Differential Labeling of Cell-surface and Internalized Proteins after Antibody Feeding of Live Cultured Neurons

Nissa L. Carrodus; Kathleen Sue-Lyn Teng; Kathryn M. Munro; Matthew J. Kennedy; Jenny M. Gunnersen

doi:10.3791/51139

JoVE Journal
Neuroscience

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Neuroscience

Differential Labeling of Cell-surface and Internalized Proteins after Antibody Feeding of Live Cultured Neurons

细胞表面和内蛋白质的现场培养神经细胞的抗体后喂养差异化标记

Full Text

16,140 Views

11:56 min

February 12, 2014

DOI: 10.3791/51139-v

Nissa L. Carrodus*¹, Kathleen Sue-Lyn Teng*¹, Kathryn M. Munro¹, Matthew J. Kennedy², Jenny M. Gunnersen^1,3

¹Department of Anatomy & Neuroscience,The University of Melbourne, ²Department of Neurobiology,Duke University Medical Center, ³Florey Institute of Neuroscience & Mental Health,The University of Melbourne

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

我们描述了一种方法，以使用特定的多克隆抗体对表位的细胞外活神经元的表面上的标记蛋白。蛋白结合的抗体在细胞表面上，并随后通过胞吞作用内在化可以从蛋白质上残留进行区分，或在培养过程中贩卖到，该表面。

该程序的总体目标是标记活神经元表面的蛋白质，并随后使用差异二抗标记区分表面蛋白和内化蛋白质。为此，将盖玻片上培养的原代神经元与针对表面表位的抗体一起孵育，并孵育以进行内化。孵育后，应用荧光标记的二抗以鉴定表面暴露的蛋白质。

然后应用过量的未标记二抗以阻断任何残留的表面蛋白一抗复合物。然后对培养的神经元进行渗透，并应用不同颜色的二抗来检测内化的蛋白质。最终，可以通过免疫荧光显微镜获得显示内化蛋白与表面蛋白的相对水平的结果。

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

神经科学第84 双色荧光免疫细胞化学贩运内吞作用循环内涵体神经元