光遗传学的扰动激光照射半完好的神经活动果蝇幼虫运动

在该方案中，我们首先用含有所有反式 A TR 的 E 基食物喂养适当基因型的幼虫。将每个实验室固定并在生理盐水中解剖，以便用两毫钙林格溶液代替生理盐水，并将 LABA 制备物放在显微镜载物台上。用 CCD 摄像机对解剖的 LABA 的运动进行录像。通过局部照亮神经系统，我们可以在特定时间扰动神经元子集的神经活动，同时监测相同的 inact 准备的运动。

嗨，我是 Dr.A 实验室的 Tega。嗨，我是 Hi Kosaka，也在 dr.实验室 Oph 级别。

运动是研究电机电路的有用模型系统。由于本协议中高度发达的遗传技术，我们将在监测水平运动的同时对运动神经元进行光遗传学作。通过在共聚焦显微镜中使用激光，可以刺激神经元的子集，并可以分析对神经元时空扰动的运动反应。

那么让我们开始吧。在包含标准活食的塑料生物中保持 K 6 G 4 US CHR 2 或 K 6 G 4 US NPHR 的飞行线。将 TL 溶液加入适当浓度的酵母中并充分混合 根据苹果汁 aate 涂抹酵母。

从样品瓶中拾取 SLA 中的第二个或第三个。将大厅放在带有包含 TR 的酵母空间的 aate 上。用铝箔盖住板，使 TR 保持黑暗。将大厅在 25 摄氏度下扩大适当的时间。

这是一款用于可视化相同完整实验室的 CCD 相机。将 CCD 相机连接到带有 SEMA 分离的常规共聚焦显微镜上。拿起 A TRA 大厅并用水冲洗。

要清除体内残留的食物，请将 C guard 冷盘背面的熔岩取下。用头部和尾部的昆虫针固定。添加无钙生理盐水。

用微剪刀从切口处在尾巴附近做一个小切口。沿背中线进行纵向切割。小心避免损伤腹侧神经核心和周围神经。

在解剖的体壁的每个角上做一个小的头针横向切口。切除除大脑和腹侧神经索以外的内脏器官。用 200 万模型钙林格溶液代替生理盐水。

在共聚焦显微镜中安装全功率干式物镜，并将实验室准备工作放在显微镜载物台上。用红色激光获得解剖制剂的透射图像，以通过共聚焦显微镜定位腹侧神经代码。在透射图像缩放模具上定义感兴趣区域对于确定特定的感兴趣区域很有用。

更改显微镜的滤光片组，以使用 488 纳米或 559 纳米光进行照明。通过用卤素灯照亮制剂来可视化体壁。使用连接到共聚焦显微镜的 CCD 相机监控制备。

回忆体壁的运动并仅切换激光束以暂时纵神经活动，同时监测运动蠕动运动，由 CCD 相机观察和记录相同的完整准备。该实验室在现代神经元中表达 CHL 2。照亮腹侧神经核心的一个或两个节段会激活这些节段中的现代神经元，这反过来又会诱导相应体壁节段的肌肉收缩，从而刺激腹侧神经中的其他节段。

寒冷会引起身体其他部分的收缩。当用黄色激光刺激腹侧神经呼叫的几个节段时，NPHL 在运动神经元中表达。传播的波在体壁的相应部分被阻止。

当激光消除关闭时，波然后从被拦截的段重新开始。该协议阐明了用激光在相同的运动圆周水平上对神经活动进行光遗传学扰动的程序。在解剖过程中，腹侧神经密码和周围神经不得受损，以实现足够的刺激。

在共聚焦显微镜中，应通过改变激光功率扫描速度或重复次数来调整照明功率。这就是整个协议。感谢您的观看，祝您的实验好运。