Name: 一个过程来研究延长食品的限制对海洛因寻求戒断大鼠的影响 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-11T20:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: 了解食物限制对戒断期大鼠海洛因觅药行为的影响机制。本研究通过手术植入颈静脉导管，利用操作性条件反射箱训练大鼠自我给药，建立戒断模型，为成瘾复发研究提供重要实验方法。

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这项工作得到了自然科学基金的资助 &amp;#38; 工程委员会发现计划（美国：298915）、魁北克研究基金-健康（CSBN）以及加拿大研究主席计划（美国）。

1. 动物
所有大鼠的处理均遵循加拿大动物护理委员会的指南，并已获得康考迪亚大学动物研究伦理委员会对所有实验程序的批准。
<ol>
	<li>选取体重为275-300 g（雄性）或225-250 g（雌性）的大鼠。手术前将大鼠成对饲养于标准塑料笼中，笼内垫有玉米芯 bedding 并提供碎纸屑。</li>
	<li>将大鼠维持在反转的光暗循环周期中（上午9:30关灯）。</li>
	<li>除戒断期外，食物和水均自由供应（ad libitum）。我们使用常规大鼠饲料（20.9% 蛋白质、67.2% 碳水化合物和11.8% 脂肪）。</li>
</ol>
2. 导管和连接器
<ol>
	<li>批量制备导管，经高压灭菌后可在较长时间内按需使用。</li>
	<li>将硅胶管剪成12 cm长的节段。
	<ol>
		<li>使用牙签在距离导管尖端3 cm处周围涂抹少量硅胶。</li>
		<li>让硅胶干燥24小时，然后进行高压灭菌并储存导管。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将用作连接器的&#34;5-up&#34;套管的长管部分弯成直角，使其垂直于塑料基座，然后进行高压灭菌并储存。</li>
	<li>在手术当天无菌条件下组装导管，将硅胶管的&#34;长&#34;端套入&#34;5-up&#34;套管弯曲的金属管上，插入深度约为塑料基座的一半。
	<ol>
		<li>通过Tygon管和钝化的22 G针头，将&#34;5-up&#34;套管连接至装有无菌生理盐水的1 ml注射器。</li>
		<li>用生理盐水冲洗导管，以确保液体流通无阻。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 静脉导管手术
<ol>
	<li>在手术前，让大鼠在动物饲养设施（ACF）中适应一周时间。不要对体重低于300–325 g（雄性）或250–275 g（雌性）的大鼠进行手术。</li>
	<li>手术前称重大鼠体重，并通过腹腔注射给予氯胺酮/赛拉嗪混合物（90/13 mg/kg）进行麻醉。
	<ol>
		<li>用剃毛器剃除头部以及右肩部位（靠近颈部基部）的毛发，然后用酒精和外科消毒液清洁该区域。</li>
		<li>皮下注射青霉素（450,000 IU/只大鼠）以预防感染，以及2 ml生理盐水（皮下）以维持水合状态。在大鼠眼睛上涂抹眼用凝胶，防止麻醉引起的角膜干燥。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将大鼠置于俯卧位，使用手术刀在头部顶端、两眼之间做一切口，并向耳部方向尾侧延伸。</li>
	<li>将大鼠转为仰卧位，前肢用胶带固定于操作台表面。用镊子提起锁骨稍前方切口处的皮肤，用小剪刀做一条长约1 cm的纵向切口。</li>
	<li>使用两把直镊子分离&#160;脂肪及其他&#160;组织&#160;，直至暴露颈外静脉。</li>
	<li>将直镊子的尖端插入静脉下方，抬起并分离静脉与周围组织。小心清除附着在静脉上的任何组织，然后将弯镊子插入静脉下方，以保持静脉抬高并轻微拉伸。</li>
	<li>使用小型弹簧剪刀在静脉上表面做一个小的V形切口。
	<ol>
		<li>使用血管扩张器撑开切口，将导管的&#34;短&#34;端（3 cm）沿静脉向心脏方向插入，直至硅胶滴到达切口位置。</li>
		<li>用三根缝线将导管固定于静脉：一根尽可能靠尾侧，一根位于硅胶滴稍前方，第三根尽可能靠头侧。</li>
		<li>每缝合一次后均通过导管灌注生理盐水，以确保导管通畅且缝线不过紧。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>移除前肢周围的胶带，将大鼠转为腹侧朝下体位。
	<ol>
		<li>将止血钳从头部切口的尾侧插入，推动以分离皮肤与下方组织，形成一个皮下&#34;囊袋&#34;。</li>
		<li>将止血钳经皮下引导至肩部开口处，即导管插入的位置。</li>
		<li>用止血钳穿透结缔组织，并在最靠头侧的位置牢固夹住导管，位置位于&#34;5-up.&#34;基部下方。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>拆下&#34;5-up&#34;，将导管的长端经皮下引导，从位于大鼠头部顶端的切口穿出。
	<ol>
		<li>使用剪刀在止血钳夹持位置下方剪断导管，并重新连接&#34;5-up&#34;的长端。</li>
		<li>将导管沿&#34;5-up&#34;的金属轴完全拉至塑料基座处。灌注生理盐水以确认通畅无阻。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将大鼠置于仰卧位，仅缝合锁骨附近的切口。头部切口应保持&#160;开放&#160;状态。</li>
	<li>将大鼠固定于立体定位仪中。使用止血钳夹住头部顶端的切口皮肤并向外牵拉，清洁并干燥颅骨表面。</li>
	<li>使用手动钻头在颅骨上钻4至5个孔，并将机用螺钉插入孔中，作为头帽的支撑结构。
	<ol>
		<li>将&#34;5-up&#34;连接器置于螺钉之间，并将导管多余长度部分塞入先前用止血钳创建的皮下&#34;囊袋&#34;中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用牙科水泥将&#34;5-up&#34;固定于颅骨顶部。待水泥完全干燥后，将大鼠从立体定位仪中取出。</li>
	<li>给予大鼠术后护理，包括皮下注射酮洛芬（镇痛剂；5 mg/kg）和2 ml生理盐水（皮下）。术后连续再给予酮洛芬2天，以帮助控制疼痛。</li>
	<li>术后48小时&#160;开始，在约2天的恢复期以及海洛因自我给药阶段期间，每日用肝素和庆大霉素的无菌生理盐水混合液（7.5 IU + 12 µg；0.2–0.3 ml）冲洗大鼠导管。</li>
</ol>
4. 行为学实验步骤
食物限制诱导海洛因觅药行为增强实验操作的时间线见图1。
<ol>
	<li>操作性条件反射箱
	<ol>
		<li>将家鼠单独饲养在操作性条件反射箱内，该箱子置于配备风扇的隔音木质隔间中。</li>
		<li>每个实验舱由不锈钢金属网格地板、前后透明有机玻璃壁以及两侧金属板壁组成。在右侧壁距离地板9 cm处安装两个可伸缩杠杆，每个杠杆上方设置一个提示灯。按压与药物配对的（有效）杠杆会激活输注泵，而按压未与药物配对的（无效）杠杆则不产生可编程的后果。</li>
		<li>在主动杠杆上方安装一个音调模块（2.9 kHz），并在左侧壁顶部中央位置放置一个红色笼顶灯。</li>
		<li>通过液态旋转接头和由金属弹簧保护的Tygon管路将药物泵连接至导管。此外，在每个实验舱内配备一个食槽和一个饮水瓶，以确保动物可自由获取食物和水。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>适应期：
	<ol>
		<li>手术恢复后，将大鼠转移至操作式训练箱，使其适应环境24小时。</li>
		<li>不要将大鼠连接到金属弹簧，也不要激活提示灯/提示音复合装置。</li>
		<li>确保活动杠杆保持缩回状态，同时使非活动杠杆处于伸出状态，以帮助在训练期间区分两个杠杆。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>海洛因自我给药：
	<ol>
		<li>将五通连接器连接到Tygon管并安装金属弹簧。</li>
		<li>让大鼠在为期10天的实验中，每天进行3次持续3小时的自给海洛因（0.1 mg/kg/注射）训练，每次训练间隔3小时。</li>
		<li>每次实验均在暗期开始后进行（本实验室约为上午9:30），首先伸出活动杠杆和非活动杠杆，同时点亮屋内灯，并启动提示灯光/声音复合信号，持续30秒。</li>
		<li>按压主动杠杆将触发药物泵（5秒，0.13毫升/次输注）并启动20秒的超时周期，在此期间笼内灯关闭，主动杠杆上方的提示灯光/声音组合被激活（固定比率-1，20秒超时）。在超时期间，主动杠杆的按压行为会被记录，但不给予强化。非主动杠杆的按压行为也会被记录，但无任何程序设定的后果。</li>
		<li>每次3小时的训练结束后，活动杠杆被收回，而非活动杠杆则保持伸出状态，直至次日第一次训练开始前1小时。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>禁欲与食物限制：
	<ol>
		<li>完成自我给药训练后，将大鼠从操作性条件反射箱中移出，单独饲养于ACF环境中，并给予自由摄取食物和饮水的权利，持续一天以完成药物洗脱。</li>
		<li>将大鼠分为两组：食物限制组（FDR）和饱食组，根据训练最后5天的体重、输注次数和主动杠杆反应次数进行匹配。</li>
		<li>在药物洗脱日之后，移除FDR大鼠的食物，并于下午1时30分给予约15 g的大鼠饲料。在14天的戒断期间，根据需要调整饲料量，以维持FDR大鼠的体重（BW）约为其自身基线体重的90%。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>觅药测试：在禁药第14天的上午，将大鼠放回操作性条件反射箱并连接至金属弹簧。进行1小时或3小时的测试阶段，期间按压主动杠杆和非主动杠杆产生的结果与自我给药训练阶段相同，但不提供药物。即&#160;在消光条件下</li>
</ol>

<ol><li>Jaffe, J. H. Drug addiction and drug abuse. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJaffe%2C+JH+%22Goodman+%26+Gilman%27s+the+pharmacological+basis+of+therapeutics%22">Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics</a>. Gilman, A. G., Rall, T. W., Nies, A. S., Taylor, P. , Pergamon Press. New York. 522-573 (1990).</li>
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<li>Shalev, U., Highfield, D., Yap, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+relapse+to+drug+seeking+in+rats%3A+studies+on+the+generality+of+the+effect%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Stress and relapse to drug seeking in rats: studies on the generality of the effect.</a> Psychopharmacology. 150, 337-346 (2000).</li>
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<li>Zacny, J. P., de Wit, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+a+restricted+feeding+regimen+on+cigarette+smoking+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Addict.+Behav%22%5BJournal%5D)">The effects of a restricted feeding regimen on cigarette smoking in humans.</a> Addict. Behav. 17, 149-157 (1992).</li>
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<li>D'Cunha, T. M., Sedki, F., Macri, J., Casola, C., Shalev, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+chronic+food+restriction+on+cue-induced+heroin+seeking+in+abstinent+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">The effects of chronic food restriction on cue-induced heroin seeking in abstinent male rats.</a> Psychopharmacology. 225, 241-250 (2013).</li>
<li>Caprioli, D., Celentano, M., Dubla, A., Lucantonio, F., Nencini, P., Badiani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambience+and+drug+choice%3A+cocaine-+and+heroin-taking+as+a+function+of+environmental+context+in+humans+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Ambience and drug choice: cocaine- and heroin-taking as a function of environmental context in humans and rats.</a> Biol. Psychiatry. 65, 893-899 (2009).</li>
</ol>

所有实验程序均获得康考迪亚大学动物研究伦理委员会的批准，符合加拿大动物护理委员会的指导方针。作者声明不存在任何竞争性财务利益。FS 和 TD 对本文所述实验方案的开发及论文撰写均作出了同等贡献。

此处描述的实验程序具有较强的表面效度，原因如下：1）允许动物自主摄入药物并控制给药过程；2）采用的给药途径与人类成瘾者中常见的途径一致；3）能够反映（相对）长期的药物暴露与戒断期；4）在药物寻求测试前避免了复吸实验程序中必需但在人类成瘾者中极少出现的消退训练过程14。此外，该程序还模拟了长期的食物限制状态，这在考虑热量限制对药物寻求行为影响时被认为至关重要5。
在本方案中，大鼠在整个药物自我给药期间（24小时/天）均饲养于操作性条件反射箱内。通过使用一种 &#34;小组&#34; 在该方案中，大鼠在每天一次的训练结束后被转移回ACF，从而允许每天对多个组别进行训练。然而，这种方法可能更适用于可卡因训练，因为海洛因更适宜在以下情况下给予 &#34;主页&#34; 环境16我们尚未评估使用“squad”选项对实验流程效率的影响。另一种提高流程通量的方法是将两组大鼠的药物自我给药训练错开10至12天。采用此设计时，第二组大鼠进行自我给药训练的同时，第一组大鼠在ACF中经历戒断期。第二组大鼠的自我给药训练必须在第一组计划进行...

药物成瘾治疗中的一个主要难题是，即使经过长期的戒断，复发率仍然很高1,2。对人类成瘾者的研究已确定，环境挑战（例如接触与药物相关的特定线索或环境3以及应激性生活事件4）在复发中起着关键作用。一种常见的、被发现会影响药物摄取和渴求的环境挑战是长期的食物限制。例如，已有报道指出，长期的热量限制与吸烟增加相关5。&#160;此外，&#160;节食的严重程度（热量限制）与年轻女性中药物使用率升高呈正相关6。然而，其潜在的脑机制尚未完全阐明。
由于涉及人体研究的实际和伦理考量，研究人员已开发出动物模型以确定相关的神经机制。我们此前曾使用复吸程序7,8来证明，经历急性（24–48 小时）食物剥夺的大鼠会出现已消退的觅药行为的恢复9,10。然而，复吸程序的一个关键组成部分是消退期，而这一阶段在药物成瘾治疗中并不常见11（但参见 Epstein et al.12 对复吸程序有效性的全面讨论）。此外，在人类饮食干预的特定情况下，只有长期的食物限制而非急性食物剥夺被证明能有效增加药物摄入行为5,13。
因此，我们提出了一种&#34;禁欲程序&#34;14，可用于研究长期食物限制对觅药行为的影响。利用该程序，我们最近证明，在经历14天轻度食物限制后，禁欲状态下的大鼠对海洛因的觅药行为显著增强15。

<table><tbody><tr><td>名称</td><td>公司</td><td>目录编号</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮（Vetalar，100 mg/ml）</td><td>Bioniche Animal Health</td><td>通过当地经销商获得</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪（Rompun，100 mg/ml）</td><td>拜耳</td><td>通过当地经销商获得</td><td></td></tr><tr><td>盐酸海洛因</td><td>美国北卡罗来纳州研究三角园国家药物滥用研究所</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mg/ml 安那芬注射液 20 ml 小瓶</td><td>CDMV，加拿大</td><td>12868</td><td></td></tr><tr><td>仪器设备</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>名称</td><td>公司</td><td>目录编号</td><td></td></tr><tr><td>硅胶管（内径 0.02，外径 0.037）</td><td>Fisher Scientific</td><td>1118915A</td><td></td></tr><tr><td>GE 海洋硅</td><td>通用电气</td><td>SE-1134</td><td></td></tr><tr><td>Tygon 管（内径 0.02，外径 0.060）</td><td>VWR</td><td>63018-044</td><td></td></tr><tr><td>套管针（22 G，5个装）</td><td>Plastics One</td><td>C313G-5up</td><td></td></tr><tr><td>液体旋转接头，塑料，22 G</td><td>Lomir Biomedical, Inc.</td><td>RSP1</td><td></td></tr><tr><td>固定速度输注泵（3.3 转/分钟）</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>A73-01-3.3</td><td></td></tr><tr><td>大鼠测试笼</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H10-11R-TC</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢网格地板</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H10-11R-TC-SF</td><td></td></tr><tr><td>室内光照-大鼠</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H11-01R</td><td></td></tr><tr><td>单一高亮度提示-大鼠</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H11-03R</td><td></td></tr><tr><td>2.9 kHz 音调模块</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H12-02R-2.9</td><td></td></tr><tr><td>可伸缩杠杆-大鼠</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H23-17RA</td><td></td></tr><tr><td>平衡臂</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H29-01</td><td></td></tr><tr><td>隔音衰减箱</td><td>康考迪亚大学</td><td>自制</td><td></td></tr><tr><td>系统控制器 2</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>系统对照 2</td><td></td></tr><tr><td>系统电源底座</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H01-01</td><td></td></tr><tr><td>Habitest 通用 Linc</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H02-08</td><td></td></tr><tr><td>环境连接板 &amp;amp; Linc 电缆</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H03-04</td><td></td></tr><tr><td>图形状态标记法 3</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>GS3</td><td></td></tr></tbody></table>

一种研究长期食物限制对戒断大鼠海洛因觅药行为影响的实验方法

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

在人类药物成瘾者中，接触与既往用药行为相关的线索或环境可引发戒断期间的复吸。此外，多种环境挑战可加剧这种效应，并增加持续的药物摄入。
本文所述实验方案强调了一种常见的环境挑战——食物限制，对药物渴求行为的影响，这种影响表现为禁欲大鼠中觅药行为的增强。
大鼠被植入慢性静脉内导管，随后训练其按压杠杆以获取 在10至12天内通过静脉注射给予海洛因。海洛因自我给药阶段结束后，将大鼠从操作性条件反射箱中移出，并转移至动物饲养设施中至少饲养14天。在此期间，一组大鼠保持自由进食（饱食组），另一组（食物限制组，FDR组）则接受轻度食物限制，使其体重维持在非限制状态体重的90%。在食物限制的第14天，将大鼠重新转移回药物训练环境，在消除条件下进行觅药行为测试（即.&#160;按压杠杆不会导致海洛因递送。
本实验方案在食物限制的大鼠中，可显著且稳定地增强测试日对海洛因的觅药行为。此外，与我们先前采用的急性食物剥夺操作相比，当前方案更能模拟热量限制对觅药行为影响的临床相关模型。同时，该方案可能更接近人类实际情况，因为大鼠在进行觅药测试前无需经历消退训练阶段，而消退训练是常用复吸模型中的关键组成部分。

随时间变化的体重：典型结果表明，在海洛因自我给药训练期间，体重保持稳定。在戒断期间，自由摄食饲料的大鼠体重增加，而食物受限的大鼠体重下降至其原始体重的约90%，或饱食大鼠体重的75-80%（图2）。
训练期间的给药次数及主动/非主动杠杆反应：随着训练天数的增加，给药次数和主动杠杆反应逐渐上升，而非主动杠杆反应则无明显变化（图3）。通常情况下，主动杠杆反应在整个训练过程中持续增加，并最终稳定在较高水平；非主动杠杆反应在整个训练期间始终保持在较低水平，表明大鼠能够准确区分两个杠杆。最后，获得的给药次数在训练过程中逐渐增加，并稳定在一个低于主动杠杆反应频率的水平。这种行为分离的出现是由于每次药物输注后存在20秒的超时（timeout）期。
测试日主动杠杆与非主动杠杆反应：食物限制组大鼠在主动杠杆上的反应显著高于饱食组大鼠（我们通常观察到处理组之间存在约250%的差异，见15）。非主动杠杆反应在食物限制组...

本文描述了一种可在食物限制大鼠中显著增强觅药行为的实验方法。在完成海洛因自给药训练后，大鼠进入一段在无药物环境中的戒断期，期间对其进行轻度食物限制。随后，在与药物相关的环境中检测其觅药行为。

在人类药物成瘾者中，接触曾与用药行为相关的线索或环境可引发复吸，即使在戒断期间……

本实验的总体目标是研究环境干预（例如慢性食物限制）对戒断条件下实验大鼠复吸海洛因行为的影响。首先通过手术将静脉导管植入大鼠颈静脉，经过一段恢复期后，使其能够进行海洛因自我给药。随后，大鼠在操作性条件反射箱中接受为期10天的训练，以学会自我注射海洛因。该操作的下一步是戒断阶段，大鼠被转运至动物饲养设施，并进入一段食物限制或非限制性供给时期。最后，大鼠被重新放回操作式条件反射箱，接受海洛因觅药测试：在不给予海洛因的情况下，按压海洛因相关杠杆将激活提示性线索，即灯光和声音。最终，长期处于食物限制状态且有海洛因自我给药史的大鼠，在戒断条件下会表现出显著增强的海洛因觅药行为，这种行为由重新暴露于用药环境及与药物相关的线索所诱发。与现有方法（例如复吸程序）相比，该技术的主要优势在于无需进行明确的操作性消退，而这一点在人类状况中并不存在。此外，使用慢性干预而非急性干预，能够更有效地提高与人类状况之间的构念效度。该方法有助于回答药物成瘾研究领域中的一些关键问题，例如药物寻求行为与食物寻求行为背后共有的神经机制。导管可批量制备，并经高压灭菌后长期使用。制作导管时，首先将弹性管材剪切成12厘米长的片段。使用牙签或18号针头，在距离导管尖端3厘米处周围涂抹少量硅胶。将硅胶干燥24小时后再进行高压灭菌。在高压灭菌前，将五联套管的长管弯曲，使其作为连接管与塑料基座呈直角。手术当天组装导管时，将套管的长端推到五联套管弯曲的金属管上，约一半长度到达塑料基座处。通过特氟龙管和一根复合的22号针头，将五联套管连接至装有无菌生理盐水的一毫升注射器上。通过导管冲洗生理盐水，以确保通畅流动。开始麻醉动物前，先用酒精和外科消毒剂清洁右侧肩部和头部区域。涂抹眼用凝胶以防止眼睛干燥，随后注射青霉素和生理盐水，以预防感染和脱水。采用标准技术分离颈外静脉周围组织后，暴露颈外静脉。将弯钳插入静脉下方，以保持静脉抬高并轻微拉伸。在静脉上做一个小的V形切口，并保持切口开放。 使用血管扩张器将导管前端3厘米的短头沿静脉向心脏方向推进，直至硅胶滴到达切口位置。用三根缝线将导管固定在静脉上，第一根尽可能靠近近端，第二根位于硅胶滴的前方，第三根尽可能靠远端。用生理盐水冲洗导管，以确保其通畅无阻，并确认缝线未过紧。随后将大鼠腹侧朝下放置。切开头部皮肤，插入止血钳以分离皮肤与下方组织，形成皮下囊腔。将止血钳沿皮下引导至肩部导管插入处的开口。穿透结缔组织，在五号向上标记处基底部最前端下方紧紧夹住导管。取下五号向上标记，将导管的长端经皮下穿过，从位于头顶的切口引出。使用剪刀在止血钳夹闭位置下方剪断导管，并重新连接五通的长端。将导管沿五通的金属轴完全推入至塑料基座，通过灌注生理盐水以确认导管通畅。缝合伤口后，将大鼠置于立体定位仪中。待颅骨暴露区域清洁干燥后，使用手动钻头在颅骨表面钻出四到五个孔。接着，将机制螺钉插入孔中，作为头帽的支撑结构。将五通连接器置于螺钉之间，并将导管多余长度部分埋入先前制作的皮下囊袋中。最后，使用牙科水泥将五根导丝固定在颅骨顶部。待水泥完全干燥后，将大鼠从立体定位仪中取出，并持续监测直至完全恢复。大鼠被单独饲养在操作条件反射箱中。封闭在配备风扇的隔音隔间内。右侧侧壁距离地板九厘米处安装有两个可伸缩杠杆，每个杠杆上方均设有提示灯。活跃杠杆上方放置一个音调模块，左侧侧壁顶部中央设有一盏红色房间灯。可自由获取食物和水。通过液体旋转接头和金属弹簧保护的Tigon导管将药物泵连接至导管。在术后恢复及24小时适应期后，开始进行海洛因自我给药。首先，用肝素-庆大霉素溶液冲洗导管。然后，将五通连接器连接到Tigon管上，并安装金属弹簧。每次实验开始时，处于黑暗阶段的起始时刻，伸出活动杠杆和非活动杠杆，同时点亮屋内灯光并启动Q光-声音复合信号。大鼠在10天内每天进行三次、每次持续3小时的自我给药训练，每次训练间隔3小时，每次训练期间允许大鼠在30秒内自行注射海洛因。按压主动杠杆会触发药物泵的激活，并启动一个22秒的超时周期，在此期间笼内灯光关闭，主动杠杆上方的Q灯光音调复合信号被激活。非主动杠杆的按压行为会被记录，但不会产生任何程序设定的后果。自我给药训练结束后，将大鼠从操作条件反射箱中移出，并在动物饲养设施中单笼饲养，自由获取食物和水。次日为药物洗脱日，对食物限制组减少食物供给量以开始戒断期，而饱食组仍保持自由进食。在戒断期的早晨进行药物寻求测试。第14天，将大鼠放回操作性条件反射箱并连接至金属弹簧。进行一次持续一或三小时的实验，期间按压主动杠杆和非主动杠杆产生的结果与自给药训练阶段相同，但不提供药物。这些结果表明，在海洛因实验过程中，大鼠的体重保持稳定。自我给药训练期间，在禁欲期，自由进食的大鼠体重增加，而食物受限的大鼠体重则减少约10%至15%。如图所示，随着训练天数的增加，输注次数和主动杠杆反应逐渐上升，而无效杠杆反应则未见变化。经过禁欲期后，食物受限大鼠的主动杠杆反应显著高于饱食大鼠，而两组之间的无效杠杆反应均处于较低水平且无明显差异。其他方法，如颅内注射、微透析、蛋白质印迹法和免疫组织化学技术，可用于靶向特定的神经化学和药理学系统。观看本视频后，您应能清楚地了解如何通过手术将静脉导管植入大鼠的颈静脉，以及如何在标准的操作条件反射箱中进行海洛因自我给药实验。

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Research

科研

JoVE Journal

Behavior

行为

一个过程来研究延长食品的限制对海洛因寻求戒断大鼠的影响

已广泛使用被称为复吸恢复程序的动物模型来研究应激在药物复吸中的作用。本文报道了一种通过短暂间歇性足底电刺激诱导实验大鼠可卡因觅药行为恢复的方法。...

一种研究足底电击诱发大鼠可卡因觅药行为复燃的实验方法

在戒断期间，对与食物或药物相关线索的反应会随着时间的推移而增强，这可能与复吸行为的易感性增加有关。本文详细介绍了一种用于评估蔗糖自给大鼠中这种“渴求孵育”现象的实验方法。...

一种评估大鼠蔗糖渴求孵育的通用方法

来源：Rich, M. T., 等．利用光遗传学逆转神经可塑性并抑制大鼠的可卡因寻求行为．J. Vis. Exp.

光遗传学诱导长期抑制以抑制大鼠觅药行为

本研究评估了一种用于检测可口溶液对实验大鼠强化效应的新方法：口腔内自我给药。为此，在连续比率和递增比率强化程序下，测量了大鼠对不同浓度甜溶液进行口腔内输注的操作式反应（即 按压杠杆）行为。...

一种评估实验大鼠味觉物质强化特性的新方法：操作性经口内自我给药

本方案描述了一种新颖且高效的方法，可快速诱导大鼠对乙醇产生操作性反应；与标准方法不同，该方法无需通过限水或逐步减少糖精/蔗糖浓度来启动反应。...

一种无需限水、糖精淡化或长时间接触训练评估大鼠乙醇强化特性的方法

线索反应性被定义为对与吸毒经历相关的线索的敏感性，这种敏感性会导致戒断个体产生渴求和复吸。在大鼠模型中，通过测量其在自给药和强制戒断后的线索反应性测试中对药物相关线索的注意偏向所引发的趋近性摄食行为，来模拟线索反应性。...

一种用于评估可卡因使用障碍大鼠模型中线索反应性的实验方案

本文描述了一种吗啡条件性位置偏爱（CPP）方案，用于测量大鼠渴求行为的孵育过程。...

一种用于测量大鼠渴求延长的条件性位置偏爱实验方案

该冲突模型用于评估暴露于成瘾性药物或其他可能影响抑制控制能力的因素后，抑制控制功能的损害情况。实验中同时呈现性刺激和厌恶障碍物，雄性大鼠必须克服障碍物才能接近性奖励。...

雄性大鼠奖赏寻求行为的冲突模型

本文描述了一种在惩罚诱导的戒断后，通过强烈急性食物剥夺引发海洛因觅药行为复吸的实验方法。该研究成功采用了“寻求-获取”链式程序来建立惩罚诱导的海洛因自我给药戒断模型，随后在经历24小时食物剥夺应激后进行海洛因觅药测试。...

一种研究惩罚诱导戒断后应激引发海洛因觅药复吸的实验流程

本文描述了一种研究与酒精相关的环境背景触发大鼠酒精寻求行为复现能力的实验方法。...

一种观察大鼠情境诱导的巴甫洛夫条件性酒精寻求行为复现的实验方法

了解食物限制对戒断期大鼠海洛因觅药行为的影响机制。本研究通过手术植入颈静脉导管，利用操作性条件反射箱训练大鼠自我给药，建立戒断模型，为成瘾复发研究提供重要实验方法。

一种研究长期食物限制对戒断大鼠海洛因觅药行为影响的实验方法

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