Name: 基因-环境相互作用模型揭开帕金森病的隐形易感机制 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-07T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: 探索脂氧合酶同工酶在帕金森病黑质纹状体退行性变中的作用，使用MPTP神经毒素模型和LOX缺陷小鼠进行生化与免疫组织学分析。该方法有助于揭示基因-环境相互作用对神经炎症的影响机制。

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本工作由美国国立卫生研究院（NIH）下属国家普通医学科学研究所（NIGMS）资助，项目编号 056062。

无任何披露内容。

本基因-环境相互作用研究的设计使我们获得了关于5-LOX同工酶在黑质纹状体通路中双重性质的新信息。&#160;通过对缺乏5-LOX同工酶的转基因小鼠及其野生型同窝小鼠在生理盐水或MPTP处理后采用高效液相色谱法（HPLC）测定纹状体单胺类神经递质水平，我们发现，在毒性条件下，5-LOX的缺失具有保护作用（图1）；但在正常条件下，该酶的缺失会降低纹状体多巴胺水平，可能产生不利影响。&#160;因此，我们证明了5-LOX同工酶在正常条件下有助于维持纹状体多巴胺能张力，但在接触毒性物质后可能参与神经损伤过程4。
尽管需要进一步评估以深入了解LOX同工酶在黑质纹状体毒性中的作用机制，但蛋白质印迹分析（图3）以及免疫组织化学研究（图2）显示，在暴露于MPTP的5-LOX同工酶缺陷型小鼠群体中，神经炎症标志物至少在一定程度上有所减弱。&#160;这些采用经典生物化学与组织学技术所得的结果表明，5-LOX代谢产物在增强小胶质细胞和星形胶质细胞活化过程中发挥着关键作用<sup...

基因-环境相互作用模型的使用提供了一种模拟可能影响特发性帕金森病（PD）风险因素的方法，并为揭示单独使用遗传或毒性系统难以阐明的机制性见解提供了机会1,2。本文阐述了这一观点，并描述了1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）小鼠黑质纹状体变性模型3&#160;的应用，以更深入地理解脂氧合酶（LOX）同工酶活性在神经炎症和神经毒性中的选择性作用4。尽管LOX同工酶在多种外周疾病5,6以及中枢神经系统疾病（如脑卒中7和阿尔茨海默病8,9）中的作用已被广泛研究，但该同工酶家族在与PD相关的黑质纹状体功能及变性中的作用尚不明确，亟需进一步研究。MPTP神经毒素可选择性地导致黑质纹状体通路退变，并重现PD患者中出现的纹状体多巴胺耗竭及黑质多巴胺能神经元丢失，这些是运动功能障碍的基础10。尽管该模型无法完全复制PD患者全部的非运动和运动行为表现，也无法形成明确的α-突触核蛋白阳性路易小体病理改变，但它已被证明在揭示导致黑质纹状体损伤的新机制靶点以及早期转化研究中具有重要价值，是目前最成熟、可重复诱导黑质神经元死亡并伴随纹状体多巴胺减少的非侵入性模型11-15。MPTP小鼠模型已被广泛应用，其处理方案涵盖急性、亚急性和慢性等多种范式16-18，使得剂量标准化成为可能，从而诱导轻度至重度的黑质纹状体损伤19,20&#160;，并根据不同的处理方案激活不同的毒性机制18,21,22。因此，该模型允许针对特定的“损伤窗口”进行干预，根据所使用的治疗药物或转基因模型的不同，可导致黑质纹状体损伤的增强或减轻23-25。
对于转化研究和发现生物学研究而言，用于评估损伤的方法及其所提供的证据同样至关重要。&#160;在MPTP小鼠模型中，评估损毁的既定指标包括通过高效液相色谱法（HPLC）检测纹状体多巴胺能张力的标志物（如多巴胺及其代谢产物），以及通过蛋白质印迹法（Western blot）分析多巴胺合成的限速酶——酪氨酸羟化酶（TH）的表达水平，并结合蛋白质印迹法和免疫组织化学方法检测胶质细胞活化等变性事件的指标4。&#160;尽管这些属于经典的神经化学、生物化学和组织学实验方法，但它们能够对黑质-纹状体多巴胺能通路损伤程度提供关键且可重复的检测结果，有助于揭示毒性作用机制，并已被证明是研究帕金森病（PD）中神经变性过程的有力工具。

<table><tbody><tr><td>1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐 (MPTP-HCL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0896</td><td>用于帕金森病建模</td></tr><tr><td>4% 甲醛（多聚甲醛）磷酸盐缓冲液 (PFA)</td><td>American MasterTech Scientific</td><td>BUP0157</td><td>用于浸没固定</td></tr><tr><td>高氯酸 ACS 试剂，70% (PCA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>244252</td><td>用于 HPLC 酸提取</td></tr><tr><td>Tris 碱</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>用于组织匀浆</td></tr><tr><td>乙二胺四乙酸二钠盐二水合物 (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>用于组织匀浆</td></tr><tr><td>蛋白酶抑制剂混合物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8340</td><td>用于组织匀浆</td></tr><tr><td>磷酸酶抑制剂混合物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5726</td><td>用于组织匀浆</td></tr><tr><td>氢氧化钠 (NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td><td>用于 Lowry 蛋白测定</td></tr><tr><td>蔗糖，分子生物学级，&amp;ge;99.5% (GC)&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td>用于冷冻保护</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液粉末，pH 7.4（用于 0.01 M PBS）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>BCA 蛋白检测试剂盒</td><td>Pierce/Thermo</td><td>23225</td><td>用于蛋白定量</td></tr><tr><td>Novex 12% Tris-甘氨酸迷你胶 1.0 mm，12 孔</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>EC60052BOX</td><td>用于 SDS-PAGE</td></tr><tr><td>NuPAGE LDS 上样缓冲液 (4x)</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>NP0007</td><td>用于 SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Novex Sharp 预染蛋白标准品&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>LC5800</td><td>蛋白分子量标记</td></tr><tr><td>甘氨酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7126</td><td>用于 SDS-PAGE</td></tr><tr><td>十二烷基硫酸钠，电泳级，98.5% (SDS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3771</td><td>用于 SDS-PAGE</td></tr><tr><td>无水甲醇，试剂级&amp;nbsp;</td><td>American MasterTech Scientific</td><td>SPM1057C</td><td>用于转膜的甲醇</td></tr><tr><td>氯化钠 (NaCl)，ACS 试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>用于生理盐水和缓冲液</td></tr><tr><td>脱脂奶粉粉末</td><td>Carnation</td><td>n/a</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>5% 乙酸中的 Ponceau S 溶液&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7170</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>抗酪氨酸羟化酶 (TH) 抗体，绵羊多克隆</td><td>Chemicon/Millipore</td><td>AB1542</td><td>用于免疫荧光&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>抗酪氨酸羟化酶 (TH) 抗体，兔多克隆</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>P40101-0</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>抗-&amp;beta; 肌动蛋白抗体，兔</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2066</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>抗胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 抗体，兔多克隆</td><td>Chemicon/Millipore</td><td>AB5804</td><td>用于免疫荧光</td></tr><tr><td>抗胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 抗体，小鼠单克隆</td><td>Covance Inc.</td><td>SMI-22R</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 IgG (H+L)&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>31462</td><td>用于免疫荧光</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记山羊抗绵羊抗体</td><td>Pierce/Thermo</td><td>31480</td><td>用于免疫荧光</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠抗体</td><td>Pierce/Thermo</td><td>31430</td><td>用于免疫荧光</td></tr><tr><td>SuperSignal West Pico 化学发光底物</td><td>Pierce/Thermo</td><td>34078</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>CL-XPosure 胶片 7 英寸 × 9.5 英寸&amp;nbsp;</td><td>Pierce/Thermo</td><td>34089</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>Restore Western Blot 剥脱缓冲液&amp;nbsp;</td><td>Pierce/Thermo</td><td>21059</td><td>用于免疫印迹</td></tr><tr><td>柠檬酸一水合物，ACS 试剂，&amp;ge;99.0%&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1909</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>正常驴血清</td><td>Millipore</td><td>S30-100ML</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5288</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>牛血清白蛋白 (BSA)，冻干粉</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3294</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>曲拉通 X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-01</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>驴抗兔 IgG，Alexa Fluor 568 标记&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A10042</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>驴抗绵羊 IgG (H+L)，FITC 标记&amp;nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>713-095-147</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>含 DAPI 的 VECTASHIELD 硬封片剂</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1500</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>正常山羊血清</td><td>Millipore</td><td>S26-100ML</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>VECTASTAIN ABC 试剂盒（兔 IgG）&amp;nbsp;</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-4001</td><td>用于免疫组化；每 1 ml PBS 中加入溶液 A 和 B 各 10 &amp;micro;l（按说明书操作）</td></tr><tr><td>DAB 过氧化物酶底物试剂盒，3,3&amp;rsquo;-二氨基联苯胺</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td>用于免疫组化；每 5 ml 冷 ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O，加入 2 滴缓冲液原液、2 滴 DAB 和 1 滴 H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;（H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2 &lt;/sub&gt;在使用前立即加入）</td></tr><tr><td>过氧化氢，30%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>216763</td><td>用于免疫组化中的淬灭步骤</td></tr><tr><td>兔抗 Iba1 抗体</td><td>Biocare Medicals</td><td>CP290A</td><td>用于免疫组化</td></tr><tr><td>焦油紫溶液，常规浓度&amp;nbsp;</td><td>FD Neurotechnologies</td><td>PS102-01</td><td>Iba1 免疫组化的复染剂</td></tr><tr><td>95% 乙醇，试剂级乙醇</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8382</td><td>用于免疫组化的脱水</td></tr><tr><td>100% 无水乙醇</td><td>Mallinckrodt</td><td>7019-10</td><td>用于免疫组化的脱水</td></tr><tr><td>乙酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td>用于免疫组化的褪色</td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td>用于免疫组化的透明剂</td></tr><tr><td>DPX 封片剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>06522</td><td>用于 DAB 免疫组化的封片介质</td></tr><tr><td>O.C.T. 包埋剂 — 冷冻切片包埋介质&amp;nbsp;</td><td>American MasterTech Scientific</td><td>EMOCTCS</td><td>用于冰冻切片的包埋介质</td></tr><tr><td>高锰酸钾</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223468</td><td>用于 DAB 溶液的去污染</td></tr><tr><td>多巴胺盐酸盐</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8502</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>3,4-二羟基苯乙酸 (DOPAC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>850217</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>高香草酸 (HVA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1252</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>高氯酸 (PCA) - 70%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>244252</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>磷酸二氢钠一水合物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71504</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>柠檬酸一水合物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1909</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>1-辛烷磺酸钠 (OSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O8380</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>乙腈</td><td>EMD</td><td>AX0145-1</td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>HPLC 级去离子水 (ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>Millipore</td><td></td><td>用于 HPLC</td></tr><tr><td>0.22 &amp;micro;m GSTF 膜</td><td>Millipore</td><td></td><td>用于过滤</td></tr><tr><td>Corning Netwells</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3477</td><td>带聚酯网底的聚苯乙烯插入件，用于免疫组化</td></tr><tr><td>超声细胞破碎仪 (Soniprep 150)</td><td>MSE</td><td>MSE.41371.274</td><td></td></tr><tr><td>微量离心机</td><td>Eppendorf</td><td>5414R</td><td></td></tr><tr><td>ESA MD-150 反相色谱柱&amp;nbsp;</td><td>ESA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC 泵 (Ultimate 3000)</td><td>Dionex</td><td>ISO-3100BM</td><td></td></tr><tr><td>HPLC 自动进样器 (Ultimate 3000)</td><td>Dionex</td><td>WPS-3000TSL</td><td></td></tr><tr><td>电化学检测器</td><td>ESA</td><td>Coulochem III</td><td></td></tr><tr><td>保护柱</td><td>ESA</td><td>5020</td><td></td></tr><tr><td>分析柱</td><td>ESA</td><td>5011A</td><td></td></tr><tr><td>Chromeleon 软件</td><td>Dionex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eclipse E400</td><td>Nikon</td><td>E400</td><td>明场/荧光显微镜</td></tr><tr><td>一次性小鼠笼</td><td>Ancare</td><td>N10HT</td><td></td></tr><tr><td>微滤顶盖</td><td>Ancare</td><td>N10MBT</td><td></td></tr><tr><td>5-LOX 缺陷型小鼠</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>004155</td><td></td></tr><tr><td>12/15-LOX 缺陷型小鼠</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>002778</td><td></td></tr></tbody></table>

基因-环境相互作用模型揭示帕金森病易感机制

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

脂氧合酶（LOX）活性被认为与阿尔茨海默病等神经退行性疾病有关，但其在帕金森病（PD）发病机制中的作用尚不明确。基因-环境相互作用模型有助于揭示特定细胞通路在毒性中的影响，而仅使用遗传模型或单纯毒物模型可能无法观察到这些影响。&#160;为了评估不同的LOX同工酶是否选择性地参与PD相关的神经退行性变，可对转基因（i.e. 5-LOX和12/15-LOX缺陷型）小鼠施加一种模拟该疾病中细胞损伤与死亡的毒素。&#160;本文描述了一种神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）的应用，该毒素可诱导黑质纹状体损伤，以阐明不同LOX同工酶在PD相关神经退行性变中的特异性作用。在小鼠和非人灵长类动物中使用MPTP已得到广泛验证，能够有效模拟PD中的黑质纹状体损害。&#160;MPTP诱导的损伤程度通过高效液相色谱法（HPLC）检测多巴胺及其代谢产物，并结合对纹状体组织进行酪氨酸羟化酶（TH）——即多巴胺合成限速酶——的半定量Western印迹分析来评估。为评估可能体现LOX同工酶选择性敏感性的炎症标志物，对包含黑质的脑切片进行胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和Iba-1免疫组织化学染色，并对纹状体匀浆样本进行GFAP的Western印迹分析。&#160;该实验方法可为揭示黑质纹状体变性及帕金森病背后基因-环境相互作用提供新的见解。

这种毒素暴露范式可在MPTP注射动物与生理盐水注射动物之间产生显著且可检测的纹状体多巴胺减少20%。需要注意的是，不同批次的MPTP可能导致略高或略低的损伤程度；因此，当使用新的神经毒素批次时，建议在转基因动物实验前先在野生型小鼠中进行预实验，以获得更精确的结果。采用轻度至中度的损伤模型有助于观察转基因的影响；而重度损伤可能产生“平台效应”，即损伤过于强烈而无法被缓解，或损伤过于严重从而掩盖有害基因改变的作用。在5-LOX同工酶缺陷小鼠中，MPTP对纹状体多巴胺的影响具有显著差异，但在12/15-LOX同工酶缺陷小鼠中则无显著差异（图1）。此外，通过这些方法，我们还能够发现生理盐水处理的小鼠因5-LOX缺陷而导致的多巴胺水平显著差异（图1）。
通过免疫印迹检测TH和GFAP，分别证实了野生型小鼠纹状体水平的损伤和神经炎症，而在5-LOX同工酶缺陷型小鼠的纹状体中，该效应减弱图3A 和 3B）。该病变在黑质水平亦可辨识。图 2A </...

脂氧合酶（LOX）同工酶可生成可能增强或减弱神经炎症与神经变性的产物。&#160;通过基因-环境相互作用研究，可识别特定LOX同工酶的作用。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的黑质纹状体损伤模型，在两种LOX同工酶缺陷的转基因小鼠品系中，可比较LOX同工酶对多巴胺能完整性和炎症反应的贡献。

脂氧合酶（LOX）活性已被认为与阿尔茨海默病等神经退行性疾病有关，但其在帕金森病中的作用……

以下实验的总体目标是了解脂氧合酶ISO酶在与帕金森病相关的黑质纹状体变性中的作用。为此，需精心配制一种可产生黑质纹状体损伤的神经毒素。随后，对缺乏NLOCKS基因的小鼠连续四天每天注射MPTP溶液，并在末次注射七天后进行分析。采集样本并用于生化或免疫组织化学分析。结果显示，1215型锁不影响黑质纹状体MPTP毒性。然而，在毒性条件下，五型锁会加剧损伤。TS 方法有助于回答帕金森病领域中的关键问题。例如，基因与环境的相互作用对黑质易损性有何影响。利用基因-环境交互模型，我们能够识别出ISO的选择性功能，并深入探究五种脂质的双重作用。经过适当培训的人员应在整个以下操作过程中佩戴合适的个人防护装备。首先，进行配制神经毒素溶液所需的所有必要计算。然后，准备好所需的全部设备、耗材和试剂。此外，需准备相关材料以应对可能发生的溢洒。用垫巾或纸巾覆盖天平周围的区域，并用10%含氯消毒液润湿，以降低粉末溢洒带来的风险，同时在附近备好纸巾和10%含氯消毒液作为预防措施。准备就绪后，从适当的储存位置取出原代试剂瓶。用浓度和日期标记装有 MPTP 的玻璃瓶。在通风橱内的分析天平上，将 50 毫克 MPTP 称量至带有次级防护的玻璃瓶中，次级防护内应包含浸有 10% 漂白剂的纸巾。接下来，盖上原装小瓶的瓶盖，并用含10%次氯酸钠的湿巾缓慢擦拭外表面。向小瓶中加入13.763毫升无菌生理盐水，盖紧后在生物安全柜内充分混匀。小心过滤，将MPTP溶液通过滤器无菌转移至置于次级容器内的已标记注射小瓶中，次级容器内应放置浸有10%次氯酸钠的组织巾。为降低压力，需略微松开装有MPTP过滤溶液的小瓶瓶盖。用浸有漂白剂的纸巾清理任何溢出物，并将使用过的材料丢弃至适当标记的生物危害容器中。运输至动物实验操作室期间，应将小瓶内的MPTP溶液置于盛有浸有漂白剂纸巾的次级容器中保存。将 MPTP 源瓶放入其二级容器中，并放回适当的储存位置。最后，使用 10% 漂白剂对药匙、分析天平和通风橱表面进行 10 分钟的去污处理。在注射动物之前，准备好带有过滤穿孔盖的一次性笼具。标记MPTP。放入一次性笼垫、预先润湿的食物颗粒，并以水凝胶作为水源。接下来，称量所有动物的体重，并记录每只动物注射15毫克/千克MPTP溶液所需的溶液体积。准备就绪后，将小鼠置于一次性吸水垫上方，小心抓握并注射MPTP溶液。此操作需连续进行四天，每天一次，注射过程中禁止重复盖上针帽，使用后的针头应直接放入专用且标记明确的MPTP生物危害锐器容器中。在附近准备好10%的漂白剂溶液和擦拭纸巾。若发生意外滴漏，需将注射了MPTP的动物放入先前准备好的一次性笼具中，并放置于开放式笼架上。随后处理MPTP。在末次注射后的72小时内，于架子和饲养室门上放置警示牌。使用漂白剂对工作表面进行去污处理。每次使用后，通过加入等体积的10%漂白剂处理残留的MPTP溶液并妥善处置。并将此作为生物危害性液体废物处理，所有使用过的一次性防护用品应丢弃至专用的废弃物收集箱中；如有需要，在丢弃前用10%次氯酸钠溶液喷洒消毒。在此操作过程中，必须定期检查动物状况，并每天补充食物和饮水。末次注射后三天，处理所有相关材料，并将动物转回常规饲养环境。在预定的实验时间点，取出动物以采集和处理组织。采用纹状体 AAL 匀浆法测定经生理盐水或 MPTP 处理的野生型小鼠及五种基因敲除小鼠的多巴胺水平。在生理盐水处理组中，不同基因型对多巴胺（DA）水平具有显著影响，转基因小鼠的 DA 水平较低。然而，在 MPTP 处理后，五种基因缺陷小鼠对纹状体 DA 耗竭具有保护作用。MPTP组中的五重基因敲除小鼠与生理盐水组中的五重基因敲除小鼠相比，多巴胺（DA）水平相似。相比之下，在十二重基因敲除小鼠中，无论处理组别如何，基因型对多巴胺水平均无影响。对黑质部位进行TH和GFAP的免疫荧光染色显示，野生型MPTP组中TH阳性细胞体减少（由星号标示），GFAP免疫反应性增强。小胶质细胞的DAB染色显示，生理盐水处理小鼠呈现分支状细胞体及细长分支突起，而MPTP处理小鼠则出现细胞体呈圆形、突起短而增粗的活化小胶质细胞。对SAL、TH和GFAP进行的免疫印迹进一步证实了MPTP攻击所导致的神经损伤与神经炎症。这些效应在五只 Iys 缺陷小鼠中减弱。使用 MPTP 时需格外注意，例如佩戴个人防护装备，并备有 10% 桥联剂以供组合使用，进行该操作时应始终采取此类预防措施。

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基因-环境相互作用模型揭开帕金森病的隐形易感机制

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基于行为学实验的MPTP诱导斑马鱼幼鱼帕金森病样行为表型分析

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从人乳腺成纤维细胞实验性生成癌相关成纤维细胞（CAFs）

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帕金森病单侧损毁6-OHDA小鼠模型的建立

使用左旋多巴（L-DOPA）进行多巴胺替代药物治疗是帕金森病最常用的对症治疗方法，但伴随有包括称为运动障碍的不自主异常运动等副作用1。本文介绍了一种基质辅助激光解吸电离成像质谱技术（MALDI成像质谱）的实验方案，可用于检测与运动障碍相关的神经肽在大鼠脑内水平的变化。...

帕金森病中神经肽的基质辅助激光解吸电离成像质谱分析

通过人皮肤钻孔活检样本进行成纤维细胞组织块培养的实验方案是一种技术上稳健且简单的方法，可在4-8周内获得皮肤细胞，并以较低的传代次数保存约1500万至2000万个细胞。...

皮肤穿孔活检组织块培养法获取原代人成纤维细胞

探索脂氧合酶同工酶在帕金森病黑质纹状体退行性变中的作用，使用MPTP神经毒素模型和LOX缺陷小鼠进行生化与免疫组织学分析。该方法有助于揭示基因-环境相互作用对神经炎症的影响机制。

基因-环境相互作用模型揭示帕金森病易感机制

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