在面部移植非洲爪蟾胚胎

的技术移栽"至尊前域" 非洲爪蟾的面巾纸蟾胚胎已经研制成功。组织可以从一个基因表达的背景被转移到另一个，允许对颅面发展和信令面部区域之间的相互作用当地要求的研究。

该程序的总体目标是在 xenopus Levi 胚胎之间移植极端前域或 EAD 面部组织。这是通过首先从不同遗传背景的供体和受体胚胎中去除 EAD 组织来实现的。接下来，将供体胚胎的 EAD Expart 插入受体胚胎的面部。

在最后一步中，移植的胚胎在受精后维持 60 至 70 小时以进行观察。最终，明场和荧光显微镜可用于观察移植动物颅面发育的变化。这种方法可以帮助回答 C 颅面发育领域的关键问题，以提高我们对 C 颅面畸形的理解，例如口腔发育所需的新信号从极前领域升起，手术前将毛细管装入拔针器，然后拉动 4 到 6 根针，每根针都折断，这样玻璃尖端的 2 到 3 毫米的柔性毛状部分就被完全去除。

尖端必须相对坚硬，但足够窄以用作切割工具。然后点燃本生灯，将玻璃牧场移液管的尖端放入火焰的蓝色部分，旋转移液管，使尖端熔化，孔完全密封，形成一个封闭的圆形末端。要制作玻璃桥，请使用长标准图案镊子小心地折断 3 毫米 x 3 毫米的盖玻片。

然后用镊子夹住盖玻片，将玻璃杯放入火焰中，直到所有四个边缘都软化并向下弯曲，形成一个小玻璃圆顶。下一行，一个 60 毫米的塑料培养皿，带有红色、白色或黄色造型粘土。并在盘子中加入 3%phi。

调用 0.5 XMBS 解决方案。然后在实验前 48 小时，使用火焰牧场（您的管道宠物工具）在粘土中制作 40 到 60 个 2 到 3 毫米的浅凹陷，大约是 20 期胚胎体的深度。从雌性青蛙身上获取卵并在体外受精。

然后在给胚胎注射加盖膜、GFP mRNA 和任何其他信息后，将它们在 15 摄氏度下储存 48 小时，直到它们达到 19 至 20 阶段。在移植实验当天，使用荧光显微镜选择显示均匀明亮荧光的注射胚胎。用 70% 乙醇擦拭作表面立体显微镜和工具后，使用 5 45 号杜蒙镊子在立体显微镜下去除每个选定胚胎的 Vitale 膜。

然后使用塑料刻度移液管将吸头切掉，将宿主胚胎移动到作皿中。小心不要将胚胎接触空气水界面。将胚胎的后侧向下插入粘土凹陷中，用镊子轻轻闭合每个胚胎基底周围的粘土，使头部从凹陷中伸出。要先去除供体面，请将一根拉出的针头插入骨水泥腺左侧的胚胎头部，使其从胚胎外部穿过头部进入前肠。

将针头从头部的左侧到右侧轻弹，穿过水泥压盖的整个宽度，以干净利落地切割。然后将针头放在水泥压盖左缘的切口起点，向上轻弹针头，直到它到达左眼的底部，从水泥压盖的左边界到左眼底部形成垂直切口。接下来，将针头放在水泥腺的右边缘，然后向上弹针，直到它到达右眼的底部，从水泥腺的右边界到右眼的底部形成一个垂直切口。

然后要完全切除组织，将针头从左眼底部轻弹到右眼底部，形成一个水平切口，从而释放组织。现在轻轻地将切除组织推到针尖上，并将其通过缓冲液提升到包含宿主胚胎的培养皿部分。如刚才所示，从宿主胚胎中切除组织，丢弃宿主，EAD 解释，并将供体解释插入所得宿主整体中。

一旦供体组织正确定位并小心地完全插入，将先前准备好的玻璃桥之一放在胚胎的表面以将移植物固定到位，将桥的末端插入粘土以稳定它。手术休息后，胚胎在室温下不受干扰 2 到 3 小时。然后，一旦移植物愈合，小心地去除胚胎上的玻璃桥和胚胎基部周围的粘土。

然后使用塑料刻度移液管轻轻地将胚胎从凹陷中吸出。将胚胎转移到适当标记的培养皿中，半满干净的 0.1 XMBS 并补充庆大霉素，并在 15 至 18 摄氏度下培养胚胎数天，直到它们达到 40 期。每天更换 MBS 溶液，通过荧光观察移植组织，以确认解释物仍然愈合在原地。

正如刚才所证明的那样，移植的组织应在移植后完全插入宿主头部，并且必须正确调整宿主开口的大小，以便移植成功。EAD 组织不应以任何方式从头部突出，从这两张位置不正确的解释图像中可以看出。此外，面部移植不应相对于其在供体中的位置旋转，如图所示。

几个小时后，移植的组织和周围的面部应该会愈合，到第二天，胚胎应该会出现在这些图像中所示的例子中，因为刚刚演示的荧光显微镜可用于确认移植物在愈合过程中保持在原位。在第 42 阶段，移植的对照组织将进入口腔并保持荧光绿色。看完这个视频，你应该对如何将 EAD 组织从一个胚胎移植到另一个胚胎有一个很好的了解。

促进使用这种方法来识别 EAD 的哪个胚层或区域对面部发育最关键。