Name: 在急性肝衰竭异位辅助性大鼠肝移植流量调节门静脉动脉 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: 学习异位辅助性大鼠肝移植技术，通过门静脉动脉化调节血流以支持急性肝衰竭治疗。该方法利用标准化支架实现可控灌注，为研究肝再生和移植功能提供可靠模型。

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本研究由德国研究基金会（“Deutsche Forschungsgemeinschaft”，DFG）资助。K. Schleimer 获得了北莱茵-威斯特法伦州科学与研究部的莉泽·迈特纳奖学金支持。我们谨向 Mary-Joan Blümich 女士致以诚挚感谢，感谢她提供的出色编辑协助。Maria Kokozidou 博士的研究经费来自 Fresenius 2011_A61。

1. 实验动物
<ol>
	<li>根据动物保护FELASA指南（K 40, 17/99），为将要开展的所有实验获取当地伦理委员会的批准。</li>
	<li>使用可从任何商业供应商处购买的雄性Lewis大鼠（例如， Charles River Wiga GmbH，德国苏尔茨费尔德）。本研究共使用224只动物（112只供体，112只受体）进行112次移植手术。受体动物于术后6周被处死。手术时动物体重应为250–350 g。</li>
	<li>将动物饲养于温湿度可控的房间内，自由摄食和饮水。</li>
</ol>
2. 麻醉与手术准备
<ol>
	<li>将大鼠置于连接麻醉机的有机玻璃箱中，氧气流速为 1 L/min，异氟烷蒸发器设置为 5% 麻醉气体以诱导麻醉。维持麻醉时使用 1.5% 异氟烷。</li>
	<li>将大鼠仰卧位放置于加热板上。</li>
	<li>使用脱毛膏去除腹部毛发。</li>
	<li>按以下步骤准备无菌手术区域：使用消毒剂清洁操作台面；对手术切口部位的消毒，先使用氯己定，再用酒精，最后使用擦洗液（e.g., 含氯己定和 70% 异丙醇的溶液）。穿戴一次性手术衣和手术手套。</li>
	<li>使用无菌显微外科器械。</li>
	<li>使用手术显微镜，放大倍数为 12–20 倍。</li>
</ol>
3. 手术操作
<ol>
	<li>供体手术 
	 
	准备
	<ol>
		<li>行正中腹切口，按照 Higgins 描述的方法切除移植用的左外侧叶和正中叶。14</li>
		<li>随后准备肝十二指肠韧带。首先结扎胆管以诱导小胆管充血和扩张。然后结扎并横断胃十二指肠静脉和动脉。之后分离腹腔干和肝总动脉，并横断胃左动脉和脾动脉。切开充血的胆管，将一根 20 号支架置入其中。支架的位置必须确保整个肝门部胆管系统能够引流通畅。在支架远端横断胆管。</li>
		<li>分离下腔静脉的膈下段，位置位于右肾静脉上方。 
		 
		灌注</li>
		<li>在腹腔干上方结扎腹主动脉后，夹闭门静脉并切开。将灌注导管（14 G）插入门静脉，用 30 ml 组氨酸-色氨酸-酮戊二酸（HTK）溶液（12 cm H2O，4°C）进行灌注。</li>
		<li>切开膈肌和肝上段下腔静脉，以便灌注液流出。</li>
		<li>连同主动脉补片一并切除腹腔干，并用组氨酸-色氨酸-酮戊二酸溶液冲洗。 
		 
		摘取</li>
		<li>在右肾静脉上方横断下腔静脉的膈下段。</li>
		<li>然后，在门静脉内放置一根直径为 0.3 mm 的支架，并用结扎线固定。在接下来的手术中，通过右肾动脉实现门静脉的动脉化。在支架远端横断门静脉。</li>
		<li>结扎肝上段下腔静脉后，连同膈肌袖状组织一并横断。</li>
		<li>摘取移植肝并将其置于盛有组氨酸-色氨酸-酮戊二酸（HTK）溶液的塑料袋中，冰上保存，温度为 4 °C。在膈下段下腔静脉处放置角缝线（8-0 Ethilon）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>受体手术
	<ol>
		<li>行正中腹切口，暴露受体的膈下段下腔静脉。然后分离右肾动脉和输尿管，结扎输尿管并予以横断。在右肾动脉起始处夹闭该动脉，随后结扎右肾静脉。在结扎并横断双侧肾血管后，行肾切除术。随后缩短右肾动脉，并用肝素盐水溶液（每毫升生理盐水含 40 IU 肝素）冲洗。</li>
		<li>在膈下段下腔静脉近端和远端夹闭后，于结扎线近端横断右肾静脉，从而在膈下段下腔静脉形成椭圆形管腔。用肝素盐水溶液冲洗下腔静脉。将移植肝植入受体腹部右侧肾区。</li>
		<li>用 8-0 Ethilon 连续缝合线将供体的膈下段下腔静脉与受体的下腔静脉行端侧吻合。</li>
		<li>用肝素/生理盐水溶液冲洗后，将门静脉内的支架置入右肾动脉内（图 3）。用两针缝线（8-0 Ethilon）连接门静脉与肾动脉。用结扎线（黑色编织丝线 7-0）将连接用支架固定于肾动脉内。</li>
		<li>为实现再灌注，首先移除动脉夹，然后移除两枚静脉夹（图 4）。</li>
		<li>准备肾下腹主动脉，放置近端和远端微血管夹，并在两夹之间正中切开腹主动脉。利用主动脉补片，用 10-0 Ethilon 连续缝合线在腹主动脉与供体腹腔干之间行端侧吻合。</li>
		<li>将胆管插入十二指肠：在十二指肠壁上行荷包缝合，在荷包缝合中心处做一小切口。将带支架的胆管插入十二指肠内，收紧荷包缝合线。最后，用两针缝线（8-0 Ethilon）将十二指肠与胆管紧密固定（图 5）。</li>
		<li>随后行原位肝的次全切除术，该方法最早由 Emond et al. 描述，用于模拟急性肝功能衰竭。7</li>
		<li>用 4-0 Vicryl 缝线将移植肝的肝上段下腔静脉连同膈肌袖状组织固定于受体侧腹壁。用生理盐水冲洗腹腔（图 6）。</li>
		<li>肌肉层采用 4-0 Vicryl 连续缝合，皮肤层采用 3-0 Vicryl 连续缝合。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 恢复与术后管理
<ol>
	<li>在红外线加热灯下让动物从麻醉中恢复。</li>
	<li>皮下注射布托啡诺，剂量为0.03–0.05 mg/kg体重，每8–12小时一次&#160;2天。</li>
	<li>观察动物的一般状况以及疾病或感染的迹象。</li>
</ol>
5. 初始原位肝脏重量的计算
以如下方法计算初始的正常肝脏重量：从完整肝脏重量中减去被切除的肝叶重量（完整肝脏重量为体重的2.66%（该数值的标准差为±0.49%，基于先前使用同品系、同龄动物共80只的实验结果得出））。15

<ol><li>Boudjema, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+for+fulminant+and+subfulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation for fulminant and subfulminant hepatic failure.</a> Transplantation. 59, 218-223 (1995).</li>
<li>Boudjema, K., Jaeck, D., Siméoni, U., Bientz, J., Chenard, M. P., Brunot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+auxiliary+liver+transplantation+for+subacute+liver+failure+in+a+child%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Temporary auxiliary liver transplantation for subacute liver failure in a child.</a> The Lancet. 342, 778-779 (1993).</li>
<li>Chenard-Neu, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation%3A+Regeneration+of+the+native+liver+and+outcome+in+30+patients+with+fulminant+hepatic+failure+-+a+multicenter+European+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation: Regeneration of the native liver and outcome in 30 patients with fulminant hepatic failure - a multicenter European study.</a> Hepatology. 23, 1119-1127 (1996).</li>
<li>Gubernatis, G., Pichlmayr, R., Kemnitz, J., Gratz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver%E2%80%93transplantation+%28APOLT%29+for+fulminant+hepatic+failure%3A+first+successful+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver–transplantation (APOLT) for fulminant hepatic failure: first successful case report.</a> World J Surg. 15, 660-666 (1991).</li>
<li>Erhard, J., Lange, R., Giebler, R., Rauen, U., de Groot, H., Eigler, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterialization+of+the+portal+vein+in+orthotopic+and+auxiliary+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Arterialization of the portal vein in orthotopic and auxiliary liver transplantation.</a> Transplantation. 60, 877-879 (1995).</li>
<li>Erhard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+arterialization+of+the+portal+vein+for+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with arterialization of the portal vein for acute hepatic failure.</a> Transpl Int. 11, 266-271 (1998).</li>
<li>Emond, J., Capron-Laudereau, M., Meriggi, F., Bernuau, J., Reynes, M., Houssin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extent+of+Hepatectomy+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Extent of Hepatectomy in the rat.</a> Eur Surg Res. 21, 251-259 (1989).</li>
<li>Mas, A., Rode`s, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure.</a> Lancet. 349, 1081-1085 (1997).</li>
<li>Terpstra, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+grafting%3A+a+new+concept+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver grafting: a new concept in liver transplantation.</a> The Lancet. 342, 758(1993).</li>
<li>Terpstra, O. T., Reuvers, C. B., Schalm, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+heterotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary heterotopic liver transplantation.</a> Transplantation. 45, 1003-1007 (1988).</li>
<li>Schleimer, K., Lange, R., Rauen, U., Erhard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+acute+liver+failure+in+the+rat+-+an+illustrated+description+of+a+new+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in acute liver failure in the rat - an illustrated description of a new surgical approach.</a> Langenbecks Arch Surg. 384 (2), 204-208 (1999).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+microcirculation+of+the+heterotopically+transplanted+rat+liver+with+portal+vein+arterialization+depending+on+optimal+stent+diameter%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Physiologic microcirculation of the heterotopically transplanted rat liver with portal vein arterialization depending on optimal stent diameter.</a> Med Sci Monit. 28 (BR140-145), (2006).</li>
<li>Hong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+portal+arterialization+with+auxiliary+liver+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hiroshima+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Study of portal arterialization with auxiliary liver in rats.</a> Hiroshima J. Med. Sci. 40, 29-33 (1991).</li>
<li>Higgins, G. M., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver.+I--Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Path%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver. I--Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Path. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+offers+a+successful+therapeutic+option+in+acute+hepatic+failure--investigations+in+heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation.</a> Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).</li>
<li>Lee, S., Edgington, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Forum%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the rat.</a> Surg. Forum. 17, 220-222 (1966).</li>
<li>Hess, F., Willemen, A., Jerusalem, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+the+rat%2C+influence+of+the+condition+of+the+recipient%27s+liver+on+the+fate+of+the+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in the rat, influence of the condition of the recipient's liver on the fate of the graft.</a> Eur. Surg. Res. 9, 270-279 (1977).</li>
<li>Aguirrezabalaga, J., Arnal, F., Marini, M., Centeno, A., Fernandez-Selles, C., Rey, I., Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+portal+arterialization+in+the+rat%3A+description+of+a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with portal arterialization in the rat: description of a new model.</a> Microsurgery. 22, 21-26 (2002).</li>
<li>Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+treatment+of+acute+liver+failure+in+a+new+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model.</a> Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+microcirculation+of+a+liver+graft+by+controlled+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization.</a> J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+hyperperfusion+causes+disturbance+of+microcirculation+and+increased+rate+of+hepatocellular+apoptosis%3A+investigations+in+heterotopic+rat+liver+transplantation+with+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization.</a> Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).</li>
</ol>

所有作者均声明无竞争利益。

1966年，Lee et al.16 首次描述了异位辅助性大鼠肝移植，随后由Hess17 进一步开展。移植物的门静脉与受体的门静脉进行吻合。在此手术过程中，受体自身肝脏的门静脉血供会受到影响。
1991年，Hong通过受体的髂动脉使用PVA进行HALT13，由于未调控血流，导致门静脉和窦状隙出现严重充血。
此外，Aguirrezabalaga 等 采用PVA进行了HALT，但未充分关注动脉化门静脉中的血流调节。18
使用内径为 0.3 mm、长度为 8 mm 的支架，可在动脉化门静脉再灌注后获得处于生理范围上限的平均门静脉血流量。12
胆道引流是肝移植的薄弱环节。受体动物可能因胆汁渗漏和腹膜炎而面临死亡危险。为此，我们采用支架进行胆总管-十二指肠吻合术。此外，我们还使用荷包...

急性肝衰竭在临床医学中是一个严重问题，其死亡率高达60-80%。8 在急性肝衰竭中，辅助性肝移植是一种有前景的替代疗法，可用于度过急性期。保留受体自身肝脏以促使其再生，待再生完成后可停用免疫抑制药物，从而使移植物逐渐萎缩。然而，辅助性肝移植的手术技术仍存在争议。1-3 在此背景下，Terpstra 报道了移植物空间不足、门静脉窃血现象以及静脉淤血和引流困难等问题。9-10 供体门静脉以端侧吻合方式连接至受体门静脉，这会导致移植物与原肝之间的门静脉血流竞争，并引发门静脉血栓形成。大多数此类技术问题可通过采用APOLT法（辅助肝段原位植入）加以避免。4 然而该方法需要对受体原肝和移植物进行广泛切除。4 1998年，Erhard 及其团队开发了异位辅助性肝移植（HALT）技术，并结合使用门静脉动脉化（PVA）（图1）。该方法保留了受体原肝的肝门结构和门静脉，从而避免了门静脉血栓形成和门静脉窃血现象等不良副作用，有利于原肝的再生恢复。此外，该方法无需对受体原肝或移植物进行大范围肝切除，因此术中出血更少，且可保留更多的总肝实质质量，以支持过渡期（移植物）和再生过程（原肝）。该技术已显示出良好的初步临床效果。5-6 本实验研究的目标是在大鼠模型中建立一种用于科研目的的、结合门静脉动脉化的HALT技术（图2）。在前期实验中，我们未考虑对动脉化的门静脉血流进行调控，结果再灌注后出现移植物淤血及肝包膜大量出血。11&#160; 此后，我们通过使用内径0.3 mm、长度8 mm的支架来调控动脉化门静脉的血流量。预实验表明，0.3 mm直径的支架可使动脉化门静脉内的平均血流量维持在生理范围的上限水平（1.7 ± 0.4 ml/min/g肝重）。12&#160; 我们在未调控血流情况下的结果与Hong的研究一致，后者通过受体髂动脉实施了PVA途径的HALT。13 在其未调控血流的实验中，也出现了严重的门静脉和窦状隙淤血。
本视频旨在逐步演示大鼠中一种新的实验性外科技术。从长远来看，该技术可用于肝脏再生、肝间竞争、门静脉动脉化、门静脉高灌注以及门静脉血流调节的相关研究。

<table><tbody><tr><td>编织丝线黑色 7-0&amp;nbsp;</td><td>Ethicon 产品</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Ethicon 产品</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Ethicon 产品</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8-0</td><td>Ethicon 产品</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10-0</td><td>Ethicon 产品</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix 安全型 14G</td><td>B Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix 安全型 20G</td><td>B Braun</td><td>2758818</td><td></td></tr><tr><td>2 French（0.012&amp;rdquo;/0.3 mm 内径 × 0.025&amp;rdquo;/0.6 mm 外径）× 24&amp;rdquo;/60 cm 聚氨酯导管</td><td>Access Technologies，Norfolk Medical, Inc. 的分支机构，伊利诺伊州，美国</td><td>CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK 溶液，Custodiol</td><td>Dr. Franz K&amp;ouml;hler Chemie GmbH，Alsbach-H&amp;auml;nlein，德国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>异氟烷 5%</td><td></td><td></td><td>任意通用品牌</td></tr><tr><td>肝素</td><td></td><td></td><td>任意通用品牌</td></tr><tr><td>0.9% 生理盐水</td><td></td><td></td><td>任意通用品牌</td></tr><tr><td>丁丙诺啡</td><td></td><td></td><td>任意通用品牌</td></tr></tbody></table>

急性肝衰竭中带门静脉动脉化流量调节的异位辅助性大鼠肝移植

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

在急性肝衰竭中，辅助性肝移植是一种颇具吸引力的替代治疗方案。其目的是在功能衰竭的原位肝脏再生之前提供暂时性支持1-3。APOLT 方法，即辅助肝段的原位植入，可避免大多数技术难题。但该方法需要对原位肝脏和移植肝组织进行广泛切除4。1998年，Erhard 开创了利用门静脉动脉化（PVA）的异位辅助性肝移植（HALT）技术（图1）。该技术在早期临床应用中显示出良好的效果5-6。我们建立了一种在大鼠中采用血流调控型门静脉动脉化（PVA）的 HALT 技术，以研究血流调控型 PVA 对移植肝组织形态和功能的影响（图2）。
将肝脏移植物缩小至其原始体积的30%，在切除受体右肾后，异位植入受体的右肾区。&#160; 移植物的肝下腔静脉与受体的肝下腔静脉进行吻合。通过受体的右肾动脉，采用支架技术对供体门静脉进行动脉化。使用内径为0.3 mm的支架实现动脉化门静脉的血流调节。移植物的腹腔干以端侧吻合方式连接至受体的腹主动脉，胆管则植入十二指肠。对受体自身肝脏行次全切除术以诱导急性肝功能衰竭。 7
采用该方法共进行了112例移植手术。围手术期存活率为90%，术后6周存活率为80%。术后6周，受体自身肝脏再生，重量由2.3±0.8 g增加至9.8±1 g；而移植肝的重量则由3.3±0.8 g减少至2.3±0.8 g。
在移植物形态和功能方面，我们获得了令人鼓舞的长期结果。采用流量调节型PVA的HALT可有效桥接急性肝衰竭，直至患者自身肝脏再生。

移植手术的平均持续时间约为150分钟。冷缺血时间为64 ± 7分钟，热缺血时间少于25分钟。
围手术期存活率为90%，6周存活率为80%。20%的死亡病例中，有4例动物在术后第一周因支架移位和胆汁泄漏导致腹膜炎而死亡，另有7例动物在随后的五周内因肺炎、腹腔脓肿和肠梗阻而死亡。存活的动物总体状况良好。
术后六周，肝脏合成功能指标（Quick值：110 ± 7.8%，AT III：104 ± 6%）均在正常范围内。
在此时间点，原位肝脏已再生，重量从 2.3±0.8 g 增加至 9.8±1 g（P：0.0065）。移植物的重量则从 3.3±0.8 g 减少至 2.3±0.8 g（P：0.06）。两部分肝脏的总重量处于肝脏重量/体重的生理比例范围内（图 7）。
HALT术后6周，移植物的苏木精-伊红组织学染色显示肝细胞结构正常，无水肿或脂肪变性（图8）。所...

辅助性肝移植可在急性肝衰竭时提供临时支持，直至衰竭肝脏再生。异位辅助性肝移植（HALT）联合门静脉动脉化（PVA）可提供充分的肝功能。我们建立了大鼠的类似技术，以研究门静脉动脉化对移植物形态和功能的影响。

在急性肝衰竭中，辅助性肝移植是一种颇具前景的替代方案。其目的是在...之前提供临时支持

急性肝衰竭在临床医学中是一种严重问题，其死亡率在急性肝衰竭患者中高达60%至80%。辅助性肝移植是一种有前景的替代疗法。在受体自身肝脏再生后，可停用免疫抑制剂，移植的肝脏移植物可被切除或任其萎缩。然而，辅助性肝移植的手术技术仍存在争议。APOL 方法即异位植入辅助性肝段，可避免大多数可能出现的技术问题。然而，该方法需要对受体肝脏和供体肝脏进行大范围切除。1998年，Erhart 及其团队开创了异位辅助性肝移植技术，称为 halt。该技术通过将门静脉动脉化（称为 PVA）实现，并显示出良好的初期临床效果。我们已为研究目的开发了一种在大鼠中采用血流调控门静脉动脉化的 halt 技术。本视频详细展示了这一新的实验技术，共对224只体重为250至350克的雄性 Lewis 大鼠进行了手术操作。供体和受体手术均在吸入麻醉下进行。通过将动物置于与麻醉机相连的有机玻璃箱中，以每分钟一升的氧气流速和5%浓度的氟烷进行麻醉诱导。麻醉维持在1.5%。所有实验均获得当地伦理委员会批准，并按照动物保护phia指南进行。在接下来的操作中，通过右肾动脉实现门静脉动脉化。门静脉动脉化后的血流由内径为0.3毫米、长度为8毫米的支架进行调控。预实验表明，直径0.3毫米的支架可使门静脉动脉化后的平均血流量达到生理范围的上限水平。通过OPS成像技术可视化肝微循环，这是一种反射光谱技术，可在体内实时观察肝微循环。在不使用对比剂且以生理盐水浸润的条件下，将探头轻柔地放置于右肝叶表面。此时应注意避免压迫肝实质。首先通过正中腹切口进行供体手术操作。按照 Higgins 描述的方法，切除移植体的左外侧叶和正中叶。此处显示的是肝十二指肠韧带的制备过程。首先结扎胆管，以诱导小胆管的充血和扩张。结扎并横断胃十二指肠静脉及动脉。随后分离肝总动脉干（CIC trunk）、肝总动脉、左胃动脉和脾动脉。横断胃左动脉和脾动脉。此处可见肝总动脉干，此处为肝总动脉。切开淤血的胆管，并将一根20号支架置入其中。支架的放置位置必须确保整个肝门部胆管系统的引流。在支架远端横断胆管。在右肾静脉上方分离下腔静脉的肝下段。此处可见完成制备后的肝脏，腹腔干上方的主动脉已完成结扎。门静脉被夹闭并切开，灌注导管现已插入，并使用30毫升组氨酸-色氨酸-酮戊二酸溶液进行灌注。切断膈肌和肝下腔静脉，以使灌注液流出。连同主动脉瓣补片一起切除腔静脉干，并用组氨酸-色氨酸-酮戊二酸溶液冲洗。在右肾静脉正上方横断肝下腔静脉。然后将直径为0.3毫米的支架置入门静脉，并用结扎线固定。在支架远端横断门静脉。此处可见胆管、门静脉、腹腔干以及肝下下腔静脉。结扎肝上腔静脉后，连同部分膈肌袖状组织一并横断。移植物被取出后置于冰袋内的塑料袋中，保存于4°C的组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐溶液中。在肝下腔静脉断端缝置缝线。接下来演示受体手术操作。开腹并完成准备后，首先分离肝下腔静脉和右肾动脉。随后结扎并切断输尿管。在夹闭右肾动脉起始处后，结扎右肾静脉。随后，在离断双侧肾血管后，进行肾切除术。接着，在肝下腔静脉近端和远端夹闭后，将右肾动脉缩短并用肝素生理盐水冲洗。右肾静脉在结扎线近端被离断。通过这种方式，在肝下腔静脉中形成一个椭圆形管腔。将移植物置于受体肝脏下方。将供体的肝下腔静脉与受体的腔静脉行端侧吻合，使用8-0聚丙烯连续缝合线进行缝合。用肝素生理盐水冲洗后，将门静脉内的支架引入右肾动脉。以两针缝合连接门静脉与肾动脉。使用内径为0.3毫米、长度为8毫米的支架，可实现具有标准化流量调节流入速率的动静脉吻合。用结扎线将连接支架固定在肾动脉中以实现再灌注。首先移除动脉夹，随后移除两把静脉夹。此时可见再灌注瞬间的微循环，血流从肾小叶间血管开始，沿血窦延伸，最终到达肝小叶的中央静脉。此时可见再灌注的移植物、动脉化的门静脉以及胆管。已显露并阻断腹下主动脉，切开后，使用主动脉补片以10-0聚乙二醇连续缝合线在腹主动脉与腹腔干之间行端侧吻合术。在完成荷包缝合后，于十二指肠壁上做一个小切口。然后将带有支架的胆管引入十二指肠，收紧荷包缝合线。最后，用两针将十二指肠与胆管紧密固定在一起。此处可见再灌注的移植肝以及为模拟急性肝衰竭而次全切除的受体肝脏。术后动物每8至12小时皮下注射一次布托啡诺，持续两天。围手术期存活率为90%，六周存活率为80%。术后第一周内，4只大鼠因支架移位及胆汁泄漏导致腹膜炎而死亡；此外，另有7只大鼠死于肺炎、腹腔脓肿或肠梗阻。存活的大鼠总体健康状况良好。术后六周，肝脏合成功能指标处于正常范围内。此处显示的是大鼠异位辅助性肝移植联合门静脉动脉化术后六周的科研人员观察结果。术后六周，受体自身肝脏再生，重量从 2.3 ± 0.8 克增加至 9.8 ± 1 克。此时，GRAT组织已萎缩，肝脏重量从3.3±0.8克减少至2.3±0.8克。双侧肝脏总重量仍处于停药后六周经苏木精-伊红染色显示的肝重与体重生理比值范围内。组织病理学检查可见正常肝细胞，未见水肿或脂肪变性。所有图像均显示由于淤泥形成导致胆汁轻度增生、胆管扩张以及胆管炎。仅在两张图像中可观察到低级别的间质性CTUs肝细胞坏死。使用内径为0.3毫米、长度为8毫米的支架，可在动脉化门静脉再灌注后获得处于生理上限范围内的平均门静脉血流量。胆道引流是肝移植的薄弱环节。在大鼠肝移植中，受体常因胆汁泄漏和腹膜炎而在术后最初几天内死亡。我们采用支架、连续缝合以及另外两针加固缝合来进行结肠造口术，以防止泄漏和脱管。通过该技术，胆道并发症的发生率降低至4%。在本研究中，对天然肝脏进行了次全切除。我们采用的是由Amond首次描述的方法来诱导急性肝衰竭。与使用肝毒性物质不同，该方法具有标准化操作流程，且对其他器官系统或移植物无任何不良影响。与原位肝移植不同，异位肝移植没有终末肝期。在异位肝移植过程中，血管吻合（Anas）可以不受时间限制地进行。此外，在异位位置，不会受到移动膈肌的干扰。此外，受体的门静脉不进行夹闭，从而避免了小肠、脾脏、胰腺和胃的静脉淤血。采用该技术，我们在移植物的长期存活、形态学及功能方面获得了令人满意的成果，实现了血流调控门静脉的异位辅助性大鼠肝移植。门静脉动脉化是一种创新性技术，操作陷阱少且易于掌握。该技术适用于研究门静脉、肝动脉高灌注及血流调节对肝脏微循环功能和形态的影响。该模型为肝脏再生及肝内竞争相关研究提供了可能。

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急性肝衰竭中带门静脉动脉化流量调节的异位辅助性大鼠肝移植

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