温度偏好行为及其在德罗索菲拉的昼夜节律的设计与分析

该程序的总体目标是确定果蝇的温度偏好。这是通过首先准备果蝇和设备来实现的，该设备围绕温控铝制底座组装。一旦在设备中确定了温度，就会加载一组果蝇，半小时后对它们的温度偏好进行评分。

最终，该测定可用于多种实验条件。例如，温度偏好的昼夜节律。这种方法可以帮助回答目标节奏领域的关键问题。

由于这种温度偏好的目标节律由与机车活动不同的机制控制，因此该行为测定将导致鉴定以前未使用机车活动方法确定的新分子和细胞机制。这种方法还可以帮助回答感觉神经科学领域的关键问题，例如温度和疼痛感。因为这种温度行为分析非常稳健，所以这种分析将使我们能够绘制从温度检测到处理的神经回路，这将使我们更深入地了解感觉统合。

在加湿的培养箱中用 1212 光暗循环饲养果蝇。该协议要求将两个这样的培养箱设置为相反的时间表。在正常工作时间，夜间培养箱应保持黑暗。

在夜间循环期间访问培养箱时，使用红灯照亮培养箱。收集 20 到 30 只新孵化的苍蝇，无论性别如何，以任何比例，将它们放在培养箱中 2 到 3 天，然后再进行检测。每种测试条件至少需要五个队列。

要构建温度偏好测试室，必须设计有机玻璃盖以适合板下方的铝板。放置四个 Peltier 设备。每个帕尔贴设备都应连接到温度控制器，这些温度控制器可以产生冷温或热温，以防止 Pelter 过热。

计算机冷却系统连接到水管、风冷风扇和电源，以监测铝板上的温度。温度探头嵌入铝板的边缘并连接到温度控制器。在盖子中将板的冷侧和热侧分别设置为 12 和 36 摄氏度。

将 6 个温度探头安装在其中一个泳道内的不同位置。将设备放置在 25 摄氏度、相对湿度介于 65% 到 75% 之间的环境受控房间中。请务必监控这些情况。

房间必须有光线控制和良好的空气流通，以防止任何循环空气破坏温度。用浴帘对测试区域进行渐变屏蔽。设备上必须使用均匀的光线，因为亮度会影响温度偏好。

打开设备至少 30 分钟。为了在板的表面建立稳定的温度梯度。在行为装置的盖子上涂上防水剂，以防止苍蝇爬上盖子的墙壁或天花板。

如有必要，将多余的防水剂擦去，然后让盖子驾驶 25 至 30 分钟，半小时后可以使用双面胶。擦去铝板上的任何冷凝水。然后将有机玻璃盖放在铝板上并用六个 C 夹固定。

盖子密封非常重要。很好地监测板和盖子之间的空气温度。确保探头不接触铝板或有机玻璃盖。

让盖子在板上平衡至少 15 分钟。最终，铝板和盖子之间的空气温度梯度将在 18 到 32 摄氏度之间。在白天行为实验的情况下，将苍蝇瓶从白天的培养箱中取出，并在夜间行为实验之前在光线下测试行为测定。将果蝇瓶从夜间培养箱中取出。

用箔纸包起来，放在红灯下的暗室里。对于黑暗时段的实验，房间的灯必须始终保持关闭，直到行为实验完成。但是，红灯可用于使用抽吸进行照明。

加载 20 到 25 只飞入铝板之间的空间。然后用盖玻片盖住孔，以防止苍蝇逃脱。让苍蝇四处移动 30 分钟。

实验完成后，至少拍摄两张照片进行光照实验。暗实验需要使用闪光灯。检查设备的温度。

注意室温和湿度，去除设备顶部孔附近的苍蝇连接管二氧化碳，麻醉苍蝇，丢弃苍蝇。他们不应该重新测试。接下来，擦去板上的任何冷凝水或水分。

更换板上的盖子并用夹子拧紧，为下一次实验做准备 对于下一个实验，计算温度梯度如下。首先，使用尺子根据探头位置及其记录的温度确定温度探头的放置位置。在苍蝇最终位置的照片上的适当位置绘制代表每个温度度数的直线。

接下来计算每个 1 摄氏度区间之间的苍蝇数量。排除墙壁或盖子天花板上的任何苍蝇。计算每个泳道的每个温度范围内果蝇的百分比，然后计算每个条件的平均首选温度。

从至少 5 次试验中收集数据。然后使用每个试验的平均值来确定有误差的平均首选温度。在 25 摄氏度下升高的普通果蝇喜欢早上比晚上更低的温度。

白天测得温度偏好增加 1 到 1.5 度，温度偏好增加 1.5 到 2 摄氏度。在从白天到黑夜的过渡中观察到减少。该检测也可用于测试突变果蝇。

例如，发现在行程中携带有缺陷突变的果蝇的温度偏好，一个离子通道高于对照组。观看此视频后，您应该对如何进行温度偏好行为分析有很好的了解。这种方法允许研究分子机制和神经回路、ofa 和时钟，以及大脑如何整合不同的环境线索和生物钟。