Membrane-SPINE: A Biochemical Tool to Identify Protein-protein Interactions of Membrane Proteins <em>In Vivo</em>

Volker Steffen M&#252;ller; Karolin Tschauner; Sabine Hunke

doi:10.3791/50810

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Membrane-SPINE: A Biochemical Tool to Identify Protein-protein Interactions of Membrane Proteins In Vivo

膜脊柱:一个生化工具来确定膜蛋白的蛋白质 - 蛋白质相互作用在体内

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10:53 min

November 7, 2013

DOI: 10.3791/50810-v

Volker Steffen Müller¹, Karolin Tschauner¹, Sabine Hunke¹

¹Molekulare Mikrobiologie,Universität Osnabrück

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

一个生化方法描述识别体内蛋白质膜蛋白的相互作用（PPI）。该方法结合了蛋白质的交联，亲和纯化和质谱法，并且是适合于几乎任何类型的细胞或生物体。用这种方法，瞬态质子泵抑制剂的甚至识别成为可能。

该程序的总体目标是通过膜链球菌蛋白相互作用实验或膜脊柱鉴定体内蛋白质、膜蛋白的蛋白质相互作用。这是通过使用甲醛的可逆交联剂进行体内交联来实现的。第二步是将 strept 标记的膜诱饵蛋白与交联猎物蛋白一起纯化。

接下来，通过煮沸来反转交联。最后一步是通过硫酸钠脱盐、聚丙烯酰胺凝胶电泳或 SDS 页面分离膜诱饵蛋白和共纯化的猎物蛋白。最终，免疫印迹和质谱分析用于鉴定猎物蛋白，从而可以分析膜蛋白相互作用。

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