长时程增强一个非常稳定的和可重复的记录和保存海马鼠标片制备工艺的改进

本文提出了一种完整的方法来准备和保存

该程序的总体目标是能够在急性海马切片中记录非常稳定和可重复的长期增强。这是通过首先提取小鼠大脑并在显微镜下解剖冷 A CSF 中的海马体来实现的。第二步是用组织切碎机切开横向海马切片。

接下来，将切片放入界面记录室中，该腔室将灌注含氧人工脑脊髓液。最后一步是放置电极并记录海马体 CA 1 区域的突触活动。最终，使用高频刺激方案来显示非常稳定的长期增强作用的诱导。

通过这种方法可以深入了解突触可塑性的潜在机制。它也可以应用于其他系统，例如神经退行性或神经系统的动物模型，或免疫疾病。通常，刚接触这种方法的人会很挣扎，因为所有作都需要高超的技巧和大量的练习。

通过用蒸馏水冲洗灌注回路至少 20 分钟来开始此过程。然后打开加热系统。启动回路中的碳化物鼓泡。

碳化物通过空气扩散器输送到记录室下方的水浴中。接下来，用流量计控制水浴中的流速 然后，排空回路并用过滤的 A CSF 水龙头填充以去除气泡。然后将环放在保存室中，它将支撑切片。

小心地去除电路中的所有气泡。然后用吸引针的螺丝调节记录室中的 A CSF 水平，将入口泵的速度调节为每分钟 1 毫升，将出口泵的速度调节为每分钟 5 毫升。解剖前，准备所有手术器械。

去除牺牲的老鼠的大脑。用食指和拇指托住它的头部，用解剖剪刀沿着头顶的中间切开，从断头台的边缘开始，剪开并滚滚而下，一直到额骨。接下来，切开头部两侧的皮肤肌肉，以完全露出颅骨板。

然后去除头部 coddle 侧的肌肉。随后沿颞板切开两侧的颞肌。然后横向切开中间的额板。

现在在两块板之间的枕骨上做一个小切口。在每侧枕骨板的基部切割。然后用弹簧剪刀，沿着矢状缝合线剪断。

最后，用镊子将两半彼此分开，取出头骨。现在，在小脑之前和嗅球之后用手术刀切开，然后将提取的大脑横向转移到带有冷 A CSF 的解剖皿中。一旦大脑出现在解剖皿中，在双目手术显微镜下用插入中间的手术刀将两个半球彼此切断，小心地展开一个半球的结构以露出侧脑室。

将一把刮刀放在额叶皮层上，将另一把刮刀放在头骨上，去除脑干和头骨。小心不要用刮刀接触海马体，并且在组织切片过程中不要拉伸它。之后，切断穹窿。

然后通过将刮刀插入心室，轻轻地将海马体推出皮层。提取海马体后，用广口塑料牧场移液器去除多余的皮质组织和剩余的血管。将海马体放在勺子中，其 alvi 表面向上转移到切碎机的平台上。

用标准塑料牧场移液器从勺子中去除多余的液体。之后，将勺子垂直向上倾斜，几乎接触切碎机上的滤纸。通过快速接触滤纸将海马体放下。

然后取出勺子。接下来，确定海马体的方向并切片。用切碎机横向达到 400 微米。

请尽快执行该过程。随后，取下带有海马切片的滤纸，并将其缠绕在金属圆柱体上，以便将切片稍微展开。然后使用标准塑料牧液移液管用 A CSF 喷雾释放切片，并将它们收集在充满冷的培养皿中。

一个 CSF。使用标准塑料移液管将所选切片转移到记录室。让切片在 28 摄氏度的记录界面室中从解剖创伤中恢复。

如果切片下沉，将 A CSF 级别降低到切片级别，则再次提高 A CSF 级别以使切片浮动。之后，将切片定向到有助于电极在 CA one 区域中定位的位置。当 A CSF 级别位于界面时，停止降低 A CSF 级别。

切片周围介质的弯月面表明 A CSF 水平足够。网格必须用介质饱和，但不能完全浸没。然后用滤纸盖住腔室，盖在多孔盖上。

录制前，让切片在 28 摄氏度下静置至少 1 小时 30 分钟。这是一个草图，它显示两个独立的突触输入是 1，S 是 2 对同一个神经元群。S 1 通路用于诱导 LTP，而 S 2 通路作为对照。

这些是 LTP 诱导之前记录的样本 F-E-P-S-P 曲线（如红色轨迹所示）和 LDP 诱导后一小时（蓝色轨迹所示）。这是来自完全健康切片的 F EPSP，这是来自切片的 F EPSP，当切片不完全健康时，切片表现出高水平的兴奋性。观察到 Polys 突触反应，并且 F-E-P-S-P 斜率增强降低。

以下是我们实验室在 2005 年、2010 年和 2011 年记录的单列高频刺激诱导 LTP 后 F-E-P-S-P 斜率的时间进程的比较。第一次实验记录于 2005 年，由实心圆圈表示。由实心方块指示的后续记录受益于改进的解剖程序。

当前结果来自界面氧合和温度控制的优化，以及空心圆圈所示的电极标准化。在这里，我们表明，如蓝色曲线所示，将记录室下方水浴中的氧气流速从每分钟 0.15 升增加到 0.25 升，导致 F-E-P-S-P 斜率降低 20%，将温度从 28 摄氏度提高到 29 摄氏度。如图所示，绿色曲线导致 F-E-P-S-P 斜率增加 50% 以上。

在尝试此过程时，请务必记住，每个步骤都至关重要，协议中的错误可能会导致不同的结果。看完这个视频，你会对如何获得非常稳定的长效增效有一个很好的了解。在急性海马切片中记录。