March 20th, 2014
在接下来的实验中,我们描述了一个协议,用于在小鼠体内微量恐惧条件。这种类型的联想记忆,包括分隔中性刺激和非条件刺激一丝时期。
以下实验的总体目标是通过使用痕量球体条件反射来评估小鼠的海马依赖性学习和记忆。这是通过首先训练动物将听觉音调与厌恶刺激联系起来来实现的。第二天,将动物置于新环境中,并记录对音调的反应性冻结行为。
第三天,动物被返回到原始环境并记录冻结行为。结果表明,与未接受电击的小鼠相比,使用电击音配对训练的小鼠表现出更多的冻结行为。该方法可用于深入了解海马依赖性学习和记忆以及小鼠,并且在用于转基因和敲除动物的研究时特别有用。
以下程序在位于较大声音衰减室内的恐惧调节室中执行。在腔室门关闭位置的情况下,灯要达到所需的照明水平,如果放置正确,光照水平指示灯应关闭。使用声级计确认每个腔室内的背景噪声水平是否一致。
接下来,校准训练期间使用的音调。使用外部校准设备校准冲击水平。将一根引线放在一根杆上,再放三到四根杆。
使用电击发生器进行电击并校准,直到达到正确的水平。对每个恐惧调节室重复此步骤。准备好设备后,将受试者转移到与测试室分开的拘留室,以减少过度处理。
检测前,请在检测前至少 30 分钟或前一天为尾部贴标签。准备开始时,将测试鼠标转移到一个干净标记的笼子中,以便运输到恐惧调节室。将鼠标放入腔室,关上门并启动软件程序。
在训练的第一天,让小鼠探索腔室三分钟。然后,软件会显示第 22 个音调,然后是第 22 个迹线间隔,以轻微的脚部电击结束。观察受试者以确认他们接受了厌恶刺激。
第 202 次试验间期将 5 项预处理试验分开。试验结束后,让动物在测试室中停留一分钟,然后移出,将动物放回转移笼中并返回拘留室。如果还有其他小鼠要单独在它们的家笼中进行测试,请将小鼠安置在里面,直到所有小鼠都完成测试。
用 30% 异丙醇清洁测试室,为下一只动物做准备。重复这些步骤,直到所有小鼠都得到训练。将所有小鼠放回它们的蚁群房间。
在第二天对队列中的最后一只小鼠进行检测后,对动物进行测试。为追踪恐惧记忆。在这一天,用碎纸替换转运笼的垫料以改变其环境。
房间的上下文也发生了变化。将泡沫板放在地板上的透明丙烯酸嵌件下,以改变其纹理和外观。在测试区域内放置一个亚克力隔板。
通过将香草精放在地板下的乳清船中来改变气味。插入 在这一天,用 70% 乙醇而不是 30% 异丙醇清洁每只小鼠之间的腔室。准备好后,将鼠标放入测试室并启动程序。
会话以 2 分钟的基准周期开始,然后是三个 22 分音演示。每个音调呈现之间有第 222 次试验间隔。疗程结束后,将小鼠放回它们的家笼中并继续,直到所有动物都经过测试,为第二天的测试做准备。
恢复第一天使用的相同上下文。用 30% 异丙醇清洁腔室。情境条件反射在第 3 天进行。
使用与第一天相同的转移笼,从拘留室取回测试鼠标。将鼠标放在测试室中,然后启动程序以测试上下文记忆。运行一个程序以记录 8 分钟的冻结行为。
在此之后,将鼠标放回它们的家笼并继续测试,如前所述,代表性结果表明,在训练过程中,接受电击音配对的动物的冻结行为增加。在新的背景下,与在基线音调轨迹和试验间歇期内未接受电击的小鼠相比,接受厌恶性休克刺激的小鼠更加僵硬。当返回到原始环境时,接受厌恶性休克刺激的动物在 8 分钟内表现出始终较高的冻结行为。
看完这个视频,你应该对如何使用痕迹恐惧条件反射有一个很好的了解,以便了解海马依赖性学习和记忆以及小鼠。
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本实验描述了一种用于小鼠的痕迹恐惧条件反射的协议,该协议评估了海马依赖的学习和记忆。该协议涉及将听觉音调与令人不快的刺激相关联,并在不同的情境下测量小鼠的冻结行为。