Name: 基于细胞的流式细胞仪检测，以测量细胞毒活性 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-17T13:45:00.000+00:00
Duration: 10 min 14 s
Description: 学习基于细胞的流式细胞术检测方法，用于测量抗原特异性CD8+ T细胞的细胞毒活性。该方法通过共培养效应T细胞与靶细胞，利用流式细胞仪精确定量杀伤效率，为免疫学研究提供可靠的细胞毒性评估工具。

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本工作由佛罗里达州旅游、贸易和经济发展办公室资助。

1. 效应CD8+ T细胞的制备
<ol>
	<li>将自体冻存的外周血单个核细胞（PBMC）（2-3管，每管50&#160;x 106个细胞）从液氮中取出，放入37 °C水浴中解冻。</li>
	<li>用完全RPMI培养基（含4 mM L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素和链霉素，并添加10%胎牛血清）将细胞管加至50 ml，洗涤细胞。计数PBMC，并以5 x 106/ml的浓度重悬于完全RPMI培养基中。</li>
	<li>向PBMC中加入特异性肽段（5 µg/ml）和IL-2（10 ng/ml）。</li>
	<li>在96孔深孔板中建立培养体系；每孔接种1 ml细胞悬液。</li>
	<li>培养3天后，更换一半的细胞培养基为新鲜的完全RPMI培养基。</li>
	<li>培养6天后，用多通道移液器收集所有PBMC，并转移至无菌储液槽中。</li>
	<li>计数、洗涤PBMC，并以5 x 107/ml的浓度重悬于14 ml圆底管中的推荐分离缓冲液中。按每毫升细胞加入50 µl人CD8+ T细胞富集混合液。混匀后室温孵育10分钟。再按每毫升细胞加入150 µl磁性颗粒，孵育5分钟。</li>
	<li>通过加入分离缓冲液将细胞悬液体积调整至7 ml。将试管放入磁铁中，进行未接触式CD8+ T细胞的免疫磁分离。5分钟后，保持试管仍在磁铁中，将目标细胞倾倒入新的15 ml锥形管中。取少量细胞样本，在4 °C条件下，用含1X PBS-2% FBS的缓冲液与抗CD3和CD8抗体孵育30分钟。随后可通过流式细胞术检测CD8+ T细胞纯度，预期纯度为95%或更高。</li>
	<li>将CD8+ T细胞重悬于450 µl完全RPMI培养基中。</li>
	<li>向5个螺帽管中各加入225 µl完全RPMI培养基。</li>
	<li>通过将225 µl CD8+ T细胞悬液转移至下一管，进行系列稀释（从1:2至1:32）（见 图1 上图）。</li>
</ol>
2. 靶向CD4+ T细胞的制备
<ol>
	<li>将自体冻存的外周血单个核细胞（PBMC）（1 小瓶，含 50 × 106 个细胞）从液氮中取出，转移至 37 °C 水浴中解冻。</li>
	<li>将细胞悬液转移至含有 10 ml RPMI 培养基的 50 ml 圆底离心管中。</li>
	<li>用分离缓冲液洗涤细胞，并将 PBMC 重悬于 14 ml 圆底管中，浓度为 5 × 107/ml。按每毫升细胞加入 50 µl 人 CD4+ T 细胞富集混合液，混匀后室温孵育 10 分钟。再按每毫升细胞加入 100 µl 磁性颗粒，室温孵育 5 分钟。</li>
	<li>用分离缓冲液将细胞悬液补至 7 ml。将离心管放入磁架中，开始分离 CD4+ T 细胞。5 分钟后，在保持离心管处于磁架中的情况下，将未被磁性捕获的细胞倾入新的 15 ml 圆底离心管中。取少量细胞 aliquot，用含 CD3 和 CD4 抗体的 1×&#160;PBS-2% FBS 溶液在 4 °C 染色 30 分钟，随后通过流式细胞术检测 CD4+ T 细胞纯度，预期纯度应达到 95% 或更高。</li>
	<li>计数 CD4+ T 细胞，将其分装至两个 15 ml 圆底离心管中，并用预热的 1×&#160;PBS 洗涤。</li>
	<li>在预热的 PBS 中配制 0.4 µM 的 CFSE 高浓度工作液。</li>
	<li>取部分 10×&#160;CFSE 高浓度工作液，用预热的 PBS 稀释，配制 0.04 µM 的 CFSE 低浓度工作液。</li>
	<li>将细胞重悬于 PBS 中，浓度为 20 × 106/ml（若 CD4+ T 细胞数量少于 10 × 106/ml，则用 0.5 ml PBS 重悬），取一半细胞加入等体积的 0.4 µM CFSE 高浓度工作液（终浓度为 0.2 µM）。例如，1 ml 细胞加入 1 ml CFSE 工作液。剩余另一半 CD4+ T 细胞则加入等体积的 0.04 µM CFSE 低浓度工作液（终浓度为 0.02 µM）。所有细胞在 37 °C、5% CO2 条件下染色 15 分钟。</li>
	<li>染色结束后，以 1,500 rpm 离心 5 分钟，弃上清，用 1 ml 预热的完全 RPMI 培养基重悬细胞，以终止标记反应。</li>
	<li>向 CFSE 低浓度标记的 CD4+ T 细胞中加入目标肽段，终浓度为 5 µg/ml，置于完全 RPMI 培养基中，在 37 °C、5% CO2 条件下孵育 45 分钟。</li>
	<li>用完全 RPMI 培养基洗涤 CFSE 高浓度和低浓度标记的 CD4+ T 细胞，共洗涤两次。洗涤后分别用完全 RPMI 培养基重悬，浓度均为 2 ×&#160;105 个细胞/ml。</li>
	<li>将两种目标细胞群体按 1:1 比例混合（CFSE 高浓度 : CFSE 低浓度）（见 图 1 下图）。</li>
</ol>
3. 共培养
<ol>
	<li>从每种稀释度的 CD8+ T 细胞中，取 100 µl 加入圆底 96 孔板中，每个样本设两个复孔。</li>
	<li>向每种效应细胞稀释液中加入混合的靶向 CD4+ T 细胞（100 µl），使终体积为 200 µl。</li>
	<li>为检测基础凋亡水平，单独接种靶细胞于 3 个孔中。</li>
	<li>将共培养体系在 37 °C、5% CO2 条件下孵育 6 小时。</li>
</ol>
4. 流式细胞术染色与采集
<ol>
	<li>将细胞转移至V型底96孔板中，在37 °C、5% CO2条件下，用PE标记的pMHC四聚体染色15分钟。</li>
	<li>用1×&#160;PBS-2% FBS洗涤一次，在4 °C避光条件下，用Far Red LIVE/DEAD可固定死细胞染料、αCD3-Alexa700、αCD8-Percp和αCD4-Brilliant Violet 650染色30分钟。</li>
	<li>用1×&#160;PBS-2% FBS洗涤细胞一次，重悬于含2%甲醛的1×&#160;PBS溶液中，体积为100 µl。</li>
	<li>在流式细胞仪上检测细胞。</li>
</ol>

<ol><li>Appay, V., Van Lier, R. A. W., Sallusto, F., Roederer, M. Cytometry. 73, 975-983 (2008).</li>
<li>Betts, M. R., Harari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotype+and+function+of+protective+T+cell+immune+responses+in+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+HIV+AIDS%22%5BJournal%5D)">Phenotype and function of protective T cell immune responses in HIV.</a> Curr. Opin. HIV AIDS. 3, 349-355 (2008).</li>
<li>Roder, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+immunodeficiency+disorder+in+humans+involving+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A new immunodeficiency disorder in humans involving NK cells.</a> Nature. 284, 553-555 (1980).</li>
<li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> J. Immunol. 171, 27-31 (2003).</li>
<li>Byers, A. M., Kemball, C. C., Moser, J. M., Lukacher, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+rapid+in+vivo+CTL+activity+by+polyoma+virus-specific+effector+and+memory+CD8%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: rapid in vivo CTL activity by polyoma virus-specific effector and memory CD8+ T cells.</a> J. Immunol. 171, 17-21 (2003).</li>
<li>Devevre, E., Romero, P., Mahnke, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LiveCount+Assay%3A+concomitant+measurement+of+cytolytic+activity+and+phenotypic+characterisation+of+CD8%28%2B%29+T-cells+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">LiveCount Assay: concomitant measurement of cytolytic activity and phenotypic characterisation of CD8(+) T-cells by flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 311, 31-46 (2006).</li>
<li>Altman, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+analysis+of+antigen-specific+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes.</a> Science. 274, 94-96 (1996).</li>
<li>Mbitikon-Kobo, F. M., Bonneville, M., Sekaly, R. P., Trautmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+measurement+of+the+cytotoxic+capacity+of+human+primary+antigen-specific+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Ex vivo measurement of the cytotoxic capacity of human primary antigen-specific CD8 T cells.</a> J. Immunol. Methods. 375, 252-257 (2012).</li>
<li>Bryant, J., Day, R., Whiteside, T. L., Herberman, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+lytic+units+for+the+expression+of+cell-mediated+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Calculation of lytic units for the expression of cell-mediated cytotoxicity.</a> J. Immunol. Methods. 146, 91-103 (1992).</li>
<li>Varadarajan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+single-cell+analysis+of+human+CD8%28%2B%29+T+cell+functions+reveals+discordance+for+cytokine+secretion+and+cytolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">A high-throughput single-cell analysis of human CD8(+) T cell functions reveals discordance for cytokine secretion and cytolysis.</a> J. Clin. Invest. 121, 4322-4331 (2011).</li>
<li>Trautmann, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+metabolic%2C+functional%2C+and+cytolytic+differences+characterize+HIV-specific+CD8+T+cells+in+primary+and+chronic+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Profound metabolic, functional, and cytolytic differences characterize HIV-specific CD8 T cells in primary and chronic HIV infection.</a> Blood. 120, 3466-3477 (2012).</li>
<li>Hildemann, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Efficiency+of+Antiviral+CD4%28%2B%29+Killer+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High Efficiency of Antiviral CD4(+) Killer T Cells.</a> PLoS One. 8, (2013).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

此处所述的检测方法可用于量化CD8+ T细胞的主要功能：细胞毒活性。在表征CD8+ T细胞效应功能时，准确测量该功能至关重要，因为既往研究报道，抗原特异性CD8+ T细胞的细胞毒活性与其细胞因子分泌之间存在不一致性。10,11由于共培养孵育时间较短（6小时）且使用自体靶细胞，靶细胞的非特异性杀伤率较低。因此，该检测方法具有高度特异性和可靠性。该检测方法还可轻松修改以分析不同的细胞亚群。效应CD8+ T细胞可替换为其他细胞类型，例如CD4+ T细胞，正如近期文献所述 体内 杀伤实验12靶向的CD4+ T细胞也可替换为其他细胞类型，正如我们此前描述的，可使用自体B细胞作为靶细胞8在此系统中，抗原的来源也可被替换。例如，靶细胞可通过病毒感染，而非使用肽段致敏。本方案提供了一种准确定量抗原特异性CD8+ T细胞溶细胞活性的方法。由于该方法具有良好的通用性和操作简便性，检测效应细胞的杀伤能力或可更频繁地用于CD8+ T细胞功能的量化分析。

细胞溶解活性是CD8+ T细胞的主要功能，但目前仍很少被检测，因为用于此目的的检测方法繁琐且难以标准化。在表征CD8+ T细胞效应功能时，准确测量该功能至关重要，因为迄今为止尚未发现可有效预测细胞介导的细胞毒性的可靠指标1,2。本文中，我们提出一种新的功能性检测方法，用于测量抗原特异性CD8+ T细胞对靶向CD4+ T细胞的细胞毒活性。已有多种方法被开发出来，以替代传统的“金标准”——铬释放实验。本文介绍的是一种基于细胞的检测方法，能够反映整个杀伤过程，通过测量活靶细胞的死亡情况来实现。该方法源自基于流式细胞术的小鼠体内in vivo4,5和人类体外in vitro6细胞毒检测方案。在本实验方案中，使用总CD8+ T细胞群体中含有的抗原特异性CD8+ T细胞作为效应细胞，同源CD4+ T细胞作为靶细胞。通过MHCI/肽段四聚体7对感兴趣的效应性CD8+ T细胞进行计数。靶细胞的死亡率通过加载肽段与未加载肽段的CD4+ T细胞之间的比例来计算。我们先前已证明，该方法具有可重复性、高灵敏度、高特异性，且不依赖于总CD8+ T细胞群体中效应细胞的数量8。通过在共培养实验中同时对效应细胞和靶细胞进行计数，可计算出CD8+ T细胞杀伤靶细胞的内在能力，并以裂解单位表示9。

<table><tbody><tr><td>EasySep 人 CD4+ T 细胞富集试剂盒</td><td>Stem Cell</td><td>19052</td><td></td></tr><tr><td>EasySep 人 CD8+ T 细胞富集试剂盒</td><td>Stem Cell</td><td>19053</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace CFSE 细胞增殖试剂盒 - 用于流式细胞术</td><td>Invitrogen</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>Far Red LIVE/DEAD 可固定死细胞染料</td><td>Invitrogen</td><td>L10120</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700 小鼠抗人 CD3 抗体</td><td>BD</td><td>557943</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 650 抗人 CD4 抗体</td><td>Biolegend</td><td>317435</td><td></td></tr><tr><td>PerCP 抗人 CD8 抗体</td><td>Biolegend</td><td>344707</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 培养基 1x</td><td>VWR</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素 100x 溶液</td><td>Invitrogen</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清 - 金标，热灭活</td><td>PAA</td><td>A15-252</td><td></td></tr><tr><td>96 孔板；经处理；U 型底；带盖</td><td>BD Falcon</td><td>353077</td><td></td></tr><tr><td>25 ml 无菌聚苯乙烯储液槽，独立包装</td><td>USA Scientific</td><td>2321-2230</td><td></td></tr><tr><td>96 孔 U 型底，无菌 2 ml 深孔板</td><td>Thermo Scientific</td><td>275743</td><td></td></tr><tr><td>人 IL-2 (v126)，研究级</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-096</td><td></td></tr><tr><td>RoboSep 缓冲液，分离缓冲液</td><td>Stem cell</td><td>20104</td><td></td></tr><tr><td>15 ml 聚丙烯圆锥形离心管</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>14 ml 圆底管，聚丙烯材质</td><td>BD Falcon</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>The Big Easy EasySep 磁力架</td><td>Stem cell</td><td>18001</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1x</td><td>VWR</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>96 孔 V 型底板，带盖</td><td>Fisher</td><td>12-565-481</td><td></td></tr><tr><td>甲醛溶液，ACS 级试剂，37 wt % 溶于 H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252549-500ML</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml 螺口盖微量离心管，锥形</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.005</td><td></td></tr></tbody></table>

基于细胞的流式细胞术检测细胞毒活性

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

CD8+ T细胞的细胞毒活性很少被评估。本文介绍一种新的基于细胞的检测方法，用于测量抗原特异性CD8+ T细胞杀伤负载其同源肽段的CD4+ T细胞的能力。将靶向的CD4+ T细胞分为两个群体，并用两种不同浓度的CFSE进行标记。其中一个群体用目标肽段致敏（CFSE低表达），另一个群体则未致敏（CFSE高表达）。将致敏与未致敏的CD4+ T细胞按相等比例混合后，与不同数量的纯化CD8+ T细胞共同孵育。在与含有抗原特异性效应CD8+ T细胞的CD8+ T细胞共培养后，通过流式细胞术分析自体靶向CD4+ T细胞的特异性杀伤情况，其中抗原特异性效应CD8+ T细胞通过肽段/MHCI四聚体染色进行鉴定。通过在不同效应细胞与靶细胞比例下测定靶向CD4+ T细胞的特异性裂解程度，可计算出溶细胞单位LU30/106细胞。该检测方法简单直接，能够准确测量CD8+ T细胞杀伤靶向CD4+ T细胞的内在能力。

图1中的示意图总结了该检测方法。将纯化的CD8+ T细胞（效应细胞）重悬于450 µl完全RPMI培养基中，并通过将225 µl CD8+ T细胞加入含有225 µl培养基的下一试管中进行系列稀释（上图）。对纯化的CD4+ T细胞（靶细胞）进行计数后，分装至两个试管中，并按照方案所述用两种不同浓度的CFSE（高浓度和低浓度）进行染色。CFSE低染的CD4+ T细胞用目标肽段进行刺激，而CFSE高染的CD4+ T细胞则不加肽段作为对照。将CFSE高染和CFSE低染的CD4+ T细胞均重悬至2 × 105/ml，并以1:1的比例混合（下图）。每孔加入100 µl混合的CD4+ T细胞。使用三孔仅含混合CD4+ T细胞的样本作为CD4+ T细胞单独培养的三复孔（红色孔）。将每种CD8+ T细胞稀释液各100 µl以双复孔形式加入其余含有混合CD4+ T细胞的孔中（绿色孔）。共培养6小时后，通过流式细胞术评估靶细胞的杀伤情况。
孵育后，细胞的分析和设门方法如图2所示。从一个较小的FSC-A/SSC-A...

本方案描述了一种灵敏的基于细胞的细胞毒性检测方法。通过计数在效应CD8+ T细胞数量递增的情况下，存活的靶CD4+ T细胞频率的减少，该检测可直接评估抗原特异性CD8+ T细胞的溶细胞活性。

CD8+ T 细胞的细胞毒性活性很少被评估。本文介绍一种新的基于细胞的检测方法，用于测量抗原特异性 CD8+ T 细胞的功能能力……

本实验的总体目标是利用基于细胞的流式细胞术检测方法，测定抗原特异性CD8+ T细胞的细胞毒性活性。首先，在含有目标肽段的条件下，将效应CD8+ T细胞扩增培养6天；第二步，用目标肽段刺激靶CD4+ T细胞，然后与未刺激的CD4+ T细胞混合；接下来，将效应CD8+ T细胞与靶CD4+ T细胞在不同效靶比条件下共培养6小时。最后一步中，通过流式细胞术定量分析加载了肽段的靶向 CD4 T 细胞的杀伤情况以及效应 CD8 T 细胞的数量。最终，可计算出抗原特异性 CD8 T 细胞以裂解单位表示的内在杀伤能力。该技术相较于传统的铬释放试验的主要优势在于，该方法使用自体原代靶细胞，而非永生化细胞系，并更接近真实的靶细胞。该方法可在单细胞水平上对效应细胞数量进行定量。接下来，我实验室的研究助理将演示分离CD8阳性效应细胞的操作步骤。首先，在37摄氏度水浴中复苏自体冷冻保存的外周血单个核细胞（PBMC），然后用最多50毫升完全培养基洗涤细胞。计数后，将PBMC用完全培养基稀释至浓度为每毫升500万个细胞，然后向培养物中加入IL-2和目标肽段。接着，将1毫升细胞悬液接种至96孔板的每个孔中。培养3天后，更换一半上清液为新鲜的完全培养基。培养6天后，使用多通道移液器将细胞转移至无菌储液槽中，然后进行细胞计数和洗涤。将沉淀重悬于分离缓冲液中，调整细胞密度为每毫升5000万个细胞，在14毫升圆底试管中加入人CD8阳性T细胞富集混合液，每毫升细胞加入50微升，室温孵育。10分钟后，加入抗CD8 IgG偶联磁性颗粒，每毫升细胞加入150微升，继续孵育5分钟，随后用额外的分离缓冲液将细胞悬液体积补至7毫升。5分钟后，将试管放入分离磁铁中，在试管仍置于磁铁中的情况下，将细胞悬液倒入15毫升锥形管中。接下来，取少量细胞 aliquot 用含2% FBS的PBS缓冲液稀释，加入抗CD3和抗CD8抗体，4°C避光孵育30分钟。通过流式细胞术确认细胞纯度达到95%以上CD8阳性。现在向五个螺口管中各加入225微升完全培养基，然后将细胞按1:2至1:32进行系列稀释。为分离CD4阳性目标细胞，首先在37摄氏度水浴中解冻自体冷冻保存的外周血单个核细胞（PBMC）。将解冻的细胞转移至含有10毫升培养基的50毫升锥形管中。通过磁性微粒分离法富集表达CD4的T细胞，方法如前所述，并通过流式细胞术确认CD4阳性T细胞纯度达到95%或更高。细胞计数后，将其分装至两个15毫升锥形管中，用预热的PBS洗涤，然后重悬于PBS中，浓度为每毫升2000万个细胞。在确保细胞避光的条件下，将一半的CD4阳性T细胞与新配制的CFSE高工作液孵育，终浓度为0.2毫摩尔，另一半与新配制的CFSE低工作液孵育，终浓度为0.04毫摩尔，在37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育15分钟。染色结束后，离心收集细胞，并将细胞沉淀重悬于1毫升预

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科研

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Immunology and Infection

免疫学与感染

基于细胞的流式细胞仪检测，以测量细胞毒活性

一种体外检测细胞因子诱导杀伤细胞细胞毒性的实验方法

本视频展示了自然杀伤细胞对荧光标记靶细胞的裂解活性。该方法通过染色死亡细胞，并利用流式细胞仪定量活细胞和死细胞，从而实现自然杀伤细胞介导的细胞毒性的检测。...

自然杀伤细胞介导的细胞毒作用检测样本制备用于流式细胞术分析

本视频展示了由预先激活的效应T细胞诱导癌细胞的凋亡检测实验。通过将这些细胞与带有荧光标记细胞核的癌细胞共培养，并加入可被caspase切割的荧光底物。发生凋亡的癌细胞其细胞核将呈现不同的荧光颜色，从而产生双荧光信号。该双荧光信号表明癌细胞正在经历凋亡过程。...

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