该在OVO CAM作为一个肉瘤Xenograftmodel的检测

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该程序的总体目标是进行雏鸡胆膜或 CAM 测定，以研究肉瘤、细胞或移植物的行为。这是通过在孵化第 3 天首先在鸡蛋的壳上开一个窗户来实现的。在孵化第 9 天的第二步中，制备肿瘤材料。

然后在去除上皮层后，将肿瘤添加到 CAM 中 在孵育第 16 天的最后一步中，对 CAM 进行拍照、收获并固定在福尔马林中用于组织学评估。最终，经典的 h 和 d 组织学和免疫组化用于证明肉瘤、细胞增殖和侵袭血管形成以及宿主反应。这种技术与现有方法（如 xenograft 大多数模型）的主要优点是它易于学习且相对便宜。

它还允许您在很短的时间内研究无数的转移相关活动，并且不需要伦理委员会。这种方法可以帮助回答肉瘤研究领域的关键问题，例如肿瘤宿主相互作用对肿瘤存活、肿瘤微环境重建和基质细胞募集的影响。这项技术的影响延伸到肉瘤的个性化治疗，因为可以研究患者自身的材料。

所有这些新技术可以为我们提供对 SAR 神经发生的新见解。它也非常适用于其他系统，例如一般的肿瘤发生。首先使用无菌手术刀将肿瘤样本切成不超过 1 立方毫米的小块，去除所有钙化区域。

然后称量样品，将 2 到 4 克组织转移到解离管中。在 2.5 毫升胶原酶 2 和 2.5 毫升 DN a 溶液中消化组织。处理组织后，根据解离 H 肿瘤方案，通过 150 微米细胞过滤器过滤所得悬浮液。

现在以适当的离心力离心悬浮液，例如 100 至 500 倍 G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟。用移液管小心去除上清液后，将沉淀物在 10 毫升红细胞裂解液中孵育，在室温下缓冲，偶尔滴注。10 分钟后，加入 25 毫升培养基终止反应，再次旋转悬浮液后，沉淀应为白色，弃去上清液，向细胞中加入 5 毫升培养基，然后通过 70 微米细胞过滤器过滤悬浮液。

使用自动细胞计数仪确定显影时每毫升的活细胞数量。第三天，将 18 号针头插入鸡蛋尖端，取出 2 毫升白蛋白，以降低 OVO 绒毛膜全膜或凸轮的水平。现在在外壳的标记上侧涂上一层半透性粘合膜，以防止在切割窗口时外壳颗粒溢出到凸轮上。

然后在鸡蛋表面做一个小的介绍孔。在打开外壳期间不损坏凸轮是该程序中最棘手的部分。我们使用锋利的剪刀，一只手水平握住它们，另一只手拿着鸡蛋。

现在，用一把无菌、锋利的尖头手术剪刀在壳上剪出一厘米见方的窗户。胚胎搏动的心脏和相邻的血管现在应该在蛋黄表面可见。取出所有未受精的卵子或死胚胎。

然后用更多的半透性胶膜密封窗户。再次旋转肿瘤悬液后，将沉淀以每 100 微升凝胶 10 倍至 6 个细胞的速度重悬于冷却的细胞外基质凝胶中。将此溶液保存在融化的冰上。

接下来，在层流下，使用一把无菌手术剪刀切除部分半透性粘合膜。用无菌玻璃棒轻轻接触凸轮，去除上皮细胞层。然后将 4 滴 25 微升细胞 ECM 凝胶悬液滴入凸轮中，使 ECM 凝胶在两次应用之间聚合。

以这种方式，会产生包含癌细胞的粘附斑块。然后再次用半透胶膜密封壳窗。在适当的实验潜伏期后，使用一把手术剪刀扩大壳窗，确保不要剪得太低。

接下来，使用移液管将 300 至 500 微升 PBS 添加到包含接种材料的 CAM 切片上。然后通过立体荧光显微镜拍摄凸轮。然后，用一把无菌剪刀剪下靠壳的边界处的膜，并将收获的凸轮放入装有 PBS 或缓冲甲醛的无菌培养皿中。

然后拍摄凸轮的上侧和下侧，如图所示，带和不带滤镜。在第一个图中，肿瘤移植物粘附在 cam 上。在这里，在这两张图像中可以观察到来自患者材料的单细胞悬液，显示干燥、略微凸起的斑块。

显示了凸轮切除后发生的膜的明显皱纹。SAO 两条线在 CAM 上形成一个扩散斑块，从第 7 天开始表面明显增加。接种后，GFP 信号仍然很强，表明有活细胞。

这些含有 SW 1 3 53 细胞的斑块表面缩小，并且往往具有收缩的凸轮，从而导致膜起皱。从第 7 天开始收获后，经常观察到出血。当荧光探针在多次细胞分裂后被稀释以及发生出血时，DSR 信号会减弱。

在大多数情况下，当新的曲折血管进入样品时，会观察到 CAM 的血管反应。例如，在这个点状出血中，箭头指示的分支和星号指示的吻合，箭头指示的出血，也可以在整个斑块中观察到。注意 SAO 的两个单元平行于凸轮血管的迁移。

这种血管反应可以在切除凸轮后在下视图上看到，显示移植物或斑块周围的曲折血管。在肿瘤移植组和单细胞悬液组中观察到 CAM 的血管反应。组织学证据表明，SAO 两个细胞在细胞外基质凝胶的整个体积中保持单细胞外观，导致斑块的厚度和直径增加。

如此处箭头所示，肿瘤细胞侵入凸轮的中胚层，从而像打开拉链一样扩大了凸轮的内胚层和真皮层之间的距离。如双箭头所示，SW 1 3 5 3 细胞和患者清醒肉瘤的单细胞悬液的生长模式更多地聚集在细胞外基质凝胶中的细胞岛中。如箭头所示，尽管它们的异位生长部位，但我们发现原始肉瘤肿瘤的基本特征和免疫组织化学特征在 cam 中得以保留。

此外，肿瘤移植物血运重建，如箭头所示的深粉蓝色有核鸡红细胞的外观证明，并且在血管中发现 KI 67 阳性和 KI 67 阴性细胞的细胞计数显示，从第 4 天开始，两种细胞系的细胞总数稳步增加。此后，接种后 7 天细胞总数保持稳定，KI 67 阳性细胞的数量和细胞总数开始下降。在凸轮附近观察到较大比例的 KI 67 阳性细胞，在斑块表面观察到较大比例的 KI 67 阴性细胞。

一旦掌握，如果作得当，凸轮 SA 技术可用于在 14 小时内分析 50 倍，分布在三天内。可以进行额外的 h 和 e 染色和评估，每 10 个条件需要 3 小时。遵循此程序。可以执行其他方法，如生活方式成像，以解决其他问题，如流感标记的癌细胞的外渗或化。

因此，通过这项新技术的发展，它使临床前测试领域的研究人员能够探索肉瘤患者的新预后和治疗因素。观看此视频后，您应该对如何在 cmaa 中应用肿瘤材料以及如何将微观和微观观察结果转化为更好地了解肿瘤宿主相互作用有很好的了解。