将血管一端套在右侧套管上，并用一根细尼龙缝线小心扎紧。借助注射器，通过入口阀用HEPES溶液冲洗并灌注血管。将左侧套管移近血管，将血管另一端套上并用尼龙缝线扎紧。向腔室中加入最多10 ml的HEPES溶液。使用注射器通过入口阀轻轻推动HEPES溶液，检查是否有泄漏。</li>
	<li>将腔室安装到肌动描记仪上并置于视频显微镜下。启动腔室的供氧和加热（37 °C）。将进液阀通过管道P1连接至第一份HEPES溶液储液罐，此时保持阀门关闭。让液体和气泡流经管道，直至管道内无气泡残留。打开阀门。</li>
	<li>将腔室的左侧阀门与来自压力调节器的P2管连接。再次检查是否存在气泡。整个系统中不应有任何气泡或泄漏。</li>
	<li>进入 myo-interface 面板或软件中的压力菜单，开启泵并关闭流量。</li>
	<li>打开程序并点击 COLLECT。此时容器应出现在屏幕上（图3通过显微镜上配备的相机观察血管，可实现对血管管腔、血管直径及血管壁厚度的监测与分析。</li>
	<li>通过在肌张力界面面板或程序中选择 P1 压力，逐步调节 P1 阀以升高管腔内压力，并按如下顺序输入压力值：5 mmHg → 10 → 20 → 40 → 60 mmHg。在压力升高过程中，血管有时会出现扭曲或弯曲；此时应借助垂直或纵向微调定位器，相应调整张力或应变图2）。将血管在60 mmHg和37 °C条件下平衡至少45分钟。平衡期间，用预热的HEPES溶液更换一次浴槽液。</li>
	<li>加入10 ml预热至37 °C的KCl去极化溶液至浴槽中，以充分去极化平滑肌细胞并达到最大收缩。在收缩稳定后，每隔10分钟用HEPES溶液冲洗浴槽3次。</li>
	<li>通过去氧肾上腺素（10 μM）加入后产生稳定且可重复的反应，检测血管的活性及内皮完整性。-5 M）和乙酰胆碱（10-5 M）。每10分钟用HEPES溶液冲洗3次。</li>
	<li>加入去氧肾上腺素（10-5 M）使血管预收缩，当获得稳定的收缩状态后，通过依次递增浓度地加入乙酰胆碱（10-9，3 × 10-9, 10-8，3 × 10-8, 10-7，3 × 10-7, 10-6，3 × 10-6，以及10-5 M）。末次给药后，每隔10分钟用HEPES溶液冲洗3次，然后开始新的CRC实验。</li>
	<li>通过施加 Ca 确定被动管腔直径2+含2 mM EGTA的无钙PSS。根据记录的曲线，测量每个剂量反应的管腔直径图4），用于计算所有参数。</li>
	<li>将乙酰胆碱舒张反应表示为与去钙状态下的管腔直径和去甲肾上腺素收缩后的直径之差相比，去甲肾上腺素预收缩后管腔直径变化的百分比，计算公式如下：</li>
	<li>百分比扩张 = 100% × [(Dx - Di)/(D无钙 - Di)]，其中 D 为测得的管腔直径，x、i 和 Ca-free 分别表示在激动剂各剂量（x）下、去氧肾上腺素收缩后的初始直径（i）以及无钙条件下动脉的直径2+无钙缓冲液（Ca-free）。</li>
</ol>
5. 统计学分析
所有连续性测量数据均以均值 ± 标准误（SEM）表示。肠系膜动脉的血管反应性采用重复测量双因素方差分析（two-way ANOVA）进行分析。在所有情况下，P &lt; 0.05 被认为具有统计学显著性。

<ol><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+.Exp%22%5BJournal%5D)">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> J. Vis .Exp. (55), e3119(2011).</li>
<li>Arribas, S. M., Daly, C. J., McGrath, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+vascular+remodeling+by+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurements of vascular remodeling by confocal microscopy.</a> Methods Enzymol. 307, 246-273 (1999).</li>
<li>Lei, C., Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+Nitric+Oxide+Attenuates+the+Adverse+Effects+of+Transfusing+Stored+Syngeneic+Erythrocytes+in+Mice+with+Endothelial+Dysfunction+after+Hemorrhagic+Shock%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Inhaled Nitric Oxide Attenuates the Adverse Effects of Transfusing Stored Syngeneic Erythrocytes in Mice with Endothelial Dysfunction after Hemorrhagic Shock.</a> Anesthesiology. , (2012).</li>
<li>Buys, E. S., Cauwels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((sGC%CE%B11%CE%B21+attenuates+cardiac+dysfunction+and+mortality+in+murine+inflammatory+shock+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">sGCα1β1 attenuates cardiac dysfunction and mortality in murine inflammatory shock models.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297 (2), H654-H663 (2009).</li>
<li>Buys, E. S., Sips, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender-specific+hypertension+and+responsiveness+to+nitric+oxide+in+sGC%CE%B11+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Gender-specific hypertension and responsiveness to nitric oxide in sGCα1 knockout mice.</a> Cardiovasc. Res. 79 (1), 179-186 (2008).</li>
<li>Panza, J. A., Quyyumi, A. A., Brush, J. E., Epstein, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+endothelium-dependent+vascular+relaxation+in+patients+with+essential+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Abnormal endothelium-dependent vascular relaxation in patients with essential hypertension.</a> N. Engl. J. Med. 323 (1), 22-27 (1990).</li>
<li>Huang, P. L., Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+mice+lacking+the+gene+for+endothelial+nitric+oxide+synthase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hypertension in mice lacking the gene for endothelial nitric oxide synthase.</a> Nature. 377 (6546), 239-242 (1995).</li>
<li>Friebe, A., Koesling, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+function+of+NO-sensitive+guanylyl+cyclase%3A+what+we+can+learn+from+genetic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">The function of NO-sensitive guanylyl cyclase: what we can learn from genetic mouse models.</a> Nitric Oxide. 21 (3-4), 149-156 (2009).</li>
<li>Ehret, G. B., Munroe, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variants+in+novel+pathways+influence+blood+pressure+and+cardiovascular+disease+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetic variants in novel pathways influence blood pressure and cardiovascular disease risk.</a> Nature. 478 (7367), 103-109 (2011).</li>
<li>Buys, E. S., Raher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+modifiers+of+hypertension+in+soluble+guanylate+cyclase+alpha1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Genetic modifiers of hypertension in soluble guanylate cyclase alpha1-deficient mice.</a> J. Clin. Invest. 122 (6), 2316-2325 (2012).</li>
<li>Kauffenstein, G., Laher, I., Matrougui, K., Guerineau, N. C., Henrion, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+G+protein-coupled+receptors+in+microvascular+myogenic+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Emerging role of G protein-coupled receptors in microvascular myogenic tone.</a> Cardiovascular Research. 95 (2), 223-232 (2012).</li>
<li>Ruilope, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+2010%3A+Blood+pressure+and+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hypertension in 2010: Blood pressure and the kidney.</a> Nat. Rev. Nephrol. 7 (2), 73-74 (2011).</li>
<li>Michael, S. K., Surks, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li>
<li>Mendelsohn, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+hypertension%2C+the+kidney+is+not+always+the+heart+of+the+matter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">In hypertension, the kidney is not always the heart of the matter.</a> J. Clin. Invest. 115 (4), 840-844 (2005).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

小鼠是许多研究者首选的实验模型，部分原因在于可以对其进行遗传修饰，从而构建人类病理生理学的小鼠模型。小阻力血管（而非较大的传导血管）的血管活性状态在很大程度上决定了整个血管系统中血流的调节11。由于小动物（如小鼠）的阻力动脉尺寸较小，无法使用导丝肌动图仪来研究微血管功能。压力肌动图仪不仅克服了这一限制，还可实现接近生理条件下的血管功能测定。
我们先前报道过，缺乏 sGCα 的雄性小鼠1 在129S6（S6）背景下具有高血压（sGCα1-/-S6) 5 但在C57BL/6（B6）背景下则不出现（sGCα1-/-B6) 4我们假设，这种品系间血压的差异是由于sGCα之间血管反应性的不同所致1-/- B6和S6背景小鼠。利用压力肌动图，我们研究了3种内皮依赖性血管舒张反应rd 肠系膜动脉。乙酰胆碱是一种毒蕈碱受体激动剂，可结合内皮细胞上的受体，通过...

压力肌动图系统用于测量小动脉、小静脉及其他血管的生理功能与特性。将一段完整的小血管段固定在两根细玻璃插管上，并加压至适当的管腔压力，使血管保持其大部分原有特性 体内 特征（图1 和 2）。压力肌动图中的近生理条件反映了 体内 血管床的行为，从而允许研究其内在特性（例如 离体血管的肌源性张力。与通过直接机械耦合至力传感器来评估肌肉收缩的丝线肌动描记术相比，压力肌动描记术具有若干优势 1包括：(i) 可研究定义血管系统总体阻力的微小阻力血管，而钢丝肌动图仪仅限于较大的传导动脉；(ii) 由于无需将钢丝穿过血管腔，内皮损伤的风险降低；(iii) 血管的自然形态得以更好地维持；(iv) 可在较宽范围的压力或剪切应力下研究血管尺寸 2.
研究微血管可能比研究较大的传导动脉更具信息量，有助于理解高血压等心血管疾病中血管张力改变的病理生理学和分子机制。例如，小鼠喂食高脂饮食8周后内皮功能受损的情况可在2nd肠系膜动脉分支次序 3 但不在主动脉环中图3）。压力肌动图的另一个优点在于，加压血管的内在肌源性收缩得以保留，且可研究内皮细胞在此过程中的作用与功能。本文中，我们描述了使用压力肌动图研究小鼠肠系膜三级动脉血管反应性的方法。rd 在NO-cGMP信号传导受损的情况下，阻力动脉的排序。

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>费舍尔科技</td><td>BP358</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>费舍尔科技</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>西格玛</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; </td><td>费舍尔科技</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; </td><td>西格玛</td><td>P3786</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; </td><td>费舍尔科技</td><td>BP328</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>费舍尔科技</td><td>S318</td><td></td></tr><tr><td>D-葡萄糖</td><td>西格玛</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>费舍尔科技</td><td>BP121</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>西格玛</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>去氧肾上腺素</td><td>艾克罗斯有机</td><td>AC20724</td><td></td></tr><tr><td>乙酰胆碱</td><td>西格玛</td><td>A6625</td><td></td></tr><tr><td>压力肌动图系统</td><td>DMT</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

使用压力肌动图评估小鼠阻力动脉功能

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

压力肌动图系统在对小动脉进行功能评估时极为有用，可将血管加压至适宜的跨壁压。压力肌动图所达到的接近生理状态的条件，使得能够深入表征小动脉对药理学和生理学刺激的内在反应，这些反应可外推至 体内 血管床的功能特性。与传统的丝线肌动图仪相比，压力肌动图仪具有多项优势。例如，可在严格控制且符合生理条件的管腔内压力下，对更小的阻力血管进行研究。在此，我们研究了3rd 将肠系膜动脉（3-4 mm长）置于两根连接至加压密封系统的套管上，该系统维持在60 mmHg的恒定压力。肠系膜动脉预先用去氧肾上腺素（phenylephrine）进行收缩处理，随后观察其对乙酰胆碱（acetylcholine）引起的舒张反应。通过视频摄像机持续记录血管的管腔和外径变化，从而实时定量分析去氧肾上腺素引起的血管收缩和乙酰胆碱引起的血管舒张。
	为了验证压力肌动图在研究心血管疾病病因学中的适用性，我们采用系统性高血压小鼠模型评估了内皮依赖性血管功能。在129S6（S6）遗传背景下缺乏可溶性鸟苷酸环化酶α1亚基（sGCα1-/-）的小鼠表现为高血压（sGCα1-/-S6），而在C57BL/6（B6）遗传背景下则不表现高血压（sGCα1-/-B6）。通过压力肌动图技术，我们证明sGCα1缺失会导致内皮依赖性血管舒张功能受损。血管功能障碍在sGCα1-/-S6小鼠中比在sGCα1-/-B6小鼠中更为显著，这可能是导致sGCα1-/-S6小鼠血压高于sGCα1-/-B6小鼠的原因之一。
	压力肌动描记法是一种相对简单但灵敏且具有重要机制研究价值的技术，可用于评估各种刺激对血管收缩和舒张的影响，从而加深我们对心血管疾病潜在机制的理解。

一氧化氮（NO）在人体血压稳态的维持中起着核心作用 6 在动物模型中 7一氧化氮（NO）调控血管平滑肌松弛的能力由可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）介导，sGC 是一种含血红素的异源二聚体酶，可生成 cGMP 8. 近期，在包含 sGCα 的基因座中发现了一种可调节血压的遗传变异1 和 sGCβ1 基因，阐明了sGC在调节人类血压中的相关性 9有趣的是，缺乏α的雄性小鼠1 sGC 的亚基（sGCα）1-/-) 在 129S6 (S6) 背景下具有高血压表型（sGCα1-/-S6) 5 但不在C57BL/6（B6）背景下时1-/-B6) 4我们采用压力肌动图技术研究了从野生型（WT）和sGCα基因敲除小鼠分离出的肠系膜阻力动脉对乙酰胆碱诱导的血管舒张反应。1-/- S6和B6背...

在压力肌动描记术中，将一段完整的小血管段固定在两个微小套管上，并加压至适宜的管腔压力。本文中，我们描述了测定小鼠第3rd C57和sGCα中肠系膜动脉的排序1-/- 使用压力血管造影法的小鼠。

压力肌动图系统在小动脉功能评估中极为有用，可将血管加压至适宜的跨壁压力。

以下实验的总体目标是在接近生理条件的体外环境中，实时测定小鼠阻力动脉的血管反应性。该方法通过将一小段血管固定在两根微导管上，并维持其腔内生理压力来实现。随后，使用α1受体激动剂去氧肾上腺素使血管收缩，以研究任何药物对血管的舒张能力。通过乙酰胆碱刺激狭窄血管，可实时评估其经由内皮依赖性机制的舒张能力。结果显示了血管内径在乙酰胆碱作用下的百分比变化，并证实SGC alpha one缺乏会导致内皮依赖性血管舒张功能受损。与现有的方法（如导丝测压法）相比，该技术的主要优势在于，压力测压法能够对微小的微血管进行表征，而这些微血管在维持血压稳态方面比更大的传导血管更具相关性。该方法有助于回答心血管领域中的关键问题，例如在高血压研究中，大阻力血管起着至关重要的作用。首先使用戊巴比妥处死小鼠。然后打开腹腔，开始分离肠系膜组织。现在识别一支三级肠系膜动脉，并将其从结缔组织和脂肪组织中分离出来。当血管内无血液时，在微血管水平上区分动脉与静脉较为困难，因此在完整动物体内进行此操作更为理想。接下来，截取一段长约2至3毫米的三级肠系膜动脉，将其置于含有大量PSS缓冲液的培养皿中。动脉节段不应包含任何分支。使用10毫升注射器通过入口和出口阀门，用大量PSS溶液缓慢填充肌动蛋白腔室，注意过高的压力可能会损坏连接到套管的脆弱传感器。将套管完全填充后，关闭两个阀门。现在将分离的动脉节段转移至腔室内，并将血管一端套在右侧套管上。使用注射器冲洗并经入口阀向血管内注入足量HEPES溶液，然后用细尼龙缝线小心地将其结扎固定。现在将血管的另一端套在左侧套管上，并用尼龙缝线将套管与血管牢固绑紧。向腔室中加入最多10毫升的HEPES溶液。使用注射器通过入口阀轻轻推动堆溶液，检查是否存在泄漏。然后将腔室置于视频摄像机下。关闭入口阀并将其连接至第一个堆溶液储液罐的P一管，同时启动氧气并加热腔室至37摄氏度。让气泡和溶液通过管道，直至管道中无气泡存在。然后打开阀门。使用管道P2连接至腔室左侧的阀门。从压力调节器引出后，确保整个系统无气泡或泄漏。进入 myo 界面面板或软件中的压力菜单，开启泵的同时关闭流速。打开程序并点击采集。现在可以对血管管腔、血管直径和管壁厚度进行监测和分析。为逐步升高管腔内压力，请选择P1压力并输入一系列递增的压力值。压力从5至60毫米汞柱逐渐升高时，血管有时会发生扭曲或卷曲，因此需借助垂直或纵向微调定位器相应调整张力或应变。当压力达到60毫米且浴槽温度为37摄氏度时，使血管段至少平衡45分钟，最长可达1小时。在平衡期间，用预热的溶液更换一次浴槽溶液。动脉段平衡完成后，加入10毫升37摄氏度的氯化钾去极化溶液。平滑肌将完全去极化并达到最大程度的收缩。在获得稳定的收缩后，每隔10分钟用赫普斯溶液冲洗浴槽三次。现在检查血管的活性以及内皮层的完整性。首先，通过加入去氧肾上腺素使血管预收缩至终浓度为 10⁻⁵ mol/L。当获得稳定的收缩状态后，依次递增加入乙酰胆碱，使其浓度从 10⁻⁹ mol/L 逐步增加至 10⁻⁵ mol/L，从而绘制累积浓度依赖性血管舒张反应曲线。最后一次加入乙酰胆碱后，用缓冲液冲洗组织三次，每次间隔 10 分钟。现在，通过从记录的轨迹中应用含有每升2毫摩尔EGTA的无钙PSS来确定被动管腔直径。测量每次剂量反应的管腔直径，这些数据将用于计算所有参数。将乙酰胆碱的舒张反应表示为激动剂处理与无钙缓冲液处理之间的比较，即两者相对于苯肾上腺素诱导的收缩所引起的管腔直径变化程度。采用压力血管造影法研究了在C57BL/6和C57BL/6背景的野生型及SGCα1基因敲除小鼠中分离出的肠系膜阻力动脉对乙酰胆碱诱导的血管舒张反应，这些动脉预先用去氧肾上腺素进行收缩。无论小鼠的遗传背景如何，SGCα1缺乏均与乙酰胆碱诱导血管舒张能力下降相关。然而，在C57BL/6背景中，SGCα1基因敲除小鼠的内皮依赖性舒张功能障碍比在C57BL/6背景中更为显著。这些发现共同表明，血管对内皮依赖性舒张反应的敏感性降低，可能与SGC Alpha one基因敲除小鼠品系特异性的高血压有关。一旦掌握，该技术若操作得当，可在一至两小时内完成。除本方法外，还可同时对活体血管进行其他检测，如共聚焦显微镜观察。例如，这可用于测量细胞内铁浓度，从而帮助识别潜在的信号转导机制。

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生物学

评估抗小鼠动脉功能使用压力Myography

本文介绍了一种用于离体肠系膜动脉张力测量的自动化肌动图方法。该方法采用Mulvany-Halpern自动双丝肌动仪510A，测定血管对苯肾上腺素和细胞外钙的反应。该技术可独立、一致地测定直径为60 - 300...

使用自动化的丝线肌动描记法研究肠系膜动脉的收缩与舒张

本文描述了对小鼠颈动脉进行被动力学测试的方法，并特别考虑了针对不同年龄段样本的适应性调整。实验步骤包括确定动脉的体内长度、将血管安装至压力肌动图仪、记录数据、测量无负荷状态下的血管尺寸，以及对所得数据进行分析。...

小鼠颈动脉的机械测试：从新生儿到成年

压力肌动描记法用于评估小动脉在加压时产生持续性收缩的血管活性。本文提供了一项详细方案，用于评估从大鼠分离的小肠系膜动脉节段的血管活性，以及管腔内压力对血管直径的影响。...

利用压力肌动图评估肠系膜阻力动脉的肌源性反应和血管活性

心力衰竭是导致住院的首要原因，也是死亡的主要原因之一。通过建立小鼠左前降支冠状动脉永久性结扎模型，用于研究心肌梗死后的心室重构和心脏功能障碍。本文介绍了在小鼠中进行有创血流动力学测量的技术。...

小鼠左前降支冠状动脉永久性结扎：心肌梗死后心室重构与心力衰竭模型

冠状动脉血流储备（CFR）可用于评估心肌氧耗量及心血管风险。本研究建立了一种逐步的经胸多普勒超声心动图（TTDE）方法，用于在主动脉缩窄所致实验性压力超负荷条件下，对小鼠冠状动脉血流储备（CFR）变化进行纵向监测。...

基于超声的冠状动脉血流与冠状动脉血流储备评估：小鼠压力超负荷模型的应用

利用大鼠离体阻力动脉视频显微技术评估血管调控机制

血管环张力测定技术用于研究血管平滑肌功能并筛选新药。本文报道了一种详细方案，用于测定小鼠肠系膜动脉的等长收缩力，并用于筛选血管平滑肌新的舒张剂。...

利用血管环张力测定法测量小鼠肠系膜动脉的等长收缩力

本方案描述了使用多腔室肌动图系统在实验中应用张力测定肌动图技术的原理与技术操作 离体...

使用张力测定小体积腔室血管肌动描记法测量小鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能

本方案描述了通过经食管起搏获取压力-容积关系的方法，该方法在评估心力衰竭小鼠模型舒张功能方面具有重要价值 。...

一种用于评估小鼠心力衰竭模型中心率依赖性舒张功能的起搏控制方法

使用容积-压力记录尾套法测量小鼠血压

了解使用压力肌动描记法评估小鼠肠系膜动脉血管舒张功能的技术。该方法可在近生理条件下实时检测血管反应性，为心血管研究提供关键数据。

使用压力肌动图评估小鼠阻力动脉功能

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