Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Lesly De Arras; Brandon S. Guthrie; Scott Alper

doi:10.3791/51306

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

利用RNA干扰调查的先天免疫反应的小鼠巨噬细胞

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12:47 min

November 3, 2014

DOI: 10.3791/51306-v

Lesly De Arras¹, Brandon S. Guthrie¹, Scott Alper¹

¹Integrated Department of Immunology and Integrated Center for Genes, Environment, and Health,National Jewish Health and University of Colorado School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在该方案中，我们描述了使用 Amaxa Nucleofector 96 孔穿梭系统用 siRNA 有效转染小鼠巨噬细胞系的方法，用脂多糖刺激巨噬细胞，并监测对炎性细胞因子产生的影响。

该程序的总体目标是使用 RNA 干扰来研究候选基因对先天免疫反应的影响。在小鼠巨噬细胞中，为此，将小鼠巨噬细胞系胰蛋白酶化并与转染溶液和感兴趣的 SI RNA 混合，然后将混合物转移到 96 孔核 VETE 板中，并使用 Maxa 96 孔转染系统将 siRNA 转染到巨噬细胞中，并与细胞培养物孵育后，将培养基、LPS 或其他先天免疫激活剂应用于转染的巨噬细胞以刺激它们。最后，进行 Eliza 检测以监测细胞因子的产生并评估 siRNA 处理对先天免疫反应的影响。

与脂质体介导的转染相比，该技术的主要优点是我们的检测方法稳健，可应用于高通量专业的许多基因。这种方法的关键是处理健康细胞，温和地处理它们，并在转染过程中高效工作。正如我们将要证明的，该方案使用原始的 2 64 0.7 小鼠巨噬细胞系，其按照随附文件中所述进行培养。

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