Name: 穿通通路 - 齿状回突触在自由活动的小鼠长时程增强 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: 学习在自由活动小鼠模型中记录穿通通路-齿状回突触的长时程增强（LTP）技术。该方法通过手术植入微电极，建立基线诱发反应，并采用特定刺激方案诱导LTP，为神经生理学和神经系统疾病研究提供重要的实验平台。

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作者谨此致谢以下人员：Joseph Bronzino 博士、Khamis Abu-Hassaballah 博士、R.J. Austin-LaFrance 先生以及 Jessica Koranda 女士。

本方案适用于年龄为3至18个月、体重大约为30-50 g的小鼠。小鼠可从杰克逊实验室（The Jackson Laboratory，缅因州巴港）获得。所有手术和实验方案均经三一学院动物护理与使用委员会批准，并符合《美国国立卫生研究院实验动物护理与使用指南》。
1. 动物准备与手术操作
<ol>
	<li>配制麻醉混合液，包含氯胺酮（25 mg/ml）、赛拉嗪（2.5 mg/ml）和乙酰丙嗪（0.5 mg/ml）。按每公斤体重1 ml的剂量注射至腹部右下象限，并在之后每45分钟追加0.2 ml/kg的剂量，以通过足底回缩反射维持稳定的麻醉深度&#160;。</li>
	<li>使用电动剃毛器剃除小鼠颅骨区域的毛发，以准备手术。剃毛范围应从两眼中间延伸至两耳中间。注意避免剃除胡须，因其属于小鼠桶状感觉系统的一部分。</li>
	<li>使用棉签将异丙醇涂抹于已剃毛的头部区域，随后再涂抹聚维酮碘。然后，同样使用棉签在眼睛上涂抹少量矿物油，以防止眼球干燥。</li>
	<li>使用幼鼠耳套替代常规耳杆，将动物头部固定在立体定位仪装置上。操作时，先将左耳固定于左侧耳套中，然后一手轻扶动物头部，另一手缓慢推进右侧耳套，将右耳轻轻置入。接着，在动物身体下方放置加热垫，并将其设定为86 °F，以维持体温。</li>
	<li>通过尝试左右移动头部来检查双侧刚性。当头部完全固定、无法左右移动但可轻松上下转动时，表明动物已正确安装在立体定位仪上。</li>
	<li>轻轻将小鼠的吻部置于鼻/齿杆组件上，确保门齿轻柔而稳固地嵌入鼻/齿杆的齿孔中。</li>
	<li>使用无菌手术刀，从两眼中间至两耳中间做一条正中切口。操作时应保持手术刀呈45°角，并施加足够压力以切开下方筋膜，但不得穿透颅骨，以免引起过度出血。</li>
	<li>使用棉签分离筋膜并暴露颅骨。颅骨标志点bregma和lambda应清晰可见（图&#160;1A）。通过调节鼻/齿杆，使bregma与lambda处于相同的背腹（DV）位置（+ 0.1 mm），以确保动物处于颅骨水平位。</li>
	<li>在暴露区域滴加少量无菌生理盐水，并用棉签轻轻清洁颅骨。随后等待2–3分钟&#160;，使颅骨完全自然干燥后再继续操作。</li>
	<li>将一根针固定在左侧立体定位臂上，用于测量bregma和lambda的背腹（DV）位置。这两个标志点的DV坐标应相差不超过0.1 mm。若不符合，可通过上下调节立体定位仪的鼻杆进行校正。</li>
	<li>将针尖置于bregma处，记录其前后（AP）、左右（LAT）和背腹（DV）坐标。注意针尖仅接触颅骨表面，不得刺入。</li>
	<li>使用小鼠脑图谱（如《The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates》1），确定目标结构的坐标：相对于lambda的海马角束内侧穿通路径（mPP）和相对于bregma的齿状回（DG）（另见表1）。然后使用细尖笔或铅笔在颅骨上标记这些点。</li>
	<li>在颅骨对侧再标记两个点，分别作为接地（GND）和参考（REF）电极位置，距离中线约3 mm，并沿纵向相互对齐（图&#160;1A，另见表1）。</li>
	<li>从左侧立体定位臂上取下针状标记物，更换为配备立体定位支架的电动牙科钻。将钻头对准每个标记点，钻出直径约0.5 mm的小孔。钻孔时采用重复的上下运动，并频繁检查是否已穿透颅骨以暴露脑表面。</li>
	<li>在对侧两个孔（GND和REF）中，牢固而轻柔地旋入螺钉电极（#0-80 1/8英寸不锈钢机械螺钉，槽型圆头），使其刚好接触皮层表面但不穿透（图&#160;1A）。这两个螺钉电极分别作为接地和参考电极。</li>
	<li>将刺激电极和记录电极分别安装在左侧和右侧立体定位臂的电极夹持器中。</li>
	<li>将刺激电极的接线端连接至带有电流隔离功能的电生理刺激器，将记录电极的接线端连接至电生理差分放大器（增益 = 1,000，带通滤波器 = 1 Hz–3 kHz），再连接至数字示波器以目视检查诱发电位。&#160;同时，将GND和REF电极的接线端连接至差分放大器。</li>
	<li>以0.5 mm为步长，缓慢而轻柔地下降刺激和记录电极，同时观察对600–800 µA刺激脉冲的诱发电位反应。持续下降电极，直至达到各自的目标背腹（DV）位置，并在示波器上观察到典型信号（图&#160;1B）。</li>
	<li>随后，使用牙科丙烯酸树脂水泥制作固定帽，以固定电极接线端；任何接触皮肤的牙科水泥应立即擦除。&#160;待牙科水泥完全固化后，将动物从立体定位仪转移至清洁的啮齿类动物笼中，并使用加热灯或加热垫维持核心体温。</li>
	<li>每小时监测动物一次，直至其恢复意识。可注射氟尼辛作为镇痛剂。</li>
</ol>
2. LTP 诱导
<ol>
	<li>让动物术后恢复 5-7 天。将动物放入记录环境，该环境由一个法拉第笼（122 cm ×&#160;43 cm ×&#160;43 cm）构成，笼内配有隔音材料，并通过一个 5 通道旋转换向器将电极导线连接至刺激/记录装置。</li>
	<li>在连接电极至刺激与记录仪器前（参见步骤 1.17），让动物在记录环境中适应 1-2 小时。</li>
	<li>将刺激器设置为输出 400 µA，记录约 10 次诱发电位的平均幅值，确保每次刺激之间至少间隔 10 秒&#160;。采用图&#160;1C所示方法对诱发电位进行量化。重复此操作，依次测试 600、800、1,000、1,200 和 1,400 µA 的刺激强度。</li>
	<li>通过绘制诱发电位平均幅值随刺激强度变化的曲线，构建输入/输出曲线。根据该曲线确定对应于最大幅值 50% 的刺激强度，并在后续实验中使用该 50% 强度。</li>
	<li>随后，使用 50% 的刺激强度，每分钟记录 5 次诱发电位的平均幅值，持续 15 分钟，以获取基线数据&#160;。同样需确保每次刺激之间至少间隔 10 秒&#160;。</li>
	<li>接着，向内侧穿通通路施加强直刺激，参数为：共 10 组，每组 10 个脉冲，频率为 400 Hz，组间频率为 5 Hz。密切观察动物是否出现癫痫发作迹象，包括“湿狗抖动”。若动物发生癫痫，应立即终止实验，并将该动物的所有数据从研究结果中剔除。</li>
	<li>然后，在强直刺激后继续每分钟记录 5 次诱发电位的平均幅值，持续 30 分钟&#160;。之后，通过计算相对于步骤 2.5 所得基线幅值的百分比变化，比较该幅值与基线（图&#160;2）。</li>
	<li>实验结束后，通过吸入异氟烷对动物实施安乐死，该方法符合美国兽医医学协会《安乐死指南》的规定。</li>
</ol>

<ol><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Compact 2nd edn, Elsevier Academic Press. (2004).</li>
<li>Bliss, T. V. P., Lomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+anesthetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anesthetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J. Physiol. 232, 331-356 (1973).</li>
<li>Blaise, J. H., Bronzino, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+stimulus+frequency+and+age+on+bidirectional+synaptic+plasticity+in+the+dentate+gyrus+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of stimulus frequency and age on bidirectional synaptic plasticity in the dentate gyrus of freely moving rats.</a> Exp. Neurol. 182, 497-506 (2003).</li>
<li>Blaise, J. H., Koranda, J. L., Chow, U., Haines, K. E., Dorward, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+isolation+stress+alters+bidirectional+long-term+synaptic+plasticity+in+amygdalo-hippocampal+synapses+in+freely+behaving+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neonatal isolation stress alters bidirectional long-term synaptic plasticity in amygdalo-hippocampal synapses in freely behaving adult rats.</a> Brain Res. 1193, 25-33 (2008).</li>
<li>Koranda, J. L., Masino, S. A., Blaise, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+synaptic+plasticity+in+the+dentate+gyrus+of+the+awake+freely+behaving+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Bidirectional synaptic plasticity in the dentate gyrus of the awake freely behaving mouse.</a> J. Neurosci. Methods. 167, 160-166 (2008).</li>
<li>Cooke, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophosphorylation+of+alphaCaMKII+is+not+a+general+requirement+for+NMDA+receptor-dependent+LTP+in+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Autophosphorylation of alphaCaMKII is not a general requirement for NMDA receptor-dependent LTP in the adult mouse.</a> J. Physiol. 574, 805-818 (2006).</li>
<li>Davis, S., Bliss, T. V., Dutrieux, G., Laroche, S., Errington, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+duration+of+long-term+potentiation+in+the+hippocampus+of+the+freely+moving+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Induction and duration of long-term potentiation in the hippocampus of the freely moving mouse.</a> J. Neurosci. Methods. 75, 75-80 (1997).</li>
<li>Jones, M. W., Peckham, H. M., Errington, M. L., Bliss, T. V., Routtenberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+awake+C57BL%2F6+and+DBA%2F2+mice%3A+interstrain+differences+and+parallels+with+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in the hippocampus of awake C57BL/6 and DBA/2 mice: interstrain differences and parallels with behavior.</a> Hippocampus. 11, 391-396 (2001).</li>
<li>Zhang, T. A., Tang, J., Pidoplichko, V. I., Dani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addictive+nicotine+alters+local+circuit+inhibition+during+the+induction+of+in+vivo+hippocampal+synaptic+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Addictive nicotine alters local circuit inhibition during the induction of in vivo hippocampal synaptic potentiation.</a> J. Neurosci. 30, 6443-6453 (2010).</li>
<li>Tang, J., Dani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+enables+in+vivo+synaptic+plasticity+associated+with+the+addictive+drug+nicotine%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dopamine enables in vivo synaptic plasticity associated with the addictive drug nicotine.</a> Neuron. 63, 673-682 (2009).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

在本实验方案中，我们展示了一种可靠且简便的方法，用于在自由活动的小鼠中研究齿状回（DG）的长时程增强（LTP）。尽管已有大量关于清醒大鼠LTP的研究3,4，但在清醒小鼠中开展的研究却极为有限，主要原因是小鼠颅骨可用空间较小，且电极头端装置的重量相对于小鼠的平均体重带来了较大的技术挑战5。少数在自由活动小鼠中成功展示DG区LTP的研究，均采用了微型驱动电极系统或在头端集成结型场效应晶体管（jFET）前置放大器的方法，而这必然会增加动物所承受的电极负载负担6-10。本方案的重要意义在于，相较于现有方法，它在诱导自由活动小鼠DG区LTP方面实现了改进，避免了使用微型驱动电极系统或头端jFET装置。
需要重点强调本实验方案中的关键步骤，包括：1）将小鼠头部固定于立体定位仪框架中，确保其双侧稳固（此步骤可能是最具挑战性的，因其需要操作者具备熟练的技巧和对该技术的熟悉）；2）为最大化反应幅度，应优化电极的放置位置，可通过调整立体定位仪的门齿杆，使前囟（bregma）与后囟（lambda）处于同一水平面，通常要求两者在背腹方向上的...

基因操作技术的发展已几乎为所有神经退行性疾病和神经系统疾病建立了转基因和基因敲除小鼠模型。这促使以往用于较大啮齿类动物的电生理学研究技术必须向小鼠动物模型转化。其中一种神经生理学研究技术是利用长时程增强（LTP）来检测参与多种神经病理学障碍的神经元网络中突触连接的有效性。本方案描述了在自由活动小鼠中进行可靠电生理学LTP研究的技术。与其它方法相比，本方案的优势在于操作简单、易于实施；成本也相对较低，因其无需使用昂贵的计算机控制微驱动系统或场效应晶体管头部放大器；据我们所知，这是首个针对自由活动小鼠进行慢性电生理记录以研究LTP的视频方案。为此，本文详细介绍了在自由活动小鼠中研究长时程增强的简便方法。这些方法可直接应用于神经病理学障碍的转基因和基因敲除小鼠模型。

<table><tbody><tr><td>氯胺酮（100 mg/ml）</td><td>Henry Schein</td><td>10177</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪（20 mg/ml）</td><td>Henry Schein</td><td>33197</td><td></td></tr><tr><td>乙酰丙嗪（10 mg/ml）</td><td>Henry Schein</td><td>2177</td><td></td></tr><tr><td>牙科丙烯酸粉末</td><td>Lang Dental Manufacturing Co.</td><td>1330CLR</td><td></td></tr><tr><td>牙科丙烯酸液体</td><td>Lang Dental Manufacturing Co.</td><td>1306CLR</td><td></td></tr><tr><td>钨丝（0.127 mm）</td><td>World Precision Instruments</td><td>TGW0515</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢皮下注射管（0.286 mm）</td><td>World Precision Instruments</td><td>832400</td><td></td></tr><tr><td>氟尼辛（50 mg/ml）</td><td>Henry Schein</td><td>14165</td><td></td></tr><tr><td>Epoxilyte</td><td>Superior Essex</td><td>EP 6001-M</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢导丝插件（0.2 mm）</td><td>World Precision Instruments</td><td>792900</td><td></td></tr><tr><td>立体定位仪装置</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 902</td><td></td></tr><tr><td>耳杆（耳杯）</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 921</td><td></td></tr><tr><td>电生理刺激器</td><td>Astro-Med, Inc.</td><td>S88</td><td></td></tr><tr><td>数字示波器</td><td>B K Precision Corp.</td><td>2542</td><td></td></tr><tr><td>电流隔离单元</td><td>Astro-Med, Inc.</td><td>PSIU-6</td><td></td></tr><tr><td>差分放大器</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>DAM-50</td><td></td></tr><tr><td>换向器</td><td>Plastics One</td><td>SLC6</td><td></td></tr><tr><td>牙科钻</td><td>Stoelting</td><td>58650</td><td></td></tr></tbody></table>

自由活动小鼠中穿通通路-齿状回突触的长时程增强

Long-term Potentiation of Perforant Pathway-dentate Gyrus Synapse in Freely Behaving Mice

突触效能的长时程增强（long-term potentiation）是一种依赖于神经活动的突触现象，其特性使其成为学习与信息存储潜在细胞机制的有力候选。长期以来，研究人员利用该现象来阐明海马体、杏仁核及其他边缘系统和皮层结构中多种神经回路的生理特性。基于此，神经系统疾病的转基因小鼠模型为开展长时程增强研究提供了有效的实验平台&#160;长时程增强（LTP）研究有助于深入理解基因在学习、情绪和信息处理相关神经网络中正常与异常突触传递中的作用。本文介绍了在自由活动小鼠中可靠诱导LTP的方法学，这些方法可用于转基因和基因敲除自由活动小鼠的研究。&#160;神经退行性疾病的行为学小鼠模型

表1列出了本方案中使用的齿状回（DG）和内侧内嗅皮层（mPP）的坐标。图1A显示了颅骨上目标结构的定位标记，同时展示了接地电极和参考电极的位置。图1B展示了同一动物在强直刺激前和强直刺激后的代表性诱发电位轨迹。请注意，强直刺激后的诱发电位幅度大于刺激前，表明长时程增强（LTP）已被成功诱导2。图1C说明了用于量化反应幅度的方法。实际上，图2展示了在强直刺激前后时间段内反应幅度随时间变化的百分比。值得注意的是，LTP峰值超过100%。强直刺激后反应幅度增强的结果表明，该方案在自由活动的小鼠模型中研究LTP是成功的，因而具有可靠性。
<img alt="脑结构坐标表；前后（AP）、左右（LAT）、背腹（DV）轴的测量值，单位为毫米。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_up...

转基因和基因敲除神经疾病小鼠模型有助于研究基因在正常与异常神经生理功能中的作用。本文描述了可用于研究转基因和基因敲除自由活动小鼠中长时程增强作用的方法，长时程增强是一种可能构成学习与记忆基础的细胞机制。&#160;神经病理学行为学小鼠模型

突触效能长时程增强的研究，这是一种依赖于神经活动的突触现象，其特性使其成为潜在的……

本实验的总体目标是演示在自由活动的小鼠模型中记录长时程增强（LTP）的方法。首先通过手术将微电极植入穿通通路和齿状回，然后通过单脉冲刺激穿通通路，记录齿状回中的基础诱发电位反应。在给予诱导刺激方案后，诱导下一阶段的长时程增强（LTP）。最后一步是记录突触后反应，并将其与基线值进行比较。最终表现为群体峰电位幅度增强。通过记录诱发电位的变化来显示LTP的连续诱导。与现有的体外脑片制备等方法相比，该技术的主要优势在于，自由活动的小鼠模型为研究神经药理学药物或基因操作对人类神经系统疾病动物模型的影响提供了最具生理相关性的平台。开始操作时，需剃除小鼠头部自眼睛上方至耳前区域的毛发，注意不要剃掉胡须，因为胡须属于小鼠桶状感觉系统的重要组成部分。接下来，先用异丙醇清洁已剃毛的区域，再用聚维酮碘擦拭，然后用棉签在眼睛上涂抹少量矿物油，以防止眼睛干涩。将小鼠转移至立体定位仪上。使用幼鼠用耳杆代替常规耳棒来固定动物头部，首先将左耳固定在左侧耳杆上。然后用一只手托住动物的头部，另一只手推动耳杆，将右侧耳朵轻轻放入右侧耳杆中。接着，在动物身体下方放置加热垫，并将其温度设置为86华氏度，以维持动物体温。随后通过尝试左右移动头部来检查双侧刚性：当头部 rigid（刚性固定），无法左右移动，但可轻松上下转动时，表明动物已正确固定在立体定位仪上。随后将小鼠的鼻部置于齿栏组件上，确保门齿轻柔但稳固地卡在齿栏的齿孔内。使用无菌手术刀，从两眼中间开始沿中线向耳部中点做切口。操作时应使手术刀与组织表面呈45度角，并施加适当压力以切开下方筋膜，但避免切入颅骨，以免引起大量出血。然后使用棉签分离筋膜，并用弯止血钳暴露颅骨。颅骨的解剖标志点bgma和人字缝应清晰可见。通过调节门齿杆，使bgma和人字缝处于相同的背腹（DV）位置，以确保动物颅骨处于水平状态。接下来，用少量无菌生理盐水清洁暴露的颅骨，并等待两到三分钟，使颅骨完全自然干燥后再继续操作。然后，将一根针安装到左侧立体定位仪臂上，用于测量bgma和lambda的腹背（DV）位置。确保它们之间的距离在0.1毫米以内。如果不符合，上下调节立体定位仪框架的鼻夹，直至达到该要求。然后将针头置于B区bgma位置，并记录其前后（AP）、左右（L-A-T）、上下（N-D-V）的测量值。确保针尖刚好接触颅骨而不穿透。使用小鼠脑图谱，根据λ点和bgma确定目标结构的坐标。在本例中，目标结构为角束内的内侧前脑束通路以及海马的齿状回。然后使用细头笔或铅笔在颅骨上标记这些点。接着，在颅骨的对侧再标记两个点。这两个点将作为接地电极，应距离中线约三毫米，并在纵向上相互对齐。随后，从左侧立体定位仪臂上取下针状标记物，更换为装有立体定位支架的电动牙科钻。将钻头置于每个标记点上方，制备直径约0.5毫米的小型骨窗。钻孔时，采用重复的上下运动，并频繁检查钻头是否已穿透颅骨，以暴露脑表面。然后，轻柔而稳固地将螺钉电极插入每一侧相对的骨孔中，使其刚好接触皮层表面但不穿透。这两个螺钉电极分别作为接地极和参考电极。随后，将刺激电极和记录电极分别安装在左侧和右侧立体定位臂的电极夹中。然后，将刺激电极的接线端连接至带有电流隔离功能的电生理刺激器，将记录电极的接线端连接至电生理差分放大器，再连接至数字示波器，以对诱发电信号进行可视化观察。接下来，将接地电极和参考电极连接至差分放大器，然后缓慢而轻柔地以0.5毫米的步长将刺激电极逐步下降至内侧纵束通路，同时将记录电极下降至齿状回。使用示波器监测单脉冲刺激所诱发的反应。每次电极下降后，继续调节电极位置，直至其分别到达目标的背腹侧（DV）位置，并在示波器上观察到典型的信号。随后，使用牙科丙烯酸树脂水泥制作一个固定帽，以稳定电极的连接端。 任何接触到皮肤的牙科水泥都应立即擦除。待牙科水泥完全固化后，将动物从立体定位仪转移至清洁的啮齿类动物笼中，并使用加热灯或加热垫维持其核心体温。每小时监测动物一次，直至其恢复意识。在动物术后恢复五到七天后，可注射复欣作为镇痛剂。将动物置于记录环境中，该环境包括一个装有隔音材料的法拉第笼，以及一个五通道旋转换向器，该换向器连接通向刺激-记录装置的电极。在将电极连接至刺激和记录仪器之前，让动物在记录环境中适应一到两个小时。接下来，将刺激器的控制参数设置为输出 400 微安。记录至少间隔 10 秒的刺激之间 10 次诱发电位的平均幅度，并对 600、800、1000、1200 和 1400 微安的刺激强度重复此操作。然后使用本图所示的方法对诱发电位的幅度进行量化。通过绘制诱发电反应的平均幅度与刺激强度的关系图，构建输入-输出曲线。然后确定对应于所测最大幅度50%的刺激强度，并在后续实验中使用该强度。接下来，每隔至少10秒给予一次刺激，每分钟记录5次诱发电反应的平均幅度，持续15分钟，以获得基线数据。随后将Titanic刺激递送至内侧被盖通路。同时，密切监测动物是否出现癫痫发作的迹象，包括湿狗样抖动。若动物发生癫痫发作，应立即终止实验，并将该动物的所有数据从研究结果中剔除。然后继续每分钟记录一次诱发反应的平均振幅，持续30分钟。之后进行给药后记录，通过计算相对于先前获得的基线振幅的百分比变化来比较该振幅。此处展示的是电极在小鼠颅骨上相对位置的示意图，以及给药前后典型的诱发反应轨迹图。该图显示了自由活动小鼠内侧外周通路齿状回突触的长时程增强（LTP）诱导。一旦掌握，若操作得当，该技术可在两小时内完成。在进行该操作时，需注意频繁检查动物，以确保麻醉深度维持在适当水平。观看本视频后，您应能够充分掌握如何执行立体定位手术，以长期植入微电极，进而用于在自由活动的小鼠中记录长时程增强（LTP）。

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穿通通路 - 齿状回突触在自由活动的小鼠长时程增强

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来源：Zhao, Z. 等．通过高频刺激激活小鼠齿状回的侵入性方法．J. Vis.

高频刺激增强小鼠齿状回神经元激活与神经发生

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海马体小鼠脑片的改良制备与保存方法以实现长期增强作用的非常稳定且可重复的记录

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通过电生理场电位记录研究海马CA1区跨层间的长期突触可塑性

本文旨在描述一种系统性的方案，用于获取小鼠的水平脑切片。该方法的目的是保持海马纤维通路（如穿通通路和苔藓纤维束）的完整性，以评估与齿状回相关的神经过程。...

小鼠脑水平海马切片

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诱导背外侧膝状体核神经元内在兴奋性的长期可塑性

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自由活动小鼠中穿通通路-齿状回突触的长时程增强

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