评估局部或全身药物干预后小鼠对挥发性全身麻醉药敏感性的变化

本实验的总体目标是评估药物干预后麻醉敏感性的变化。首先需仔细检查暴露舱，确保气体流速和温度均匀一致；第二步是让动物适应暴露舱环境。

接下来，实施感兴趣的药理学干预。最后一步是通过评估动物在麻醉暴露下的写字反射来检测麻醉敏感性的变化。最终，写字反射检测用于显示由长效或短效药理学干预所引起的麻醉敏感性差异。

尽管该系统可用于研究小鼠麻醉敏感性的变化，但它也可用于多种物种，以研究任何吸入性治疗药物的效果。测试装置由24个透明丙烯酸圆柱形腔室组成，每个腔室长10厘米，直径5厘米。此尺寸适用于典型的25克成年小鼠。

每个腔室两端均设有气体进出口。出口端采用橡胶垫圈密封，便于拆卸。插入动物时，将每个腔室安装在置于水浴中的支架上。

将支架放置好，使只有 chambers 的下部浸入液体中。chambers 后端的支撑结构可提供稳定性，并保持 chambers 处于水平状态，确保每个 chamber 与浴液均匀接触。将氧气瓶通过聚乙烯管连接至蒸发器和流量计后，将管路分成 25 根等长的小直径电阻管。

这可确保在连接时向每个腔室提供相等的气流。接下来，将位于气体入口对侧的各腔室出口端的真空管路连接起来。这些真空管路在汇流装置处汇合并连接至实验室内部的抽吸管路。

主真空管路上的泄压阀可确保每个腔室内的气压处于大气压条件。待所有部件连接完毕后，向浴槽中加入足量的水，使每个腔室的底部完全浸入水中。开启泵以循环水浴，并维持37摄氏度的恒定温度。

进行测试前，需检查舱室是否存在泄漏及气流是否正常。首先，将氧气流速设置为每分钟5升。将每个舱室浸入水中，观察是否有气泡产生或水进入，两者均表明存在泄漏。

在开始实验前更换任何泄漏的腔室。对于每个腔室，在其前方串联连接一个500毫升/分钟的流量计，以确保各线路的流量平衡。若某个腔室未达到预期流量，应检查其管路是否堵塞。

最后，在适应前一周，校准试剂分析仪，确保当100%氧气流动时，异氟烷读数为0.0%。植入应答器以在测试期间监测体温。达到适当的麻醉深度后，用聚维酮碘消毒背部颈部区域。

接下来，使用无菌针头将温度应答器皮下注射至肩胛骨之间。每日监测注射部位是否出现感染及应答器移位情况。在首次评估前四天，使所有试验动物适应检测舱环境，以减少因新环境所导致的应激影响。

为此，将每只动物放入一个舱室内，通入100%氧气，持续两小时。每天重复此暴露过程，直至开始测试。经过四天的适应期后，测试日开始时给予动物所关注的药理学干预措施。

这种干预可能是对特定脑区进行立体定位注射、静脉注射或腹腔注射，用于药理学干预。当药物作用持续时间较长时，需逐步测定麻醉敏感性。开始测试时，将每只动物放入独立的舱室中，并在所有动物就位后通入100%氧气。

将异氟烷的氟浓度设为0.4%，持续15分钟。在此阶段的最后两分钟内，通过轻轻滚动麻醉舱使小鼠呈仰卧位，以评估每只动物的翻正反射。若小鼠能够将四肢全部恢复至舱底，则认为其翻正反射完整。

在两分钟内，记录每只小鼠的书写反射状态，并扫描每只小鼠以获取温度数据。接着，将异氟烷浓度提高约 0.05%，维持 15 分钟，并按照先前所示方法评估书写反射。持续增加麻醉剂浓度，直至所有动物均丧失书写反射。

可选地，可通过在逐渐降低麻醉剂浓度的同时重复逐步的书写反射评估来测量麻醉苏醒情况。为结束实验，关闭异氟烷，用100%氧气冲洗整个系统15分钟，适用于持续时间较短的干预。随后进行苏醒时间测试。

将每只动物放入通有100%氧气的独立麻醉舱后，将异氟烷浓度设定为1.2%。经过数分钟麻醉暴露后，轻轻旋转每个麻醉舱，直至每只小鼠均保持仰卧姿势。确认翻正反射消失后，维持异氟烷浓度在1.2%，持续30分钟至1小时，具体时间取决于预期的急性干预作用时长。关闭异氟烷气流后，继续通入100%氧气，并记录每只动物四肢全部着地所需的时间。

当动物能够连续三次将四肢全部放置在地面上时，即认为其踏步反射完整。本实验中，在将I型肉毒碱酸注射至腹外侧前视核一周后检测了踏步反射。预计该脑区的损伤会降低麻醉敏感性。

然而，在诱导或苏醒阶段的逐步麻醉敏感性方面均未发现显著差异。在本示例中，苏醒时间测试紧随双侧I型肉毒杆菌毒素酸微量注射后立即进行。当注射至VLPO时，与邻近的内侧隔核注射组及溶剂对照组相比，催眠状态明显延长。

观看本视频后，您应充分了解如何通过逐步诱导试验或苏醒时间试验来评估麻醉敏感性，同时确保每只动物暴露于相同的气体流速和温度条件下。