Name: 一种非侵入性的方法原位交配成功的女美国龙虾（测定美洲螯龙虾） (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: 了解一种非侵入性方法来评估美洲螯龙虾雌性个体的交配成功率。该技术通过采集精包样本帮助研究人员在海上现场快速判断繁殖状态，为渔业管理提供重要的生殖生物学数据支持。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

作者谨向所有允许我们在其渔船进行采样的新英格兰地区商业捕捞龙虾的渔民表示感谢——非常感谢他们的合作。此外，我们感谢新罕布什尔州纽英顿的小湾龙虾公司（Little Bay Lobster Company）和罗得岛州波因特朱迪思的尚普林斯海鲜公司（Champlin's Seafood），他们允许我们在其设施内开展采样工作。以下新罕布什尔大学（UNH）的学生在整个研究过程中提供了宝贵帮助：Haley White、Françoise Morrison、Sarah Havener、Audra Chaput 和 May Grose。本项目获得了新罕布什尔海拨款（NH SeaGrant）向 WHW 提供的资助（项目编号 R/CFR-11）以及新罕布什尔大学海洋项目向 JSG 提供的资助支持。

第一部分A：野外采样技术
1. 雌性个体测量
<ol>
	<li>对于每只雌性龙虾，使用游标卡尺测量其头胸甲长度（CL）和第二腹节宽度，精确至1.0 mm。 
	注意：选择测量第二腹节是因为腹部宽度（雌性龙虾携带卵的部位）是性成熟的一个指标。此外，确定蜕皮阶段可能有助于后续将这些数据与生殖阶段相对应（见步骤1.2）。</li>
	<li>剪取其中一条腹肢末端的一小部分（龙虾研究中的标准方法学操作），并将腹肢保存在洁净的海水中，以便后续在解剖显微镜下观察9。 
	注意：此步骤还可能揭示腹肢上是否存在粘液腺，粘液腺的存在表明雌性正准备产卵10。</li>
</ol>
2. 针头插入
<ol>
	<li>将注射器针头（18 G，参见表1）以约45°角朝尾部方向插入精囊受体约1 cm处（图1）。 
	注意：对于具有完整精栓的龙虾，插入针头时可能会遇到一定阻力，因为针头需穿过精栓才能到达精囊受体底部精子浓度最高的区域（图1）。 
	注意：精栓的存在本身即是龙虾已交配的可靠指标。在某些个体中，插入时阻力可能很小，可能是因为不存在精荚、精荚体积较小、尚未硬化成栓状，或已用于使一个或多个卵团受精。</li>
</ol>
<img alt="螃蟹解剖注射示意图，精栓检查，甲壳类生殖研究。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1.jpg" width="600px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. 针头插入及龙虾精囊的观察。 将钝头针插入龙虾的精囊以采集精液样本。针头的角度和深度对于获得一致的样本均至关重要。右图：已解剖并沿垂直方向切开的精囊视图。精栓位于精囊的上部或最外层部分，而精子则位于精囊底部（最深处）。需要注意的是，采样深度若超过此位置，可能会刺穿精囊，导致样本被血液污染。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" target="_blank">点击此处查看大图</a>。
3. 穿透精液栓
<ol>
	<li>初次插入后，将针头角度调至接近垂直（与身体纵轴垂直），并非常缓慢地向下推进至接收器中。</li>
	<li>保持针头倾斜，使针尖略微朝向尾部方向。此时针尖会压迫塞子顶部，直至最终穿透进入基质。</li>
	<li>继续缓慢向下推动针头，直到再次感受到阻力——即为接收器底部，此处即为取样位置。</li>
</ol>
4. 精子去除
<ol>
	<li>从纳精囊底部取出样品（通常为固体栓状物、液体精子及其他液体），并将样品放入已标记的 2.0 ml 塑料管中。</li>
	<li>用约 0.1–0.5 ml 冷海水冲洗纳精囊。</li>
	<li>吸取约 0.3 ml 液体，加入同一根试管中。</li>
	<li>将精子样品置于冰上保存，直至可在实验室进行观察。 第二部分：实验室中精子样品的观察 
	注意：应检查从个体龙虾纳精囊中取出的样品，以确定是否存在精子细胞。</li>
	<li>从每根塑料管中取出约 50 µl 液体，置于载玻片上并加盖盖玻片，在复式显微镜下以 100 倍放大倍数进行观察。</li>
	<li>将样品评分分为：精子稀少、丰富或缺失（本研究未对精子实际数量进行定量，图 2）。</li>
</ol>
<img alt="晶体显微图像；结构分析；比较放大；晶体形成。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2.jpg" width="600px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. 龙虾精子样本图像。 从雌性龙虾精囊中提取的精子样本在光学显微镜下以 40 倍放大倍数观察所得图像。左侧图像显示含有大量精子的样本，而右侧图像则显示精子稀疏的样本（比例尺 = 10 μm）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50498/50498fig2highres.jpg" target="_blank">点击此处查看高分辨率图像</a>。

<ol><li>FAO and Agriculture Organization of the United Nations). Fisheries and Aquaculture Department. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.fao.org">http://www.fao.org</a> (2012).</li>
<li>MacDiarmid, A., Butler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+economy+and+limitation+in+spiny+lobsters%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Ecol.+Sociobiol%22%5BJournal%5D)">Sperm economy and limitation in spiny lobsters.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 46, 14-24 (1999).</li>
<li>Kendall, M. S., Wolcott, D. L., Wolcott, T. G., Hines, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+male+size+and+mating+history+on+sperm+content+of+ejaculates+of+the+blue+crab+Callinectes+sapidus%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Influence of male size and mating history on sperm content of ejaculates of the blue crab Callinectes sapidus.</a> 230, 235-240 (2002).</li>
<li>Sato, T., Ashidate, M., Goshima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+male+mating+frequency+and+male+size+on+ejaculate+size+and+reproductive+success+of+female+spiny+king+crab%2C+Parolithodes+brevipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Ecol.+Prog.+Ser%22%5BJournal%5D)">Effects of male mating frequency and male size on ejaculate size and reproductive success of female spiny king crab, Parolithodes brevipes.</a> Mar. Ecol. Prog. Ser. 296, 251-262 (2005).</li>
<li>Sato, T., Goshima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+male-only+fishing+and+sperm+limitation+in+manipulated+populations+of+an+unfished+crab%2C+Hapalogaster%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Impacts of male-only fishing and sperm limitation in manipulated populations of an unfished crab, Hapalogaster.</a> 313, 193-204 (2006).</li>
<li>Rondeau, A., Sainte-Marie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+mate-guarding+time+and+sperm+allocation+by+male+snow+crabs+%28Chionoecetes+opilio%29+in+response+to+sexual+competition%2C+and+their+impact+on+the+mating+success+of+females%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Variable mate-guarding time and sperm allocation by male snow crabs (Chionoecetes opilio) in response to sexual competition, and their impact on the mating success of females.</a> Biol. Bull. 201, 204-217 (2001).</li>
<li>Waddy, S. L., Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWaddy%2C+SL+%22Mating+and+insemination+in+the+Ameri+can+lobster%2CHomarus+americanus.+Crustacean+sexual+behavior%22">Mating and insemination in the Ameri can lobster,Homarus americanus. Crustacean sexual behavior</a>. Bauer, R. T., Martin, J. W. , Columbia University Press. NY. 126-144 (1990).</li>
<li>Johnson, K. J., Goldstein, J. S., Watson, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+methods+for+determining+the+fertility+status+in+early-stage+American+lobster%2C+Homarus+americanus%2C+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Two methods for determining the fertility status in early-stage American lobster, Homarus americanus, eggs.</a> J. Crust. Biol. 31, 693-700 (2011).</li>
<li>Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proecdysis%2C+setal+development%2C+and+molt+prediction+in+the+American+lobster+%28Homarus%29%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Proecdysis, setal development, and molt prediction in the American lobster (Homarus).</a> 30, 1337-1344 (1973).</li>
<li>Aiken, D. E., Waddy, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cement+gland+development%2C+ovary+maturation%2C+and+reproductive+cycles+in+the+American+lobster+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cement gland development, ovary maturation, and reproductive cycles in the American lobster Homarus americanus.</a> J. Crust. Biol. 2, 315-327 (1982).</li>
<li>Pugh, T. L., Goldstein, J. S., Lavalli, K. L., Clancy, M., Watson, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((At-sea+determination+of+female+American+lobsters+%28Homarus+americanus%29+mating+activity%3A+Patterns+vs.+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Res%22%5BJournal%5D)">At-sea determination of female American lobsters (Homarus americanus) mating activity: Patterns vs. expectations.</a> Fish. Res. 147, 327-337 (2013).</li>
<li>Bauer, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+trends+in+sperm+transfer+and+storage+complexity+in+decapod+crustaceans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic trends in sperm transfer and storage complexity in decapod crustaceans.</a> J. Crust. Biol. 6, 313-325 (1986).</li>
<li>Talbot, P., Helluy, S. Reproduction and embryonic development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTalbot%2C+P+%22Biology+of+the+Lobster%3A+Homarus+americanus%22">Biology of the Lobster: Homarus americanus</a>. Factor, J. R. , Academic Press. NY. 177-216 (1995).</li>
<li>Cooper, R. A., Uzmann, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCooper%2C+RA+%22Ecology+of+juvenile+and+adult+Homarus.+The+biology+and+management+of+lobsters%22">Ecology of juvenile and adult Homarus. The biology and management of lobsters</a>. Cobb, J. S. 2, Academic Press. NY. 97-142 (1980).</li>
<li>Estrella, B. T., McKiernan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catch-per-unit-effort+and+biological+parameters+from+the+Massachusetts+coastal+lobster+%28Homarus+americanus%29+resource%3A+description+and+trends%5BTitle%5D)+AND+%22NOAA+Tech.+Rep.+NMFS%22%5BJournal%5D)">Catch-per-unit-effort and biological parameters from the Massachusetts coastal lobster (Homarus americanus) resource: description and trends.</a> NOAA Tech. Rep. NMFS. 81, (1989).</li>
<li>Waddy, S. L., Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+fertilization+and+consecutive+spawning+in+large+American+lobster%2C+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Fish.+Aquat.+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple fertilization and consecutive spawning in large American lobster, Homarus americanus.</a> Can. J. Fish. Aquat. Sci. 43, 2291-2294 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlantic+States+Marine+Fisheries+Commission+%28ASMFC%29.+American+lobster+stock+assessment+report+for+peer+review%5BTitle%5D)+AND+%22ASMFC+Stock+Assessment%22%5BJournal%5D)">Atlantic States Marine Fisheries Commission (ASMFC). American lobster stock assessment report for peer review.</a> ASMFC Stock Assessment. , Washington, D.C. (2009).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

本视频和论文概述并演示了一种用于判断雌性龙虾是否成功交配的方法。该方法操作简便，可供不同用户在海上对龙虾进行大规模取样。该方法基于检测精囊受体中是否存在交配过程中由雄性传递给雌性龙虾的精荚。这些精荚在进入受体后不久会部分硬化形成精栓，因此精栓的存在也可作为成功交配的指标。在本研究以及随后的一项更大规模的研究中，发现大多数精栓均伴有精子11。然而，尽管精栓的存在是交配行为的可靠指标，但其缺失并不能说明未发生交配。
尽管我们无法完全确定这种取样方法是否会对雌性龙虾产卵及成功受精卵块的能力产生负面影响，但该精子取样方案的某些方面表明，对精荚或纳精囊造成的损伤可能极小。已有数据（来自正在进行的实验室研究）显示，部分龙虾在精子取样后仍能排出已受精的卵块（n=3），并能够利用同一精荚使多个卵块受精。这些卵的发育和孵化情况与未取样的龙虾相似。此外，该取样技术仅采集总精子中的一小部分，其目的并非定量获取纳精囊的全部内容物。由于纳精囊具有复杂的物理结构12,13，若要获得此类结果，需采用其他技术（例如&#160;解剖法）。
<p ...

美洲龙虾（Homarus americanus）是北大西洋地区产量最高的渔业资源之一（2011年产量约56,000公吨，价值超过3.9亿美元）1。然而，目前对野生种群中该物种繁殖动态的理解仍普遍不足。获得更准确的繁殖输出估算数据，包括参与繁殖的个体数量及其体型大小，可能有助于改进资源评估过程。例如，由于精子限制而无法实现其全部繁殖潜力的雌性个体，已被确认为多种商业捕捞海洋甲壳类动物面临的潜在问题，其中包括：龙虾2、蓝蟹3、帝王蟹4、石蟹5和雪蟹6。本研究的总体目标是确定精子限制是否也可能成为美洲龙虾渔业某些区域中的影响因素。
在进行一项与抱卵雌性龙虾（具有明显完整、新产出的卵）无关的标记研究时，首次观察到龙虾可能存在精子限制问题的迹象。渔民的重捕报告显示，约15%的这类动物在仅1至2个月后便已脱落其卵块。初步假设认为，部分龙虾所携带的卵未受精，因而提前“脱落”7。后续研究的初步数据已证实，龙虾即使未成功交配也会产卵，而这些未受精的卵通常仅能携带约1个月8。因此，鉴于在自然种群中已观察到雌性携带未受精卵的现象，我们旨在探究精子限制在多大程度上导致了性成熟龙虾的繁殖水平低于最大潜力。为实现这一目标，我们建立了一种检测雄性在交配过程中沉积精荚的技术。
本文和视频介绍了一种用于确定雌性龙虾交配成功率的非侵入性、简便方法。该技术可在海上快速、可靠地应用，适用于科研或商业捕捞船只。本文展示了该取样方法的详细步骤以及一些代表性结果，以说明该技术的应用。

<table><tbody><tr><td>游标卡尺</td><td>Mitutoyo Digimatic</td><td>500-196-20</td><td>http://www.globalindustrial.com</td></tr><tr><td>3 ml 鲁尔锁注射器</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309585</td><td>www.bd.com</td></tr><tr><td>Monject 铝制针座钝头针，18 G × 1</td><td>Webster Veterinary</td><td>8881202348</td><td>www.mywebstervet.com</td></tr><tr><td>2.0 ml 塑料储存管</td><td>Eppendorf</td><td>wu-06333-72</td><td>http://www.coleparmer.com</td></tr><tr><td>带冰的聚苯乙烯泡沫保温箱</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>复合光学显微镜</td><td>Olympus</td><td>BH System</td><td>http://www.olympusamerica.com</td></tr><tr><td>带盖玻片的载玻片</td><td></td><td></td><td>75 mm × 25 mm，厚度约 1 mm</td></tr><tr><td>带一次性吸头的移液器</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

一种非侵入性方法 原位 雌性美洲龙虾交配成功率的测定homarus americanus)

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

尽管美国龙虾渔业是西北大西洋生产力最高的渔业之一，但关于其自然繁殖动态的许多方面仍不明确。近年来对已开发的甲壳类种群（如螃蟹和龙虾）的研究表明，在某些情况下，由于精子数量受限，成熟雌性可能无法实现其全部繁殖潜力。为了在不同区域的美国龙虾渔场中检验这一可能性，研究人员开发出一种可靠且非侵入性的方法，可在海上大规模采集雌性龙虾样本。该方法包括将一根钝头针插入雌性龙虾的精荚囊中，以检测是否存在精栓，并抽取样本以检查其中是否含有精子。为验证该技术的可靠性，研究人员在码头和实验室中开展了一系列对照研究。这些研究共采集了294只雌性龙虾，以确认精栓的存在是精荚囊内含有精子的可靠指标，从而反映其是否已完成交配。本文详细描述了该方法以及从全部样本中选取的一个子集所获得的结果。在来自马萨诸塞州乔治滩和科德角地区（甲壳长度范围为71–145 mm）的230只雌性龙虾样本中，90.3%的个体检测出含有精子。部分雌性龙虾未检测到精子的可能解释包括：未成熟（生理上尚未成熟）、在完成一批卵子受精后精栓已分解，以及缺乏交配行为。调查结果表明，这种用于评估雌性龙虾交配成功率的技术是一种可靠的替代指标，可在野外用于记录自然种群中的繁殖活动。

本文报告的数据来自一组雌性龙虾，这些龙虾分别采自近岸和远岸海域。近岸组包括44只龙虾，采自马萨诸塞州科德角附近沿海水域，用冷藏箱运送到实验室进行检测。远岸组共186只龙虾，采自乔治海岸外大陆架，在新罕布什尔州的一处商业暂养设施中进行取样。
所有动物的精子样本均被采集，并立即根据上述方法检测精包中是否存在精子。该亚组中，共有90.3%的雌性个体在储精囊中发现有精子。令人意外的是，未检测到精子的个体并不一定处于体型范围的较小端（图 3）。
<img alt="条形图比较卡普安和乔治斯银行不同体型组雌性龙虾携带精子的百分比。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig3.jpg" width="600px" data-altupdateda...

捕捞活动对已开发的甲壳类渔业（如美洲龙虾渔业）造成的改变，可能会影​​响其繁殖动态，导致雌性龙虾交配成功率下降。本研究旨在建立一种非侵入性方法，用于确定在生理或功能上已成熟的雌性龙虾的交配成功率。

一种非侵入性方法 原位 雌性美洲龙虾交配成功率的测定Homarus americanus)

尽管西北大西洋渔业产量极高，但关于美洲……的自然繁殖动态仍有许多未知之处

美洲龙虾在其地理分布范围内，从加拿大大西洋沿岸到新英格兰地区，均具有标志性地位。在美国东部多个地区，它是单物种渔业中规模最大的捕捞对象之一。该渔业持续取得成功，归因于多种管理措施，包括旨在保护繁殖种群的生物学管控手段。这些规定包括对抱卵雌性的最小和最大尺寸限制保护，以及禁止捕捞被视为已证实的繁殖个体的 V 形缺刻雌性。龙虾渔业的未来在一定程度上依赖于充足的新补充个体，而这些个体依赖于龙虾交配系统的成功。然而，这种渔业被过度开发的现状，与全球其他甲壳类渔业相似，可能会影响该物种的繁殖动态。因此，本研究的目的是建立一种简单且非侵入性的方法，用于确定性成熟雌性龙虾的交配成功率。龙虾的性别可通过观察其腹面进行区分，左图所示为雌性，主要特征是第一对腹足（PLE）呈扁平且羽状。雌性龙虾还具有一个椭圆形的精囊结构，用于储存雄性传递的精荚。雄性个体位于右侧，可通过其第一对较为圆锥形且已硬化的小颚足进行识别。这些生殖足有助于将精荚传递至雌性的精囊中。图中还显示了雄性生殖孔，该精荚隐喻即由此排出。在求偶过程中，雄性和雌性龙虾表现出复杂的行为，包括化学介导的通讯以及洞穴共用。洞穴共用行为发生在雌性蜕皮前后，可被解释为雄性对雌性的守护；交配通常在雌性蜕皮后一小时内发生，且持续时间极短。雄性将刚蜕壳的雌性翻转至其背部，以便将精荚转移到雌性的精囊中。雌性龙虾能够将交配时获得的精子储存两年或更长时间，之后才会产出卵块。这些卵附着在雌性腹部下方的腹足上。卵的发育通常需要9到11个月，且高度依赖于海水温度。卵在春季和夏季孵化为浮游幼虫，并经历多个幼虫阶段后，最终作为幼体沉降至海底。将一根钝头针插入雌性昆虫的受精囊开口，取出包含精子的精荚部分。随后可将精子样品保存起来，留待日后在实验室中进行检查。由于受精囊的结构特点，我们发现该操作技术不会导致个体死亡。野外采样所需的用品包括装有冰块的冷藏箱，用于保持样品低温；2 毫升样品瓶；我们使用了塑料离心管、固定在 3 毫升注射器上的 18 号钝头针头，以及冰冷的洁净海水。无菌条件是理想的，但并非必需。此外，如果需要记录龙虾的形态测量特征（如腕节长度、腹部宽度和螯足尺寸），您将需要使用卡尺。这些测量数据以及样本管的编号将记录在预先打印好的数据表上。采样人员还应记录详细信息，如采样日期、采样地点以及捕获方法（商业陷阱）。例如，使用卡尺测量每只龙虾时，应精确到最接近的毫米，头胸甲长度应从眼窝后缘背侧量至头胸甲末端。有时，腹部宽度等附加测量数据可能有助于估算成熟度指数。随后，使用游标卡尺测量标准头胸甲长度。然后将动物腹面朝上放置，测量腹部宽度。为从精囊中采集精液样本，需将雌性龙虾腹面朝上握住，使其腹部朝向操作者。将注射器针头插入精囊。如果存在精荚，则会遇到非常坚实的精块。需小心穿刺，将注射器内的物质排入预先标记好的试管中，然后用注射器吸取少量洁净的海水，注入精囊内。这有助于将精子从硬块中解离出来。然后再次提起活塞，将额外的样本加入同一样本管中。针头的角度和深度对于获得一致的样本都至关重要。在此图像中，已将精囊 receptacle 纵向剖开。精子栓占据 receptacle 的上部区域，而精子位于 receptacle 的底部最深处。receptacle 深度约为一厘米，具体深度取决于雌性个体的大小，因此需要使用针头穿透硬化栓塞以采集精子样本。注意不要刺破 receptacle 底部类似壳状的物质。接下来我们将更缓慢地展示取样过程。在实验室环境中。我们建议任何希望使用该技术的人员在尝试野外采样前，先在实验室中进行练习。再次强调，应将龙虾腹部朝上、腹部朝向自己握住。使用尖端钝化的针头，从45度角开始，针尖朝向腹部，刺入精囊以检测是否存在精栓。如果存在精液栓，此处会感受到阻力，需施加持续压力。可轻微旋转针头以帮助穿刺。穿过精液栓，将针头插入约一厘米，具体深度以针头上的黑色参考标记为准。将注射器中的液体排入样品管中。然后用少量冰冷的新鲜海水充满注射器，以冲洗精囊，并再次将冲洗液排入两只龙虾之间的样品管中。务必彻底清洗注射器，以避免污染。擦拭针头，然后反复填充并排空注射器数次，以确保所有样本物质均已被冲洗干净。在采集另一只龙虾样本前，建议在多次使用后更换注射器和针头，以用于精子的处理与鉴定。您将需要一支200微升移液器、一次性移液器吸头、载玻片和盖玻片。取一支精子样本管，移除约 200 µL 液体物质。使用移液器将此液体转移至已做适当标记的显微镜载玻片上，并加盖盖玻片。在标准复式显微镜下以 100 × 放大倍数观察，确定精子的数量。显微镜载玻片上的精子可能呈现多种不同方位，包括垂直和侧向视角。如这些样本图像所示，我们建议使用“大量”、“少量”或“无”等定性描述来描述精子的数量。我们已在海上多个地点以及港口采集龙虾样本时成功应用了该技术。此处展示的结果来自在乔治浅滩捕获的 offshore 龙虾，我们得以在一家商业暂养设施中对其进行采样。这些雌性个体中有84%在它们的受精囊中发现了精子。令人惊讶的是，未检测到精子的个体并非处于较小的、可能未成熟的尺寸范围，而是位于体型大小范围的中间。该技术并非用于量化精子隐喻中实际的精子数量。相反，该方法提供了一种可在海上使用的非侵入性手段，用于判断雌性龙虾是否成功完成繁殖。我们对龙虾繁殖成功率了解得越多，就越能理解对该物种开发利用所带来的影响，从而更合理地管理这一重要的海洋资源。

a-noninvasive-method-for-situ-determination-mating-success-female

Research

科研

JoVE Journal

Environment

环境

一种非侵入性的方法<em&gt;原位</em&gt;交配成功的女美国龙虾​​（测定<em&gt;美洲螯龙虾</em&gt;）

本视频实验方案展示了一种利用雌雄同体的淡水螺 Lymnaea stagnalis...

雄性附属腺体产物对腹足类软体动物产卵的影响

本实验方案的目的是为用户提供一套高通量去壳方法 Lymnaea stagnalis 用于整体封片的胚胎和幼虫制备 原位...

整体封片 原位 腹足类软体动物杂交方法 Lymnaea stagnalis

本文介绍了一种用于分离和表征海洋七鳃鳗疑似信息素化合物的结构、嗅觉活性及其行为反应的实验方案。...

利用生物测定引导的分级分离法鉴定七鳃鳗信息素

本文介绍了一种长期对动物个体进行追踪的实验方案。该方法采用计算机视觉技术，通过龙虾作为案例研究对象，识别一组人工构建的标记，同时提供了龙虾的饲养、操作和标记方法的相关信息。...

长期共养水生动物的视频追踪：以挪威龙虾（Nephrops norvegicus）每日运动活动为例

本方案描述了针对蚂蚁Vollenhovia...

使用蚂蚁Vollenhovia emeryi进行近交系杂交的诱导与评估

本文阐述了在幼年太平洋八目鳗和美洲鳗鲡体内植入微型声学标记的步骤。我们的应用基于实验室试验，结果表明，声学标记可成功植入，且对游泳能力或存活率无明显影响，标记脱落率极低。...

幼年太平洋七鳃鳗和美洲鳗鲡植入新型微型声学标签

本实验方案的目的是在不牺牲胚胎的情况下，对原肠胚形成时期的海葵Nematostella...

海葵早期发育过程中的基因分型

精子必须成功穿过输卵管才能使卵子受精。本文中，我们描述了一种用于检测秀丽隐杆线虫（C.

测量精子导向性与运动能力 秀丽隐杆线虫 雌雄同体生殖道

淡水 mussel 的保护依赖于对物种繁殖模式和过程的监测。本研究建立了一种非致死性取样方法，用于采集鳃部内容物、表征幼体发育阶段，并为所收集的数据提供一个数字化数据库。该方案与数据库结合的工具包将成为濒危物种恢复工作中 mussel...

标准化一种用于评估淡水贻贝（双壳纲：蚌目）繁殖状态与幼体发育的非致死性方法

在热应激过程中测量心率，有助于了解生物体因急性环境变化而产生的生理反应。本实验方案以美洲龙虾（Homarus...

用于无脊椎动物晚期心率微创测量的阻抗呼吸描记法

本文介绍了一种利用模式生物 C. elegans...

测量胚胎活力与子代数量 秀丽隐杆线虫

了解一种非侵入性方法来评估美洲螯龙虾雌性个体的交配成功率。该技术通过采集精包样本帮助研究人员在海上现场快速判断繁殖状态，为渔业管理提供重要的生殖生物学数据支持。

一种非侵入性方法原位雌性美洲龙虾交配成功率的测定Homarus americanus)

探索更多视频

一种非侵入性方法 原位 雌性美洲龙虾交配成功率的测定Homarus americanus)

探索更多视频

一种非侵入性方法原位雌性美洲龙虾交配成功率的测定Homarus americanus)