Consensus Brain-derived Protein, Extraction Protocol for the Study of Human and Murine Brain Proteome Using Both 2D-DIGE and Mini 2DE Immunoblotting

Francisco-Jose Fernandez-Gomez; Fanny Jumeau; Maxime Derisbourg; Sylvie Burnouf; H&#233;l&#232;ne Tran; Sabiha Eddarkaoui; H&#233;l&#232;ne Obriot; Virginie Dutoit-Lefevre; Vincent Deramecourt; Val&#233;rie Mitchell; Didier Lefranc; Malika Hamdane; David Blum; Luc Bu&#233;e; Val&#233;rie Bu&#233;e-Scherrer; Nicolas Sergeant

doi:10.3791/51339

共识脑源性蛋白，人类和小鼠脑蛋白质组使用两个2D-DIGE和Mini双向电泳免疫印迹法研究提取协议

JoVE Journal
Neuroscience

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Consensus Brain-derived Protein, Extraction Protocol for the Study of Human and Murine Brain Proteome Using Both 2D-DIGE and Mini 2DE Immunoblotting

共识脑源性蛋白，人类和小鼠脑蛋白质组使用两个2D-DIGE和Mini双向电泳免疫印迹法研究提取协议

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10:51 min

April 10, 2014

DOI: 10.3791/51339-v

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用尿素/硫脲/ SDS缓冲液为人类和小鼠脑组织中一种常见的蛋白提取协议允许由蛋白质2D-DIGE并随后将其表征迷你2DE免疫印迹鉴定。这种方法使一个人从活组织切片检查和实验模型获得更多的可重复性和可靠的结果。

以下实验的总体目标是从人和小鼠脑组织中提取蛋白质用于蛋白质组学分析。这是通过使用通用裂解缓冲液获得适用于二维电泳方法的相同蛋白质提取来实现的。接下来，使用二维荧光差异凝胶电泳分离蛋白质以进行质谱鉴定。

然后进行微型 2D 凝胶电泳和免疫印迹，以鉴定翻译后修饰。结果可以显示整体蛋白质表达。宿主翻译根据等电点和分子量的差异改变所有韧带化和催化产物。

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神经科学第86期蛋白质组学神经变性二维超声心动图人类和小鼠脑组织荧光免疫印迹。缩写:二维超声心动图（二维凝胶电泳） 2D-DIGE（二维荧光差异凝胶电泳）小型二维超声心动图（2DE迷你免疫印迹法） IPG（固相pH梯度） IEF（等电聚焦） AD（阿尔茨海默氏病）