Name: 干生生物标志物的血斑收藏最大限度地参与人口研究 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: 了解干血斑采集技术用于生物标志物分析，该方法通过手指采血收集样本，适用于现场和人群研究。相比静脉穿刺，干血斑采集更简单、侵入性更低，便于运输和储存，可提高研究参与率并支持健康风险评估。

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本研究工作由工作、家庭与健康网络（www.WorkFamilyHealthNetwork.org）资助，该网络由美国国立卫生研究院和疾病控制与预防中心通过合作协定提供资金支持：尤妮斯·肯尼迪·施莱弗国立儿童健康与人类发展研究所（资助号 U01HD051217、U01HD051218、U01HD051256、U01HD051276）、国家老龄化研究所（资助号 U01AG027669）、行为与社会科学研究所办公室、国家心肺血液研究所（R01HL107240）以及国家职业安全与健康研究所（资助号 U01OH008788、U01HD059773）。威廉·T·格兰特基金会、阿尔弗雷德·P·斯隆基金会以及儿童与家庭管理局的资助为本项目提供了额外支持。本出版物的内容仅由作者负责，不代表上述各研究所和机构的官方观点。

本方案已获得相关机构审查委员会批准，并依照《赫尔辛基宣言》进行。
1. 开始前的准备：标准预防措施&#160;
确保所有样本采集人员均已通过美国国家职业安全卫生研究所（NIOSH）要求的血源性病原体（BBP）培训。
<ol>
	<li>工程控制
	<ol>
		<li>使用经美国食品药品监督管理局（FDA）批准的锐器处置容器来丢弃使用过的无菌一次性采血针。任何接触过可能被污染材料的其他物品应放入正确标识的生物危害废物桶中处理。</li>
		<li>切勿过度填充锐器容器。每次更换容器前，仅填充至容量的3/4，以防止造成伤害。每个锐器容器上均设有分区满载指示标识。</li>
		<li>仅可将锐器丢弃于锐器容器中。不得将锐器容器用于处置其他类型的废弃物。</li>
		<li>任何非锐器但接触过潜在血液传播病原体（BBP）的材料，应丢弃于正确标识的生物危害废物桶中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>个人防护装备（PPE）
	<ol>
		<li>始终正确使用个人防护装备（PPE），以防止血液传播病原体（BBP）感染。采集干血斑（DBS）时所使用的PPE包括手套、实验服、眼部防护装置、长裤和包趾鞋。</li>
		<li>在处理血液或任何接触过血液及其他潜在传染性物质（OPIMs）的物品时，应佩戴手套。手套不应过紧或过松，以免影响后续将描述的&#34;挤血&#34;操作。采集血样时不应佩戴戒指，以防刺破手套。</li>
		<li>应穿着实验服以保护皮肤和衣物免受血液及潜在传染性物质（OPIMs）污染。若实验服接触过血液传播病原体（BBP），应在重复使用前用10%次氯酸钠/水溶液清洗。无论是否发生暴露，实验服均应定期清洗以保持清洁。</li>
		<li>应穿包趾鞋以保护足部，防止可能接触血液及潜在传染性物质（OPIMs）。</li>
		<li>如需要，可佩戴护目镜，以防因飞溅而接触血液或潜在传染性物质（OPIMs）。</li>
		<li>为保持工作区域的清洁，在离开工作区前应脱去所有个人防护装备（PPE），避免污染实验室以外的物品。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>操作规范控制
	<ol>
		<li>每次与受试者直接接触前后，均应用肥皂和温水洗手至少20秒。使用毛巾关闭水龙头。若无洗手池，应使用酒精含量不低于60%的免洗手消毒剂。</li>
		<li>无论是否有机会洗手，在佩戴手套前和脱下手套后均应使用酒精类手部消毒剂。使用足量消毒剂覆盖双手所有表面，并揉搓至完全干燥。切勿用水冲洗或用毛巾擦干，以免降低消毒效果。</li>
		<li>禁止在血液采集区域进食、饮水、化妆或佩戴隐形眼镜。这些行为可能通过直接通路使黏膜暴露于血液传播病原体（BBP），导致个人暴露风险。</li>
		<li>禁止在未戴手套的情况下处理生物危害性材料，也禁止佩戴曾接触过生物危害性材料的手套处理非危害性物品。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>规范的清洁管理 
	良好的清洁管理有助于持续防止血液传播病原体（BBP）暴露，并避免环境交叉污染。
	<ol>
		<li>使用具有杀病毒活性的微生物消毒湿巾，对干血斑（DBS）采集过程中污染的区域进行彻底清洁。</li>
		<li>将生物危害性或受污染的废弃物与普通垃圾分开存放；受污染材料指表面可见血液或潜在传染性物质（OPIM）的物品。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>暴露后的应对措施 
	若发生血液传播病原体（BBP）暴露，应按以下方式应对。
	<ol>
		<li>立即并彻底用肥皂和水清洗暴露部位。迅速采取行动可降低感染风险。</li>
		<li>确定暴露源及暴露途径，以便向现场主管和/或接诊医生准确说明情况。</li>
		<li>暴露发生后应立即通知值班主管。强调应获得现场主管的支持，以评估感染风险程度，并判断是否需要立即接受医疗处置。所有可能暴露于血液传播病原体（BBP）的人员，必须获得具体《暴露控制计划》（ECPs）中规定的指导方针。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 收集室及材料的准备&#160;
<ol>
	<li>选择一个不用于进食的样本采集地点，例如休息室，并确保该区域没有与项目无关的设备。应避免在拥挤的区域操作，保持行动便利非常重要。以下介绍如何设置干血斑采集（实验室）区域。</li>
	<li>设置生物危害废物桶，并在桶内衬上生物危害废物袋。废物桶应便于坐着时取用。</li>
	<li>使用消毒湿巾或类似产品彻底清洁采集区域。清洁过程中使用的所有材料均应丢弃至生物危害废物桶中。此步骤需佩戴手套，以保护皮肤免受有害化学品暴露。</li>
	<li>更换手套并准备其余采集用品。
	<ol>
		<li>将手套和酒精手部消毒剂放置在采集桌上。</li>
		<li>将锐器盒置于采集人员座椅可及范围内。锐器盒在任何时候都应戴手套操作，并在装满后按规定妥善处理。</li>
		<li>将干血斑采集所需的其余所有材料放置在采集区域的防护垫上。包括滤纸采集卡、数个采血针、酒精棉片、纱布垫和创可贴，但数量不宜过多以免区域杂乱。准备的物品不应超过每位受试者可能使用的需求量。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 干血斑样本采集&#160;
采集过程中应始终穿戴个人防护装备（实验服、手套、长裤、封闭式鞋头的鞋子，必要时佩戴护目镜），并在腿部放置防护垫（chux）以保护日常衣物。
<ol>
	<li>准备受试者：
	<ol>
		<li>在获得知情同意后，询问参与者倾向于使用左手还是右手进行采样，并选择采样手指。应避免选择茧较厚或有损伤（裂伤）的手指，以及佩戴戒指的手指。通常不选择小指和拇指，前者是为了尽量减少参与者的疼痛，后者是为了便于采样。为保证采样的一致性和操作便利，采样部位选择在手指指尖的侧面。</li>
		<li>让受试者双手互相揉搓以温暖双手并促进血液循环。可使用暖手袋，或让受试者在有洗手池的情况下用温水冲洗双手。另一种促进血液循环的方法是让受试者反复握紧和放松采血手，然后在指尖采血前完全休息。</li>
		<li>用酒精棉片擦拭选定的手指，并使其完全干燥。再用第二片酒精棉片重复擦拭，以彻底去除任何污染物或护手霜残留。在进行指尖采血前，必须确保手指完全干燥，否则酒精会污染血液样本。与所有使用过的采集材料一样，应立即将酒精棉片丢弃至生物危害废物容器中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>准备受试者手指的穿刺部位：
	<ol>
		<li>将受试者的手臂固定，以防止采样过程中移动，并使手臂和手部肌肉放松。让受试者的肘部置于桌面边缘或大腿上，保持手部舒适地位于心脏水平以下，肌肉放松，以促进血液流动。</li>
		<li>用拇指和食指夹住选定的手指，从手掌向指尖方向缓慢而有力地挤压手指，通过移动握持位置将血液推向指尖，轻柔地进行挤血操作。</li>
		<li>用力将微型采血针垂直于指纹方向按压在受试者手指上，并触发采血针。切勿刺入手指正中心或靠近指甲床的区域，而应瞄准这两个位置之间的手指尺侧。立即把使用过的采血针丢弃至锐器容器中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>采集血斑：
	<ol>
		<li>用无菌纱布擦去第一滴血，以去除样本中的组织液，并立即将纱布丢弃至生物危害废物桶中。</li>
		<li>在保持受试者手部低于心脏并呈下倾角度的同时，从手腕处开始轻轻向指尖方向推压按摩手部，推进至手指根部以促进血液流出。切勿仅用力挤压手指，以免减少血流。持续推压按摩手指直至指尖悬挂形成一大滴血珠。</li>
		<li>使用收集纸采集斑点。
		<ol>
			<li>将采集纸小心置于手指下方，让血滴依靠自身重量自然滴落，以收集到最大体积的血斑。若血液在滤纸上积聚成 pooling 现象， 即 珠子&#34;轻轻敲击卡片，促使血液浸透到纸张中。</li>
			<li>如果血液过于黏稠或血滴过小而无法自然滴落，可缓慢将采血纸接触血滴，通过毛细作用使血液从手指被吸入采血纸，但不得触碰手指。若手指不慎接触了采血纸，应更换纸上的其他位置，因为该采血区域已被污染。受试者的手指绝不可接触滤纸。</li>
			<li>不要将血滴相互重叠放置，即使血斑未填满采集圈。</li>
			<li>不要让血液流下手指或流到指甲上，否则会增加采集大血斑的难度。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>如果在采集过程中受试者的血液出现凝固，需征得同意后另刺一个手指；若请求被接受，则清洁并包扎最初的穿刺部位，然后重新开始采集。
		<ol>
			<li>为防止凝血，持续挤压受试者手指以保持血液流动，或用力用无菌纱布擦拭采血点，以破坏血凝块形成。 
			注意：在某些情况下，可能需要进行多次指尖采血：低温环境可能导致血液凝固加快；此外，受试者血液的黏稠度可能不理想，或挤血手法不当也会影响血液流出。采血前使用暖手袋或温水洗手，可消除低温环境带来的影响。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>采集完干血斑后，或若受试者不愿再进行后续指尖采血，应清除穿刺部位的多余血液。</li>
		<li>在受试者离开样本采集区域后，对穿刺部位进行包扎，以防止可能的污染。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>荧光成像质量控制（QC）评估： 
	完成样本采集后，应对样本进行质量评估。确保血斑满足以下条件：1）从采集区背面测量，直径至少为0.375英寸；2）充分渗透滤纸，使滤纸两面血斑大小相近，未满足此标准的血斑提示可能是手指直接接触滤纸造成采集，可能存在涂抹现象；3）血斑之间互不接触（重叠区域无法用于检测）。</li>
	<li>完成样本采集
	<ol>
		<li>按照步骤1.1所述指南，处理所有剩余的受污染采集材料，包括任何可能接触过潜在感染性物质的物品。</li>
		<li>将采集纸竖立放置在防护垫上晾干。各采集卡之间应留出足够间距，以确保良好的空气流通。空气干燥的最短时间为15分钟，建议至少30分钟。为实现最大空气流通，需将采集卡背面折叠，使其能够独立竖立，并确保采集纸上的样本背面有空气流通空间。</li>
		<li>所有步骤完成后，脱下个人防护装备。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>受试者感到头晕或不适时的应对措施 
	尽管可能性较小，但受试者在指尖采血期间或之后仍可能出现头晕、头昏或晕厥。需警惕苍白、面部和额头出汗、诉称视力模糊、眼睑下垂或颤动、或诉称恶心等征兆。这些症状的出现通常较为突然；样本&#160;采集人员必须做好准备，一旦出现任何症状，立即作出反应。若在操作过程中的任何阶段出现上述症状，应按照以下程序进行处理。
	<ol>
		<li>如果受试者感到晕眩、头昏、头晕或出现晕厥迹象，请立即采取以下措施：
		<ol>
			<li>停止操作。</li>
			<li>注意防止受试者跌倒或受伤。</li>
			<li>平静地安抚参与者，如有必要，让参与者弯腰并将头部置于两腿之间。若活动受限且可移动参与者，可将其转移至附近有软垫的区域休息。</li>
			<li>让受试者休息10分钟。</li>
			<li>如果参与者同意继续，则恢复操作流程。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>如果受试者晕厥，请采取以下措施：
		<ol>
			<li>停止实验操作。</li>
			<li>注意确保受试者不会跌倒或受伤。</li>
			<li>让受试者尽快仰卧，同时抬高双脚。&#160; 受试者将被要求直接从坐位躺下，无需先站立。</li>
			<li>请受试者松开任何紧身衣物。</li>
			<li>让受试者休息10分钟。</li>
			<li>血样采集不应继续。</li>
			<li>如果参与者在1分钟内未作出回应，立即拨打911。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>分解实验区域： 
	血液样本采集完成后，必须拆除采集区域并进行去污染处理，以确保路人不会被血液传播病原体（BBP）感染。血液采集区、设备容器、采集材料和废物容器均须清除BBP污染。处理可能具有传染性的材料时，务必始终穿戴个人防护装备（PPE）。
	<ol>
		<li>从收集区域移除，并重新打包所有未受污染的材料。</li>
		<li>将任何剩余的污染性废弃材料丢弃至生物废弃物桶中。</li>
		<li>关闭锐器盒，并将其存放于可防止污染的区域。若锐器盒已装满四分之三，应按规定进行妥善处理。&#160;并更换为新的锐器盒。</li>
		<li>用杀病毒性微生物消毒湿巾擦拭整个样本采集区域。</li>
		<li>所有生物危害性材料处理完毕后，可对生物危害废物袋进行高压灭菌。从废物桶中取出废物袋时，应小心操作，仅接触袋子外部，并确保袋口紧密封合。建议使用具有杀病毒活性的消毒湿巾清洁所有设备的外表面，以防止交叉污染。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 干血斑采集培训
在对患者或研究对象进行操作前，须确认任何干血斑采集人员均已获得合格人员的认证。确保采集人员尊重受试者，且能够自信、熟练地使用个人防护装备（PPE）和采血器材，能够采集到足够体积的血斑样本，并能在规定时间内高效完成操作，理想情况下不超过10分钟。
5. 样品包装与储存
<ol>
	<li>确保干血斑（DBS）样本在装袋储存前至少干燥15分钟，饱和的卡片可能需要30分钟或更长时间才能充分干燥。关闭采样卡盖子，确保样本完全干燥，以防止样本涂抹和污染。</li>
	<li>取一个生物危害标本袋，并将干燥剂小包放入标本袋中。将DBS样本放入该生物危害标本袋内。处理DBS样本时务必佩戴手套。切勿让血液样本接触标本袋外部。</li>
	<li>每个样本应单独放入一个带有干燥剂小包的生物危害样本袋中。压平袋子以排出多余空气，然后严密封口。将封装好的样本放入冷藏箱中用于运输或临时储存。避免高温环境。</li>
	<li>应在采集后两周内冷冻或检测DBS样本，因为根据待测分析物的不同，DBS样本通常可在室温下储存两周而不会发生显著降解7,2。</li>
</ol>
6. 样本运输与递送&#160;
<ol>
	<li>若已知不含传染性病原体，则根据美国交通部规定，并依照国际民用航空组织（ICAO）技术指令第2部分第6章§6.3.2.3.6条款，将干血斑样本作为豁免的人类标本运输8。</li>
	<li>若需冷冻运输，应将样本置于干冰上 overnight 递送，并采取针对危险物质的必要额外防护措施，或使用冷冻至 -80 °C 的冰袋（gelpaks）。应在周一至周三寄送，以避免因运输延误或周末/节假日导致样本融化，并须确认接收单位已做好准备，能够及时接收并冻存样本。</li>
</ol>
7. 质量控制评估
<ol>
	<li>采集后、检测前（最好在冷冻前进行，以尽量减少冻融循环次数），应对样本进行质量评估。</li>
	<li>样本质量评估应包括以下标准：包装是否规范、干燥剂指示剂是否保持完整（干燥）、斑点是否饱和、斑点大小是否合适、采集方法是否正确（包括斑点在采样卡上无重叠或涂抹，且无与受试者手指接触的痕迹）。</li>
</ol>
8. 冷冻保存
尽管不同分析物的降解时间有所差异，但为获得最佳效果，应在采集后两周内将干血斑（DBS）样本冷冻保存。将样本与干燥剂一同置于实验室级冷冻设备中冷冻。与所有生物样本一样，应尽量减少冻融循环次数，尽管某些针对DBS样本的检测显示，在经历多达六次冻融循环后仍未发现降解迹象9-11。

<ol><li>McDade, T. W., Williams, S., Snodgrass, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+a+drop+can+do%3A+dried+blood+spots+as+a+minimally+invasive+method+for+integrating+biomarkers+into+population-based+research%5BTitle%5D)+AND+%22Demography%22%5BJournal%5D)">What a drop can do: dried blood spots as a minimally invasive method for integrating biomarkers into population-based research.</a> Demography. 44, 899-925 (2007).</li>
<li>Kirschbaum, C., Read, G. F., Hellhammer, D. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKirschbaum%2C+C+%22Assessment+of+hormone+and+drugs+in+saliva+in+biobehavioral+research%22">Assessment of hormone and drugs in saliva in biobehavioral research</a>. , Hogrefe & Huber Publishers. (1992).</li>
<li>Piazza, J. R., Almeida, D. M., Dmitrieva, N. O., Klein, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frontiers+in+the+use+of+biomarkers+of+health+in+research+on+stress+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+Series+B+Psychol.+Sci.+Soc.+Sci%22%5BJournal%5D)">Frontiers in the use of biomarkers of health in research on stress and aging.</a> J. Gerontol. Series B Psychol. Sci. Soc. Sci. 65, 513-525 (2010).</li>
<li>Smyth, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Individual+differences+in+the+diurnal+cycle+of+cortisol%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Individual differences in the diurnal cycle of cortisol.</a> Psychoneuroendocrinology. 22, 89-105 (1997).</li>
<li>Berkman, L. F., Buxton, O. M., Ertel, K., Okechukwu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manager%27s+practices+related+to+work-family+balance+predict+employee+cardiovascular+risk+and+sleep+duration+in+extended+care+settings%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Occup.+Health+Psychol%22%5BJournal%5D)">Manager's practices related to work-family balance predict employee cardiovascular risk and sleep duration in extended care settings.</a> J. Occup. Health Psychol. 115, 316-329 (2010).</li>
<li>Buxton, O. M., Malarick, K., Wang, W., Seeman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+dried+blood+spot+Hb+A1c+with+varied+postcollection+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Changes in dried blood spot Hb A1c with varied postcollection conditions.</a> Clin. Chem. 55, 1034-1036 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Civil+Aviation+Organization.%5BTitle%5D)+AND+%22Technical+Instructions+for+the+Safe+Transport+of+Dangerous+Goods+by+Air%22%5BJournal%5D)">International Civil Aviation Organization.</a> Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air. , (2010).</li>
<li>McDade, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epstein-Barr+virus+antibodies+in+whole+blood+spots%3A+a+minimally+invasive+method+for+assessing+an+aspect+of+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Psychosom.+Med%22%5BJournal%5D)">Epstein-Barr virus antibodies in whole blood spots: a minimally invasive method for assessing an aspect of cell-mediated immunity.</a> Psychosom. Med. 62, 560-567 (2000).</li>
<li>McDade, T. W., Burhop, J., Dohnal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-sensitivity+enzyme+immunoassay+for+C-reactive+protein+in+dried+blood+spots%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">High-sensitivity enzyme immunoassay for C-reactive protein in dried blood spots.</a> Clin. Chem. 50, 652-654 (2004).</li>
<li>McDade, T. W., Shell-Duncan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+blood+collected+on+filter+paper+provides+a+minimally+invasive+method+for+assessing+human+transferrin+receptor+level%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Whole blood collected on filter paper provides a minimally invasive method for assessing human transferrin receptor level.</a> J. Nutr. 132, 3760-3763 (2002).</li>
<li>Gerszten, R. E., Wang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+search+for+new+cardiovascular+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The search for new cardiovascular biomarkers.</a> Nature. 451, 949-952 (2008).</li>
<li>D'Agostino, R. B., Grundy, S., Sullivan, L. M., Wilson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+Framingham+coronary+heart+disease+prediction+scores%3A+results+of+a+multiple+ethnic+groups+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Med.+Assoc%22%5BJournal%5D)">Validation of the Framingham coronary heart disease prediction scores: results of a multiple ethnic groups investigation.</a> J. Am. Med. Assoc. 286, 180-187 (2001).</li>
<li>McDade, T. W., Rutehrford, J., Adair, L., Kuzawa, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+origins+of+inflammation%3A+microbial+exposures+in+infancy+predict+lower+levels+of+C-reactive+protein+in+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R+Soc.+B.%22%5BJournal%5D)">Early origins of inflammation: microbial exposures in infancy predict lower levels of C-reactive protein in adulthood.</a> Proc. R Soc. B.. , (2009).</li>
<li>McDade, T. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcDade%2C+TW+%22Measuring+Stress+in+Humans.+A+Practical+Guide+for+the+Field%22">Measuring Stress in Humans. A Practical Guide for the Field</a>. Ice, G. H., James, G. D. , Cambridge University Press. 181-207 (2007).</li>
<li>Tanner, S., McDade, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme+immunoassay+for+total+immunoglobulin+E+in+dried+blood+spots%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hum.+Biol%22%5BJournal%5D)">Enzyme immunoassay for total immunoglobulin E in dried blood spots.</a> Am. J. Hum. Biol. 19, 440-442 (2007).</li>
<li>Miller, A. A., Sharrock, K. C., McDade, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+leptin+in+dried+blood+spot+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hum.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measurement of leptin in dried blood spot samples.</a> Am. J. Hum. Biol. 18, 857-860 (2006).</li>
<li>Miller, E. M., McDade, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+sensitive+immunoassay+for+interleukin-6+in+dried+blood+spots%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hum.+Biol%22%5BJournal%5D)">A highly sensitive immunoassay for interleukin-6 in dried blood spots.</a> Am. J. Hum. Biol. , (2012).</li>
</ol>

Orfeu Buxton 已从 Sepracor 公司（现为 Sunovion；ESRC-0977，ClinicalTrials.gov 标识符 NCT00900159）获得一项研究者发起的研究资助；曾担任 Dinsmore LLC 的顾问和专家证人，Matsutani America 科学咨询委员会成员，并获得来自维克森林大学医学中心的咨询费。

生物标志物是多个学科中极为有用的工具，包括医学、细胞生物学、遗传学、心理学、社会学、人口统计学以及社会流行病学。在各个学科中，早期阶段关于生物标志物有效性和可靠性的研究被用于揭示隐藏的疾病风险，并对健康结局进行纵向预测。在这些情况下，需要具备准确性、持久性（即&#160;能够经受住样本采集与实验室检测方法实施之间的时间延迟）以及多功能性（即&#160;适用于多种模型）的生物标志物。
尽管干血斑（DBS）采集是一种相对简单的操作，但采用一些技术可有助于最大化采集到的血斑体积。在开始采集前，确保受试者的手部温暖，从而使血管扩张，这有助于刺破手指后血液的流出。使用暖手袋或让受试者将手置于温水中冲洗，均可促进这一过程。采集前对手指进行“挤奶”操作，可促使血液流向指尖，并进一步温暖手部以改善血流。“挤奶”是一种随着练习而熟练掌握的技术。采集人员应采用自己感觉最舒适且有效的方法，但最常用的方法是采集者使用与受试者相反的手对受试者的手进行挤奶。&#160;该方法可使采集者的拇指深入受试者手掌，同时另一只手稳定其手腕。例如，若需采集受试者左手手指的血液，采集者应使用自己的左手固定受试者手腕，并用右手进行挤奶操作。挤奶过程中常见的错误包括未使用牢固的抓握力、仅牵拉手背皮肤而非作用于肌肉以将血液推向指尖。此外，应避免用挤奶的手捏住手指，或用非挤奶的手紧握受试者手腕，这两种操作均会阻碍血液流动。
采血时，穿刺手指应尽可能深，需在释放采血针前用力将采血针压入手指。穿刺过浅会导致血流减少并加速凝血。穿刺后，操作迅速至关重要。血液越稀薄，越容易采集，形成的血斑也越大。穿刺后，血液会逐渐变得黏稠，直至凝固。在采血卡上采集血斑所需时间越短，血斑体积越大。
理想情况下，受试者的血液应足够稀薄，能够依靠自身重量自然滴落，但并非所有受试者都如此，因为有些人的血液较稠或凝结速度较快。如果血液过于黏稠而无法从指尖滴落，则必须将滤纸片移向血液以进行采集。在将滤纸片接触血液时，应尽可能长时间地使纸片与悬挂在指尖的血滴保持接触，而不是简单地将血液轻触到纸片上。这种方法有助于将血液从指尖拉出，从而最大化血斑的尺寸。该操作需要手部保持稳定，以维持血液与滤纸片之间的接触。建议使用双手操作：一只手固定受试者的手，另一只手持滤纸片，并使两只手相互接触，以共同稳定滤纸片和血滴。
在心血管代谢风险评估等高级研究领域，长期以来依赖于C反应蛋白（CRP）、胰岛素和糖化血红蛋白（HbA1C）等生物标志物，用于早期风险检测与预防；同时也依赖于心血管疾病（CVD）风险及与CVD相关的死亡率的&#34;硬终点&#34;生物标志物12。临床流行病学常通过评估生物标志物，前瞻性地预测心血管代谢风险结局，如心脏病和2型糖尿病。其中应用最广泛的生物标志物可能是Framingham风险评分，该评分为综合指标，包含血压、高密度脂蛋白（HDL）胆固醇水平和总胆固醇水平，在预测CVD方面已显示出有效性13。然而，Framingham评分存在一些技术争议，在专注于探讨社会与环境因素对健康影响的研究中具有局限性，提示心血管研究领域需要更准确、更特异的生物标志物。
市面上有多种利用ELISA或类似技术检测干血斑（DBS）样本的商用试剂盒。检测DBS样本的关键在于采用特异且经过优化的洗脱步骤，以将干燥的样本溶解于溶液中。2这一研究领域正在不断拓展，目前针对更多分析物的检测方法正在研发中1在已验证并广泛使用的检测方法中，包括胆固醇2C反应蛋白10,14,15，IgE16，EBV9,15，瘦素17和细胞因子18有多家实验室专门从事干血斑（DBS）检测，包括华盛顿大学实验室医学系（UW Lab Med）生物标志物实验室（主任：Mark Wener）。
考虑到在心血管和糖尿病研究领域，一组生物标志物比单一生物标志物更具实用性，因此需要结合多种背景因素来综合评估生物标志物，以最大化其应用价值。然而，生物标志物研究在经费和数据采集时间上往往成本较高。因此，尽管选择准确、稳定且多功能的生物标志物至关重要，但在工作与家庭环境中的生物标志物研究必须注重实用性，优先选择价格低廉、适用性强且能够快速便捷采集的标志物。此外，实际条件的限制通常导致无法在同一操作流程中同时实现成本、质量和速度的最优化。这正是现场研究和人群研究中健康生物标志物研究下一步所面临的关键问题。当前，生物标志物研究领域正处于快速发展阶段；然而，未来仍有大量工作亟待完成。

生物标志物可提供有关从正常到致病性生物过程的宝贵信息，这些过程可能导致临床上可识别的疾病1。在科研环境中，干血斑（DBS）正日益成为比静脉穿刺更受青睐的全血生物标志物采集方法。DBS采集操作简便、相对无痛、侵入性小于静脉穿刺，且对储存条件要求极低（即&#160;样本无需立即冷冻，可在稳定的冷冻环境中长期保存后再进行检测）。DBS样本可用于检测多种不同的分析物，包括胆固醇、C反应蛋白、糖化血红蛋白、EB病毒抗体以及多种细胞因子。
静脉穿刺长期以来一直是采集血液生物标志物的金标准。然而，获取、储存和运输血液样本需要遵守一系列操作规程和卫生规范，这在某些研究方案中可能难以实现。静脉穿刺操作者必须具备官方认证的采血资格，而干血斑（DBS）采样程序更为简便，无需官方认证。静脉血采集所需的设备也比DBS采集更多（即&#160;针头、试管、止血带），且采样后的处理工作更复杂。静脉穿刺样本必须在采集后立即进行处理（即&#160;通过离心或在室温下静置一定时间分离血清或血浆），并在-20 °C至-70 °C条件下迅速冷冻，以防止待测物降解；而DBS样本仅需在空气中自然干燥，随后可在室温下保存一周或更长时间（具体时长取决于待测物），之后再转移至冷冻环境2。由于上述原因，DBS样本的采集成本低于静脉穿刺样本。此外，DBS样本占用空间更小，从而降低了检测前的运输和储存成本。
唾液作为生物标志物的应用在行为生物学研究中已变得至关重要。唾液提供了一种简单、无创的生物标志物采集方法，已成为野外工作中测定皮质醇或可替宁的标准方法3-5。尿液是另一种可无创采集的样本，可用于人群水平的褪黑激素检测或毒理学研究。尽管尿液和唾液均可通过受试者自行完成的简便采集程序获取，但并非所有分析物都可在这些介质中进行测定。
干血斑（DBS）提供了一种简单且具有成本效益的静脉穿刺替代方法，正日益成为现场研究和人群研究中广泛应用的研究工具6。

<table><tbody><tr><td>无菌II型微生物擦拭巾</td><td>EcoLab</td><td>D12330345</td><td>第三方运输</td></tr><tr><td>生物危害废物袋</td><td>VWR</td><td>14220-092</td><td>高强度可高压灭菌聚丙烯生物危害袋，2密耳</td></tr><tr><td>生物危害废物桶</td><td>Tyco</td><td>58578-092</td><td>8加仑滑盖</td></tr><tr><td>锐器盒</td><td>BD Medical</td><td>BD305487</td><td>1.4夸脱</td></tr><tr><td>Chux吸水垫</td><td>VWR</td><td>82020-845</td><td>实验台下用吸水垫&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>手套</td><td>VWR</td><td>超小号: 89038-267</td><td>无粉、无乳胶丁腈手套</td></tr><tr><td></td><td></td><td>小号: 89038-268</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>中号: 89038-270</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>大号: 89038-272</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>加大号: 89038-274</td><td></td></tr><tr><td>手部消毒剂（&lt;em&gt;例如&lt;/em&gt; Purell）</td><td>强生</td><td>89040-210</td><td>第三方运输</td></tr><tr><td>酒精擦拭片</td><td>Webcol 和 Curity</td><td>82003-856</td><td>预处理垫</td></tr><tr><td>纱布</td><td>Versalon</td><td>82004-826</td><td>非织造海绵</td></tr><tr><td>创可贴</td><td>Nutramax Stat Strips</td><td>15431-475</td><td></td></tr><tr><td>采血针</td><td>Owen Mumford</td><td>82028-060</td><td>3.0 mm，21 G&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>蛋白质样本采集卡</td><td>Whatman</td><td>定制</td><td>903蛋白保存采集纸</td></tr><tr><td>干燥剂</td><td>VWR</td><td>61161-319</td><td>湿度吸收海绵</td></tr><tr><td>样本袋</td><td>Lab Guard 可重复封口生物危害袋，ITW Minigrip</td><td>56766-370</td><td>6英寸 × 9英寸</td></tr><tr><td>样本储存冷藏箱</td><td>Igloo</td><td>Playmate Mini</td><td>4夸脱；直接来自制造商</td></tr></tbody></table>

最大化人群研究参与度的健康生物标志物干血斑采集

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

生物标志物是直接测量的疾病、健康状况、暴露情况或其他生物学信息的生物学指标。在人群与社会科学研究中，生物标志物需要易于获取、运输和分析。干血斑（Dried Blood Spots, DBS）满足了这一需求，可在现场采集且应答率较高。这些要素在包含干预措施的纵向研究设计中尤为重要，因为此类研究必须尽量避免样本流失，而高应答率有助于提升研究结果的解释力。干血斑样本采集操作简便、快速，相对无痛，侵入性小于静脉穿刺，且对现场储存条件要求极低（即&#160;样本无需立即冷冻，可在检测前长期储存在稳定的低温环境中）。这些样本可用于检测多种不同的分析物，包括胆固醇、C反应蛋白、糖化血红蛋白、多种细胞因子及其他分析物，同时还能提供遗传物质。干血斑采集方法已在多项近期研究中被采用并展示。

<img alt="用于血液学检测的干血斑样本卡；包含样本圆圈和条形码。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 干血斑样本。 图示一张采集卡，上面有四个有效采集的血斑，正处于干燥过程中。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" target="_blank">点击此处查看大图。</a>
<img alt="血液样本放置评估示意图，显示毛细血管血液应用的正确与错误方式。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. 优质与劣质的干血斑样本。 图中显示成功（右侧）与失败（左侧）的干血斑（DBS）采集结果。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" target="_blank">点击此处查看大图。</a>
<img alt="显示胆固醇、HbA1C 和心血管疾病风险与管理者工作-家庭评分类别的柱状图。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 3"> 
图 3. 管理者的态度与实践与员工心脑代谢疾病风险的相关性6。 本图改编自 Berkman, L. F., Buxton, O. M., Ertel, K. & Okechukwu, C. 管理者在促进工作与家庭平衡方面的实践可预测长期护理环境中员工的心血管风险和睡眠时长。《职业健康心理学杂志》Journal of Occupational Health Psychology 115, 316–329 (2010)。暴露于在支持员工工作与家庭需求方面表现出中等或较低“工作-家庭”评分（开放性与创造性）的管理者之下的员工，其具有两种或以上心血管风险因素（当前吸烟、肥胖、高血压或高血 压、高胆固醇、高糖化血红蛋白（Hb A1C）或糖尿病诊断）的几率显著升高。上图和中图显示通过干血斑法测定的总胆固醇以及通过即时检测设备测定的 Hb A1C 的均值 ± 标准差（Hb A1C 也可通过干血斑法可靠测定）。下图显示按管理者评分划分的心血管疾病风险。针对护士及其他提供直接照护服务的员工的分析表明，暴露于在工作-家庭问题上缺乏创造性和开放性的管理者，可能对这些个体尤为重要（低工作-家庭评分的比值比 OR = 6.4，p = 0.01）。所有模型均对年龄、性别、工资、教育程度、种族/民族以及工作场所进行了校正。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" target="_blank">点击此处查看高清图像</a>

生物标志物是直接测量的疾病或健康生物学指标。在人群与社会科学研究中，生物标志物需要易于获取、运输和分析。干血斑（Dried Blood Spot, DBS）采集满足了这一需求，可在现场采集且应答率高&#160;，并可用于多种生物标志物的分析。

生物标志物是直接测量的生物学指标，用于反映疾病、健康状况、暴露情况或其他生物学信息。在人群与社会科学研究中，……

以下操作步骤的目标是采集干血斑（dried blood spots，DBS），作为一种简单且具有成本效益的静脉穿刺替代方法。首先让受试者温暖双手，然后选择一根手指并进行清洁。通过按摩手部和手指，促进穿刺部位的血液流动。随后使用安全采血针穿刺手指，并将血液滴在滤纸上收集血斑。最后，清洁穿刺部位并进行包扎。样本干燥后，采集的样品即可包装，用于储存或运输。最终，成功采集的干血斑可用于多种生物标志物的分析，例如胆固醇、C反应蛋白和糖化血红蛋白。与静脉穿刺相比，该技术的主要优势在于干血斑采集操作简便、相对无痛，且侵入性更小。尽管掌握该技术需要较长时间，但通过数天的指导和培训即可学会并实施。由于干血斑样本易于获取、运输和分析，因此可用于现场及人群水平的生物标志物研究，尤其适用于难以或无法采集静脉穿刺样本的研究场景。通过干血斑检测的生物标志物可为健康相关或慢性疾病风险背后的生物学过程提供重要信息。采集干血斑样本时，务必始终使用个人防护装备，例如实验服、手套、长裤、包头鞋、实验防护垫，必要时佩戴护目镜。获得知情同意后，询问受试者希望使用哪只手，然后选择用于采血的手指。接下来，让受试者双手互相揉搓，以使手部温暖并促进血液循环。用酒精棉片对选定的手指擦拭两次，每次均需等待酒精完全干燥。与所有使用过的采集材料一样，立即将擦拭棉片丢弃至生物危害废物容器中。现在固定受试者的手臂，以防止采集过程中发生移动；为使手臂和手部肌肉放松，应将受试者的手舒适地置于心脏水平以下位置，并保持肌肉放松状态。为促进血液流动，用拇指和食指轻轻挤捏受试者的手部及选定手指，从手掌向指尖方向缓慢而有力地移动握持位置，将血液推向指尖。然后将微型采血针垂直压在受试者手指的指纹线上，位置位于手指中心与指甲床之间偏尺侧处，并触发采血针完成穿刺。立即将使用过的采血针丢弃至锐器容器中，然后用无菌纱布垫擦去第一滴血。立即丢弃纱布，接着从手腕处开始向手指根部轻轻挤血，并使受试者的手保持低于心脏位置，呈向下倾斜角度。继续挤血直至指尖悬挂形成一大滴血液，然后小心地将一张采血纸置于手指下方，让血滴依靠自身重量自然滴落至纸上。如果血液过于黏稠或血滴太小而无法自行滴落，可缓慢将采集纸接触血滴，通过毛细作用收集血液，注意不要让手指触碰到采集纸。为防止血液凝固，应持续挤压受试者的手指以保持血液流动。血样采集完成后，需清理穿刺部位残留的多余血液。然后包扎穿刺部位，以防止潜在污染。确保采集纸能够直立放置，以便样本后方空气流通。将采集卡置于防护垫上。将卡片间隔放置，以确保卡片之间有良好的空气流通。让样本干燥至少15至30分钟。出现深红棕色斑点表明样本已充分干燥，可进行储存。确认样本干燥后，合上采集卡盖子。接着将干燥剂小包放入生物危害标本袋中，然后将采集卡放入袋内，注意避免血样接触袋外。压平袋子以排出多余空气，然后紧密封口。完成所有采血步骤后，脱去个人防护装备。最后，将装袋的样本放入储存冷藏箱中，用于运输或临时保存，避免高温环境。此处展示了有效的干血斑样本采集结果。从采血卡背面测量，样本直径至少为0.375英寸，且采集区域两侧的样本大小大致相等，表明滤纸已完全饱和。这些图像中展示了存在问题的干血斑作为对比。例如，血斑之间不应相互重叠，因为重叠会导致样本过量。防止知晓血液样本体积，采血斑点不应在采集区域涂抹，因为这代表未完全饱和，通常伴有血液未能穿透纸片对侧的现象。干血斑（DBS）样本在人群水平研究中的成功应用，使得在静脉采血不可行的情况下仍可进行生物标志物分析。这些图表展示了一项研究中的此类应用，即通过灵活的管理风格预测员工的心血管代谢疾病风险。例如，在本实验中，DBS 样本中的总胆固醇水平被确定与管理者工作-家庭平衡评分中等或较低的员工出现两种或以上心血管风险的几率显著增加相关。观看本视频后，您应了解如何安全、规范地采集、包装和储存干血斑样本。一旦掌握，该技术可在不到 10 分钟内完成，且对受试者造成的不便极小。在执行此操作过程中，必须遵守所有标准预防措施。应始终使用个人防护装备，并对受污染的材料和生物废弃物进行妥善处理。通过在人们生活或工作的环境中收集生物标志物——可以说是一种自由活动状态下的个体——并且以不引起他们不适的方式进行，我们能够提高研究中参与者的依从性和参与度。我们还能够评估环境和社会背景影响健康与疾病的机制。

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