Name: 癌症干细胞从人类前列腺癌样本隔离 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: 学习从人类前列腺癌组织中分离癌症干细胞的方法，通过组织处理、荧光抗体标记和流式细胞分选技术获取目标细胞。该方法支持异种移植和基因表达分析，助力研究肿瘤起始机制与治疗靶点。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本工作由哈里里家族基金会和TJ马特尔基金会资助。

1. 从手术标本中获取和处理人前列腺癌组织
<ol>
	<li>准备两个50&#160;ml&#160;聚苯乙烯锥形管，每管中加入15 ml&#160;含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640培养基。</li>
	<li>病理科工作人员根据经机构审查委员会批准的方案，分别从前列腺切除术和姑息性手术标本中获取原发性和转移性前列腺癌样本。转移性样本可来源于初次手术期间的淋巴结清扫、姑息性手术（如脊髓减压术）期间的椎体组织，或诊断性切除单发转移病灶时的肺组织等。
	<ol>
		<li>将无需用于临床诊断的多余大块组织收集至第1.1步中的第一个50-ml&#160;聚苯乙烯锥形管中，并立即在4 °C保存。所采集的组织面积应至少为4-5 cm2，厚度为1-2 cm。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>实验室人员对病理科提供的大块组织进行处理，以备组织学检查和制备单细胞悬液。
	<ol>
		<li>为确保细胞活性最大化，大块组织的处理应在手术切除后24 hr&#160;内完成。</li>
		<li>在生物安全柜中使用无菌手术刀和镊子，从肉眼可见的肿瘤结节中切取2-4 mm&#160;厚的水平组织切片，并立即将切片放入第1.1步中的第二个50&#160;ml&#160;聚苯乙烯锥形管中。</li>
		<li>若前列腺切除术样本中未观察到肉眼可见的结节，则从后叶和移行带随机采集2-4 mm&#160;厚的水平组织切片。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用无菌手术刀和镊子分离部分手术组织，在制备细胞悬液前将其固定于10%福尔马林中。对该材料进行归档并进行组织学分析，以确认前列腺癌组织的存在。</li>
</ol>
2. 从组织切片制备细胞悬液
<ol>
	<li>在无菌生物安全柜中操作，将一块组织样本转移至含有 1 ml&#160;无菌 1× 磷酸盐缓冲液（PBS）的 60 × 15 mm 培养皿中。
	<ol>
		<li>使用无菌手术刀和镊子对样本进行机械性吹打处理。</li>
		<li>本方案中不涉及酶消化步骤。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将 1 ml&#160;悬液转移至一个无菌的 50&#160;ml&#160;锥形离心管中。
	<ol>
		<li>向培养皿中再加入 1 ml&#160; PBS，重复吹打步骤，直至组织完全解离，通常需重复 3–4 次。</li>
		<li>依次重复此操作，直至所有组织样本均被解离。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用 5&#160;ml&#160;移液管重悬 50&#160;ml&#160;聚苯乙烯锥形离心管中的内容物，并在最大转速（约 3,200 rpm）下涡旋振荡 1 分钟。</li>
	<li>将所得悬液通过 35-μm 细胞滤网过滤，并收集至另一个无菌的 50&#160;ml&#160;聚苯乙烯锥形离心管中。</li>
	<li>在 450 × g 条件下离心 10 分钟，形成细胞沉淀。</li>
	<li>弃去上清液，用 5 ml&#160;红细胞裂解缓冲液重悬沉淀，并在室温下孵育 5 分钟&#160;。随后在室温下以 450 × g 离心 5 分钟&#160;，去除红细胞裂解缓冲液。</li>
	<li>弃去上清液，将沉淀重悬于含 5% FBS 的 1× PBS 中，使用血细胞计数板或自动细胞计数仪测定活细胞（台盼蓝阴性）数量。配制成浓度为 1×106 个细胞/ml&#160;的细胞悬液，并置于冰上保存，保存时间不超过 1 小时。
	<ol>
		<li>不同肿瘤样本之间的细胞活力和得率可能存在显著差异。在前列腺切除术样本中，细胞活力通常介于 45–70% 之间，一个肉眼可见的肿瘤结节切取五片厚度为 2–4 mm&#160;的水平组织切片，预计可获得约 3×106 个活细胞。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 用于FACS的细胞抗体染色
<ol>
	<li>按下述方式标记五个15&#160;ml&#160;聚苯乙烯圆锥形管。使用CD45和CD31抗原标记分别排除造血细胞和内皮细胞成分。
	<ol>
		<li>未染色</li>
		<li>IgG2aκ-PE + IgG1κ-FITC</li>
		<li>HLAI-PE + IgG1κ-FITC</li>
		<li>IgG2aκ-PE + CD31-FITC + CD45-FITC</li>
		<li>HLAI-PE + CD45-FITC + CD31-FITC</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将上一部分（步骤2.7）中定量的细胞悬液分装至步骤3.1中的五个试管中。按1:250稀释比例加入抗体，并将细胞悬液置于冰上孵育30分钟。</li>
	<li>在4 °C条件下，以450 × g离心3&#160;min&#160;，弃去上清液。</li>
	<li>用含10%胎牛血清（FBS）的无菌1×PBS重悬各管细胞沉淀进行洗涤，随后在4 °C条件下以450 × g离心3 min&#160;。</li>
	<li>将细胞重悬于1 ml&#160;含10 μg/ml浓度4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的1×PBS溶液中。</li>
	<li>将最终溶液经35 μm滤网帽过滤至12 mm × 75 mm聚苯乙烯管中。</li>
</ol>
4. 通过流式细胞术分离前列腺肿瘤干细胞
<ol>
	<li>使用流式细胞仪进行细胞分选。</li>
	<li>使用第1、2、3和4管中的细胞设置补偿对照。</li>
	<li>利用前向散射和侧向散射参数设置门控，排除碎片和细胞聚集体。</li>
	<li>分别使用第3管和第4管的悬液建立FITC和PE的门控。</li>
	<li>通过Pacific Blue-A通道对活细胞（DAPI阴性）进行门控。</li>
	<li>使用第5管，去除CD31阳性与CD45阳性细胞，并将HLAI阴性和HLAI阳性细胞群体分别收集至含有2 ml&#160;添加10% FBS的RPMI培养基的无菌15 ml&#160;聚苯乙烯圆锥形管中。</li>
	<li>将分选后的细胞悬液以450 × g离心5分钟，然后将沉淀重悬于200–500 μl&#160;添加10% FBS的RPMI培养基中。</li>
	<li>使用血细胞计数板或自动细胞计数仪对活细胞（台盼蓝阴性）进行定量。</li>
</ol>

<ol><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+impact%2C+heterogeneity%2C+and+uncertainty%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li>
<li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+evolving+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li>
<li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology%3A+the+devil+is+in+the+details%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li>
<li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+current+status+and+evolving+complexities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li>
<li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li>
<li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li>
<li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors%3A+the+CD44%2Balpha2beta1%2B+cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li>
<li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PSA%28-%2Flo%29+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li>
<li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2013%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li>
<li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+purified+CD44%2B+prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li>
</ol>

无利益冲突声明。

本方案描述了从新鲜的人类前列腺癌组织中分离肿瘤干细胞（CSCs）的方法。多个关键因素会影响本方案的成功实施。
高数量可存活前列腺癌细胞的回收依赖于对手术样本的细致大体评估。根据我们的经验，当观察到大体可见的肿瘤结节并对其进行处理时，最有可能成功分离出具有致瘤性的前列腺细胞10。
然而，如今源自前列腺切除术标本的主要病变常表现为多灶性和显微镜下病灶。在此类情况下，应尽可能根据先前的临床穿刺活检结果来指导样本处理，以提高获取前列腺癌细胞的几率。根据我们的经验，必须由训练有素的实验人员频繁执行该实验方案，以确保从多个临床前列腺切除术样本中成功分离出前列腺肿瘤干细胞（CSCs）。
此外，由于本文描述的是一种涉及细胞表面HLAI表达的阴性筛选方案，因此在通过FACS处理前列腺癌细胞悬液时，必须去除可能存在的HLAI阴性污染物。尤其需要注意使用红细胞裂解缓冲液以及通过DAPI染色排除非活细胞。尽管这些措施不能完全确保非前列腺癌细胞不会污染HLAI阴性细胞群，但我...

肿瘤内异质性被认为是癌症的一个标志性特征1。事实上，已有多种导致肿瘤内异质性的机制被描述，包括基因突变以及与微环境的相互作用。此外，某些癌症可能具有细胞层级结构，其中包含一群具备肿瘤起始能力和在连续移植实验中自我更新特性的癌症干细胞（CSCs）2-5。癌症干细胞最初在血液系统6、乳腺7和脑部8恶性肿瘤中被发现，随后也在前列腺癌9-12及其他类型的肿瘤中得到研究2-5。
肿瘤干细胞（CSCs）通常被认为是在异质性细胞群体中的一个细胞组分2-5。因此，对CSCs的功能和分子特征进行表征，依赖于从大量细胞群体中富集这些细胞。为此，在过去二十年中，研究人员已开发出多种CSC富集方法，通常涉及通过流式细胞术分离标记的细胞群体。此外，在CSC研究中一个重要的考虑因素是：人体组织的层级结构可能因实验操作（如体外连续传代培养或移植到免疫缺陷小鼠体内）而被破坏。因此，直接从人体组织中分离CSCs已成为CSC研究领域中一种重要的方法学策略。
前列腺癌是美国及全球癌症发病率和死亡率的主要原因之一13。因此，前列腺癌干细胞（CSCs）的分离及其生物学特性研究具有重要意义。既往已从细胞系、患者来源的异种移植模型以及低代次患者来源的悬浮培养物中富集得到前列腺癌干细胞9,10,12,14。
我们近期报道了通过HLAI阴性细胞表面表型直接从人类手术样本中分离前列腺肿瘤干细胞（CSCs）的方法10。本文详细描述了分离这些细胞所采用的操作步骤。前列腺肿瘤组织取自手术标本，并制备成单细胞悬液。随后使用针对HLAI以及间质细胞和活细胞标记物的抗体对细胞进行染色，再通过荧光激活细胞分选（FACS）技术分离出CSCs。分离得到的CSCs可用于需要活细胞的各种实验分析。

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning Cell Gro</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>60 mm，15 mm 细胞培养皿</td><td>Corning</td><td>3295</td><td></td></tr><tr><td>35 &amp;micro;m 细胞滤筛</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 圆锥形离心管</td><td>Crystalgen</td><td>23-2263</td><td></td></tr><tr><td>15 ml 圆锥形离心管</td><td>Crystalgen</td><td>23-2265</td><td></td></tr><tr><td>红细胞裂解缓冲液</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>HLA I 类分子（W6/32）PE 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab43545</td><td></td></tr><tr><td>CD31 FITC 抗体</td><td>eBioscience</td><td>11-0319-42</td><td></td></tr><tr><td>CD45 FITC 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab27287</td><td></td></tr><tr><td>IgG&lt;sub&gt;2a&lt;/sub&gt;&amp;kappa; PE 抗体</td><td>BD Pharminogen</td><td>555574</td><td></td></tr><tr><td>IgG&lt;sub&gt;1&lt;/sub&gt;&amp;kappa; FITC 抗体</td><td>BD Pharminogen</td><td>551954</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>d3571</td><td></td></tr><tr><td>带细胞滤筛帽的 12 mm × 75 mm 聚苯乙烯管</td><td>BD Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>涡旋混合器</td><td>Crystalgen</td><td>CG-BV1000</td><td></td></tr><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林</td><td>Fisher</td><td>RBBP-0480</td><td></td></tr></tbody></table>

从人前列腺癌样本中分离癌干细胞

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

在过去二十年中，癌症干细胞（CSC）模型得到了广泛重新审视。在此期间，CSC 已从人体组织中被识别并直接分离，并在免疫缺陷小鼠体内连续传代，通常通过亚群细胞的抗体标记及流式细胞术分选实现。然而，前列腺癌独特的临床特征在很大程度上限制了从新鲜人源肿瘤样本中研究前列腺癌症干细胞。我们近期报道了基于 HLA I 类分子（HLAI）阴性表型，直接从人体组织中分离前列腺 CSC 的方法。前列腺癌细胞取自手术标本，并通过机械法解离。制备单细胞悬液后，使用荧光标记的 HLAI 和间质细胞抗体进行染色。最后利用流式细胞仪分离出 HLAI 阴性的细胞亚群。该实验方案的主要局限在于，根治性前列腺切除标本中常存在原发癌病灶微小且呈多灶性分布的特点。尽管如此，所分离的活体前列腺 CSC 仍适用于在免疫缺陷小鼠体内进行移植，以开展分子特征分析和功能验证。

<img alt="组织学与流式细胞术分析；肿瘤组织切片、细胞群体图、数据比较。" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 人前列腺癌肿瘤组织的获取及流式细胞术图示人前列腺癌中特定细胞群体的分析。（A）获取肿瘤结节以制备单细胞悬液。通过常规苏木精-伊红染色确认处理后样本中的肿瘤成分。（B）排除DAPI染色阳性的细胞，以分离出活细胞。（C）基于使用同型对照IgG1κ-FITC和IgG2aκ-PE抗体染色的细胞设定HLAI阴性门控。图中显示了HLAI阴性和HLAI阳性细胞在门...

直接从人体组织中分离癌症干细胞（CSCs）是对其进行生物学表征的必要步骤。本文描述了一种从人体组织中分离前列腺癌症干细胞的方法，同时提供了针对困难步骤的故障排除建议。

癌症干细胞（CSC）模型在过去的二十年中经历了广泛重新审视。在此期间，癌症干细胞已被鉴定并直接……

本实验的总体目标是通过传真描述从人体组织中分离前列腺癌干细胞的方法。该过程首先处理从手术标本中获取的前列腺癌组织；第二步，从组织切片中制备单细胞悬液，并用荧光标记抗体对细胞进行染色。最后一步中，前列腺癌干细胞通过流式细胞术进行分选。最终，可通过异种移植和基因表达谱分析来鉴定分离细胞的分子特征和功能特性。该方法有助于推动前列腺癌领域的关键科学问题研究，促进对人源样本中癌干细胞的分子与功能特征进行深入表征。演示该实验操作的是医学博士生 Samuel Vidal、硕士生 Aiden Quinn 和 Jania。我们的研究 A 来自实验室。首先，将临床诊断不需要的过量肿瘤组织从癌组织样本中取出，放入含有 15 毫升培养基的 50 毫升锥形管中。立即将试管置于 4 摄氏度保存，并在切除后 24 小时内进行处理。然后在生物安全柜中，使用无菌手术刀和镊子进行后续操作。从癌组织样本中的大体肿瘤结节获取 2 至 4 毫米厚的水平组织切片。将这些切片放入含有培养基的新 50 毫升离心管中。随后分离出一部分组织，并将其置于 10% 甲醛中固定，用于组织学分析，以确认前列腺癌组织的存在，从而从肿瘤组织中制备细胞悬液。接下来，将两到四个毫米的组织切片转移至一个含有1毫升无菌PBS的60 × 15毫米培养皿中。使用无菌解剖刀和镊子对样本进行机械性吹打，将所得的细胞悬液汇集至一个无菌的50毫升锥形管中。向样本培养皿中再加入1毫升PBS，重复此操作三到四次，直至每个组织切片完全解离。然后使用5毫升移液管混匀细胞悬液。将细胞溶液在最大转速下涡旋震荡一分钟，然后通过35微米细胞滤网将所得的细胞悬液过滤至第二个无菌的50毫升离心管中。在室温下以450 × g离心10分钟，沉淀过滤后的细胞。然后将沉淀重悬于5毫升红细胞裂解缓冲液中。五分钟后，再次离心细胞。用少量含5% FBS的PBS重悬无红细胞的细胞沉淀，通过台盼蓝染色排除法计数。定量活细胞数量后，将细胞稀释至浓度为1×10⁶个细胞/毫升的悬液，并置于冰上保存，时间不超过一小时。为分离前列腺癌干细胞，首先标记五个15毫升锥形管，如图所示，以便在分选过程中排除造血细胞和内皮细胞。将从肿瘤组织切片中获得的细胞悬液均分至这五个试管中，然后在冰上用适当抗体（按1:250稀释）孵育30分钟。接着，离心沉淀细胞，并用含10% FBS的无菌PBS洗涤沉淀。洗涤后，将沉淀在含10微克/毫升DPI的溶液中孵育，并将最终溶液经35微米滤器帽过滤至12×75毫米聚苯乙烯试管中。使用前四支试管设定前向散射、侧向散射、dpi、fite 和 pe 的门控。最后，使用第五支试管分别收集 HLA I 类阴性与 HLA I 类阳性细胞群体，将其分选至含有 2 毫升添加 10% FBS 的 RPMI 培养基的无菌 15 毫升锥形管中。随后离心分选后的细胞悬液，并将沉淀重悬于 200

isolation-of-cancer-stem-cells-from-human-prostate-cancer-samples

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

癌症干细胞从人类前列腺癌样本隔离

癌症干细胞（CSCs）已在多种恶性肿瘤中被发现。本方案描述了一种流式细胞术方法，利用醛脱氢酶活性以及CD44和CD24的表达，从人胰腺导管腺癌异种移植瘤中分离癌症干细胞。这些活细胞随后可用于功能性和分析性研究。...

从人胰腺癌异种移植瘤中分离干细胞

本报告中，我们描述了一种用于分离高度纯化的肿瘤浸润白细胞群体的实验方案。该方案改编自 Miltenyi Biotech...

从原发性肿瘤中分离免疫细胞

本文介绍了从人胰腺导管腺癌（PDAC）组织中分离胰腺癌干细胞（CSCs）的技术。这些CSCs用于研究药物处理对肿瘤功能影响的实验研究 体外...

胰腺导管腺癌干细胞分离：一种从胰腺肿瘤中分离癌症干细胞的方法

胰腺癌干细胞（CSCs）可被扩增 体外...

研究胰腺癌干细胞特性以开发新的治疗策略

本论文详细描述了一种利用循环肿瘤细胞（CTCs）建立前列腺癌患者来源的异种移植模型（PDXs）的方法。通过循环肿瘤细胞建立PDX模型，为研究前列腺癌提供了一种替代性实验模型；前列腺癌是男性中最常被诊断出的肿瘤，也是男性因癌症死亡的常见原因。...

从循环肿瘤细胞建立前列腺癌患者来源的异种移植模型

最近研究发现，骨肉瘤中的肿瘤干细胞（CSCs）与其发病机制相关。本文介绍了从常规骨肉瘤（OS）患者活检组织获得的原代细胞培养物中分离CSCs的方法，该方法基于CSCs在非黏附条件下生长的能力。...

建立人传统型骨肉瘤的肿瘤干细胞培养

在过去的十年中，了解癌干细胞样细胞在肿瘤复发和治疗耐药性中的作用已成为备受关注的研究课题。本文描述了从头颈部鳞状细胞癌细胞系（HNSCC）中分离和鉴定癌干细胞样细胞亚群的方法。...

分离与鉴定具有干细胞特性的头颈部鳞状细胞癌亚群

本方法的目的是通过成球实验，结合功能分析以及流式细胞术和蛋白质印迹法进行表型鉴定，以可靠地鉴定癌细胞系和原代人肿瘤样本中的肿瘤干细胞（CSC）。...

从妇科及乳腺癌肿瘤中获取肿瘤干细胞球

利用人原代前列腺上皮细胞，我们报道了一种基于球体的、无需生物标志物的功能性鉴定干细胞样细胞的新方法，该方法通过标记保留实验实现。本文详细描述了BrdU、CFSE或Far...

从三维球状体培养物中分离干细胞样细胞

本实验方案描述了从乳腺癌细胞和组织样本中分离乳腺癌干细胞（BCSCs）的方法以及相关步骤 体外 和 体内...

从细胞和组织样本中分离与功能评估人乳腺癌干细胞

本方案提供了从根治性前列腺切除术标本中分离、扩增和永生化成纤维细胞的完整操作流程。此外，还介绍了利用条件培养基处理和共培养技术评估成纤维细胞与肿瘤细胞之间相互作用功能效应的实验方法。...

前列腺癌相关成纤维细胞的分离、培养与表征

学习从人类前列腺癌组织中分离癌症干细胞的方法，通过组织处理、荧光抗体标记和流式细胞分选技术获取目标细胞。该方法支持异种移植和基因表达分析，助力研究肿瘤起始机制与治疗靶点。

从人前列腺癌样本中分离癌干细胞

探索更多视频