使用在体内影像监测进展的实验小鼠巨细胞病毒感染的新生儿

该程序的总体目标是对小鼠新生儿进行体内成像，以研究发光巨细胞病毒的传播。这是通过首先从储备液中制备适当稀释的病毒来实现的。接下来，在腹膜腔中为新生儿注射发光 MCMV。

在注射后的时间点。在体内成像之前，将幼崽麻醉并注射 Lucifer。最终，体内成像用于显示和量化病毒在腹膜腔和中枢神经系统中的复制和传播。

与现有方法（如对受感染动物实施安乐死后器官中的病毒过滤）相比，该技术的主要优点是消耗的时间更少，资源更少。演示该程序的将是我实验室的技术人员 Mr.Il Macan。以下研究使用从 Ulrich Kowski 实验室获得的表达荧光素酶的 MCMV 菌株。

为了扩增菌株，将病毒添加到 37 摄氏度的无血清培养基中的培养细胞中。一小时后，取出上清液，用补充有 10% 胎牛血清的 DMEM 代替。五天后，收获培养物并将等分试样储存在零下 80 摄氏度。

直到进一步使用。通过噬菌斑测定滴定病毒悬液后，在 50 微升 DMEM 中将样品稀释至 50 pfu，并置于冰上，直到在 4 至 20 小时大的新生儿中进行即用型注射。在处理幼崽之前，用戴手套的手处理猫砂和粪便。

为避免引入可能给母亲带来压力的异味以进行练习注射，请在胰岛素注射器中加入 1% 亚甲蓝，并在 DPBS 中稀释。准备好后，如图所示，握住新生儿的背侧皮肤，腹侧朝上。将针头引入四条腿下方，轻轻地将其皮下推入腹膜腔。

一旦针尖处于正确位置，就以蓝色注射甲基。接下来，慢慢拔出针头并擦去注射部位的血液。注射成功后，将新生儿放回家笼 练习注射后，用早先准备好的病毒悬浮液重复此过程。

注射后 7 天拍摄图像，如前所述小心处理新生儿。等待 12 到 15 分钟，为每个注射器注射麻醉剂和路西法剂的混合物为了让路西法仪达到其最大发射量，请确保成像设备采集室中的平台被加热以保持正确的体温。在幼崽被麻醉并标记以进行识别后，它们就可以被放置在成像系统中了。

首先，采集全身发出的光。由于病毒已在多个靶器官中复制，因此暴露持续时间应较短。在这里，采集持续 10 到 20 秒。

在一轮采集中获得几只动物的低分辨率图像，然后将平台移近，以便在解剖后聚焦于特定动物的一部分或孤立的器官，这是有帮助的。要仅从头部获取光信号，请用一张厚而暗的纸覆盖身体的其他部分，以掩盖光子，进行 5 到 10 分钟的采集，然后对动物的对侧重复此作。在相同的条件下。

成像后，将幼崽放回加热的笼子中，以在麻醉时保持体温。这些图像是在感染后第 7 天、第 9 天、第 11 天和第 14 天拍摄的，动物体内的整体病毒滴度似乎随着时间的推移而降低。在此示例中，身体被遮盖，头部暴露在外。

这揭示了左耳水平的一个离散点，其强度在第 7 天到第 14 天之间增加，这表明可以在体内动态观察到 MCMV 向大脑的传播。在此程序之后，可以执行其他方法，例如免疫组化，以回答有关病毒在大脑中确切位置的其他问题。