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DOI: 10.3791/50574-v
Tristan M. Nicholson1,2, Kristen S. Uchtmann1, Conrad D. Valdez1, Ashleigh B. Theberge1,3, Tihomir Miralem1, William A. Ricke1
1Department of Urology,University of Wisconsin-Madison, 2Medical Scientist (MD/PhD) Training Program,University of Rochester School of Medicine & Dentistry, 3Molecular and Environmental Toxicology Center,University of Wisconsin-Madison
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
我们描述了压缩激素粒料的制造方法,以及皮下外科手术植入到小鼠体内。这种策略可以与细胞和组织异种移植物下的无胸腺裸小鼠的肾被膜,以评估内分泌癌和良性前列腺生长的调节生长相结合。
本视频中演示的技术在实验中很有用,评估激素对癌变和前列腺良性生长的调节。第一台上诉压榨机用于制造允许连续给药的激素颗粒。接下来,在肾脏外化后准备带有圆形尖端的玻璃移液器。
移液器吸头用于帮助移植物插入。然后将压缩的激素颗粒皮下植入。最终,获得的结果显示激素治疗对良性组织异种移植物生长的影响。
本视频中介绍的技术易于执行且可重现。这种方法可以帮助回答该领域的关键问题,例如激素如何与良性细胞向恶性肿瘤的转化有关,以及激素如何调节前列腺的良性生长。这项技术的影响延伸到良性人工增生和前列腺癌的潜在新疗法和预防策略。
一般来说,刚接触这项技术的人会遇到肾胶囊的技术方面的困难。异种移植物颗粒在化学安全罩中制备,同时佩戴适当的防护设备,开始用 70% 乙醇彻底清洁造粒设备,以防止交叉污染。接下来,称量所需量的激素粉,留出大约 5% 的额外材料以容纳压榨过程中的损失。
一些激素需要粘合剂或填充剂,在颗粒制造商之前混合。在这里,雌二醇与胆固醇填充剂结合,产生 25 毫克的颗粒。所有物质称重并混合后,将粉末转移到 dset 中。
将染料放在压榨机下方,用力向下推杆以压缩沉淀。使用一致的压力以保持恒定的表面积与体积比。接下来,反转染料支架并再次向下推杆以释放沉淀。
检查颗粒的完整性,并确定最终质量是否在所需范围内。可以在手术前制作颗粒,并根据所用激素或药物的稳定性进行储存,同时佩戴适当的保护装置。将玻璃糊状移液器的尖端穿过火焰,本生灯形成一个火抛光的圆形尖端。
保持移液器的持续和轻微移动,以避免热点。接下来,将移液器以大约 60 度角放入火焰中,以形成弯曲的圆形尖端。该尖端将用于在肾包膜下创建一个用于移植物的口袋。
在开始外科手术之前,请对所有必要的器械进行消毒并准备工作区域。一旦动物被适当麻醉,通过反复使用 Betadine 和酒精对手术部位进行消毒。在该区域应用无菌窗帘后,进行 2 至 3 厘米的背中线切口。
接下来,将下面的真皮与体壁分开。双侧移植时,将切口的两侧分开,或者单侧移植时只分开一侧。分离后,将鼠标置于横向位置,并通过通过肌肉壁观察肾脏概况来定位肾脏。
用拇指和食指轻轻按压可能有助于使用细虹膜剪刀观察内部器官,并注意避开主要血管和脊神经。在体壁上做一个平行于脊柱的一厘米切口。轻轻地将剪刀打开,将这个切口扩大到一厘米半到两厘米。
将它们放入初始切口后,通过在肾脏两侧的肌肉壁外施加轻微的压力来使肾脏外侧。接下来,将皮肤边缘塞入外侧肾脏下方,肾脏将放在体壁上。如果还存在其他结构,则可以在肾脏外侧时轻轻地将它们塞入。
通过涂抹无菌盐水来维持肾包膜的水合作用。轻轻提起肾包膜,切开 2 到 4 毫米。切口的大小由移植物的大小决定,但为了保持胶囊的完整性,应将其最小化。
将先前制备的移液管的圆形封闭端插入胶囊下,与肾脏表面相切。插入后,轻轻打开一个用于移植物的小口袋,要非常小心,以免损坏肾脏。实质组织移植物由手术切除期间获得的新鲜前列腺组织制备。
提起肾囊的切边,将移植物插入口袋中。使用移液器吸头,可以将几个移植物放置在肾包膜下,并在肾脏表面均匀分布。移植完成后,轻轻提起肌肉壁切口的两侧,将肾脏放回体腔中。
确保移植物不会从胶囊下方滑出。在进行皮下颗粒植入之前,使用单缝线闭合肌肉壁。移植完成后,沿颅方向将下面的真皮与体壁分离。
轻轻提起皮肤切口的颅骨,形成一个口袋,同时握住激素颗粒 用直锯齿镊子轻轻地将颗粒插入颈部的皱褶处。使用齿形镊子对齐皮肤边缘,并应用两到三个手术伤口夹以闭合切口。在这个例子中,来自良性前列腺增生患者的原代组织异种移植物补充了外源性睾酮。
在一个月中,箭头表示异种移植位置。肾包膜移植术也可用于评估激素致癌作用。在这里,含有良性前列腺上皮和诱导泌尿生殖系统机械的细胞重组体在未经治疗的小鼠中形成良性生长。
在这个例子中,相同的移植物在接受皮下睾酮和雌二醇沉淀四个月并选择侵入肾包膜的前列腺癌的宿主中生长。看完这个视频,你应该对如何制造和植入压缩激素颗粒,以及如何制作用于手术的火焰抛光玻璃移液器和进行肾包膜异种移植有一个很好的了解。尝试此程序时,重要的是要记住轻柔地处理肾包膜,保持水分,并避免损害肾实质遵循此程序。
可以进行其他方法,如组织学、免疫组织化学和分子技术来检测 R-N-A-D-N-A 或感兴趣的蛋白质。这将允许更好地评估观察到的良性或恶性生长的性质。不要忘记这些实验中使用的激素具有潜在的致畸和致癌性。
压缩激素丸剂制造商应始终在化学安全罩中进行。在本视频中概述的手术的每个步骤中,应始终佩戴适当的个人防护装备。
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