2014年3月3日
对脊髓缺血-再灌注损伤缺乏机制性理解,阻碍了在高风险主动脉手术后预防截瘫的辅助措施的进一步发展。因此,建立动物模型势在必行。本论文展示了在小鼠模型中通过胸主动脉阻断后可重复地诱导出下肢瘫痪。
以下实验的总体目标是研究脊髓缺血在murn模型中的影响。首先,在股动脉上方放置激光多普勒探头,随后进行胸骨切开术以暴露主动脉弓和左锁骨下动脉。
然后仔细解剖主动脉和锁骨下动脉,以充分减少脊髓的动脉血流。获得结果。cho 是一种基于 Baso 小鼠评分的术后神经功能缺损。
与现有的其他方法(如侧胸切开术)相比,该技术的主要优势在于不侵犯胸膜腔。该方法有助于探讨脊髓病理生理学、脊髓缺血再灌注损伤等相关问题,并为药物干预提供潜在可能。该技术的应用前景涵盖预防脊髓缺血后截瘫的治疗策略。
尽管该方法可为胸外科手术中常见的截瘫问题提供研究思路,也可应用于其他导致急性脊髓缺血的疾病过程,例如低血压或血管病变。通常,初次接触该技术的研究人员在分离主动脉弓时会遇到困难,因为操作需极为谨慎,以避免动物死亡、出血或气胸。我们最初是在采用侧开胸入路时遇到若干困难后开始思考该技术的改进方案;尽管该方法在文献中已有广泛报道,但在我们的动物实验中却伴随较高的死亡率。
该方法的可视化演示至关重要,因为在纵隔解剖过程中需格外谨慎,以防止术中死亡。根据文本方案麻醉小鼠后,确认其已充分镇静,并去除胸部中线及左下肢腹侧表面的毛发,将润滑过的直肠探头插入小鼠直肠,并固定于手术台。调节加热垫,使目标直肠温度维持在36.5摄氏度。
接下来,在股动脉上方做一个小切口,并将皮肤从皮下组织分离。然后将激光多普勒探头置于股动脉上方。调整探头位置,直至灌注监测仪显示灌注单位超过800,以进行主动脉弓和锁骨下动脉的解剖分离。
在胸骨切迹上方做一长约2厘米的皮肤切口,并轻轻将皮肤与皮下组织分离。若发生出血,需游离下颌下腺。使用棉签在无血管区域轻轻施加压力。
使用镊子沿中线切开下颌下腺。轻轻抬起胸骨,用剪刀沿胸骨中线小心地进行长约1厘米的胸骨正中切开术。在胸骨边缘每侧各放置5-0牵引缝线一根,将胸骨向两侧牵拉,并将缝线固定于手术床上。
接下来,使用钝性分离沿气管游离带状肌。然后用剪刀切开左侧带状肌以改善暴露。将胸腺从周围组织中解剖分离。
继续钝性分离,直至观察到大血管。操作时需格外小心,避免进入胸膜腔,随后在主动脉弓和左锁骨下动脉上放置血管夹。确认远端血流已适当阻断,表现为灌注单位减少超过90%。
继续阻断四到八分钟。时间结束后,移除血管夹,确认止血后关闭胸骨切口和皮肤。首先移除小鼠左侧的牵开缝线。
使用合适的牵引缝线关闭胸骨切口,并用连续的5-0缝线缝合皮肤。将小鼠置于带有加热垫的笼子中恢复,之后再放回正常笼子,确保其可以正常获取食物和水。密切观察小鼠是否出现呼吸困难的迹象,如有需要,应根据实验方案实施安乐死。
最后,使用Baso小鼠评分量表评估动物的运动功能。每隔12小时,小鼠接受假手术或主动脉阻断术,阻断时间为4至8分钟。术后,根据此处所示的Baso小鼠评分系统对动物进行评分。
该图显示,接受假手术的小鼠在术后任何时间点均未出现可观察到的功能缺陷。接受中度缺血处理的小鼠在术后12小时后肢功能接近正常,但随后功能进行性下降,至48小时时完全瘫痪。而接受长时间缺血处理的小鼠在术后立即出现完全瘫痪,且无任何功能恢复。
观看本视频后,您应能够充分了解如何安全地解剖主动脉弓,并有效减少脊髓的动脉血流。
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本研究采用小鼠模型探讨脊髓缺血-再灌注损伤。该研究旨在建立一种可重复的方法,以诱导胸主动脉阻断后下肢瘫痪。
这种小鼠胸主动脉闭合模型为研究脊髓缺血-再灌注损伤提供了一个可重复的系统,而脊髓缺血-再灌注损伤是高风险主动脉手术中截瘫发生的关键机制。通过稳定诱导神经功能缺损,该模型有助于针对神经血管保护的治疗候选物进行机制性风险评估。该模型的优势在于早期发现工作流程中的应用,此时靶点验证和表型筛选需要具有可量化功能输出的、与疾病相关的系统。
该模型适用于从发现到临床前研究的连续过程,在靶点确定后、在复杂疾病模型中进行有效性测试前,可作为表型筛选工具。它能够以功能性运动作为主要终点,对神经血管保护剂进行假设驱动型评估。