膀胱胀诱发内脏运动反应为膀胱疼痛小鼠模型

该程序的总体目标是在整个过程中建立有害膀胱疼痛和小鼠的生理模型。使用加热垫和头顶辐射加热器保持体温。手术的第一步是将导管插入麻醉小鼠的尿道。

第二步是做一个切口，露出左腹肌。第三步是使用 21 号针头咬一口肌肉。然后将弯曲的银丝电极送入针头。

然后将针头通过肌肉拉回，将金属丝留在肌肉中。对第二个银线电极重复此过程。第四步是将地线放入鼠标的胸部。

手术完成后的第五步是扩张膀胱并记录 EMG 反应。这是通过首先将三个银线电极连接到放大器和数字化器以记录内脏运动响应或 VMR 来完成的。接下来，将膀胱导管连接到时间压力调节器和气罐，以提供特定的刺激，在 15 毫米汞柱下以不同的压力使膀胱扩张。

不记录 VMR。然而，在 30、45 和 60 毫米汞柱时，VMR 会随着压力的增加而增加。绘制时，您可以看到随着压力的增加，归一化 VMR 逐渐增加。

该程序可以帮助了解一个人对内脏膀胱疼痛的理解。特别是，使用膀胱扩张模型，可以在有害内脏刺激的背景下研究整个神经系统。这包括从周围神经本身、脊髓中的次级神经元以及脑干和大脑中的高级神经元进行记录和调查。

此外，可以在这种膀胱疼痛的生理模型中测试治疗人类膀胱疼痛的新型疗法。通过将小鼠置于 2% 至 3% isof 氟的诱导室中来诱导麻醉状态。在鼠标失去书写反射后将其从感应室中取出。

将鼠标放入 2 至 2.5% 氟的鼻锥中。接下来，将鼠标翻转过来，使其背面朝下。翻身后，用镊子捏住脚趾测试麻醉深度。

动物不应该有任何反应。接下来，用镊子轻轻握住垂直于小鼠身体的尿道口，并将导管尖端插入尿道。降低导管，使其与小鼠的身体平行，然后轻轻地将导管插入小鼠的身体。

轻轻按压腹部以排出膀胱中的任何尿液。用一张纸巾吸干。在腹部涂抹酒精以对该区域进行消毒。

在消毒区域做一个 1 到 2 厘米的切口，露出左腹肌肉。用剪刀舒开皮肤并松开筋膜，使腹上斜肌露出。在这张图片中，腹肌靠近手术口的顶部，而耳肌位于底部。

使用 21 号针头咬一小口肌肉。将针头穿过肌肉。在此过程中避免任何血管很重要。

接下来，将银线的一端送入针中。将针头穿过肌肉向后拉，将银丝拉入肌肉，银丝应与肌肉的咬合齐平。重复此过程。

在距离第一根银丝约 0.5 厘米处植入第二根银丝。接下来，将第三根银丝植入胸部。这根电线充当接地。

将温热的矿物油涂抹在裸露的腹部肌肉上，以保持湿润。重新定位鼠标，使其侧躺在非常舒适的位置。接下来，将电极夹连接到银线电极。

放置三个夹子，使连线不接触。手术完成后将麻醉降低至 1.5%。接下来，每 0.125 分钟将麻醉水平降低 15%，直到小鼠对脚趾表现出屈曲反应。

捏而不发声或行走。将膀胱导管连接到连接到时间压力调节器的空气管上。这用于控制前压间隔、压力膨胀试验和后压试验间隔的长度。

在 60 毫米汞柱下进行膨胀，以测试鼠标对膨胀的反应。应看到超过 0.5 伏的强 EMG 信号。如果看到这种情况，请再执行两次膨胀以确认响应。

如果未看到适当的反应，则必须降低 isof 氟水平。如果小鼠在腹胀试验期间开始发声或走动，则必须提高 Isof 氟水平。在当前示例中，您可以看到强烈的 EMG 反应。

这将被认为是对膀胱扩张的良好 bimo 反应，并且不需要改变 Isof 氟水平。许多研究利用从低压开始的分级膨胀，例如 15 毫米汞柱，然后逐步提高到更有害的压力。现在数据已经收集完毕。

它必须经过处理和分析。第一步是通过取每个点的绝对值来纠正整个数据集。这使用数据分析软件最容易完成，但也可以手动完成。

现在您已经校正了数据，请确定实验背景部分的平均 EMG 响应。从实验中的每个数据点中减去此背景 EMG 响应，以获得背景校正数据集。接下来，确定预压区间的曲线下面积，然后确定压力膨胀试验的曲线下面积。

对于所有预压间隔和压力膨胀试验，重复此过程。这是一组分析数据的屏幕截图。这些图表从上到下依次为原始 EMG、压力传感器记录的压力、刺激信号，最后是曲线图下的面积。

在此示例中，要确定第一个压力膨胀试验的非标准化 VMR，只需从试验结束时的曲线下面积中减去试验开始时计算的曲线下面积。最后，曲线下的每个压力膨胀试验区域被归一化为最低测量的预压力间隔试验。这是通过将每个压力膨胀试验除以最低的预压间隔试验来完成的，以获得以伏特为单位的标准化 VMR，以秒为单位。

下图显示了一组膨胀的标准化 VMR，范围为 15 至 75 毫米汞柱。您可以看到 Y 轴上的 VMR 随着 x 轴上压力的增加而逐渐增加。此外，在 15 到 75 毫米汞柱的三组分级膨胀中，您可以看到该鼠标的整体 VMR 在组之间是一致的。

这种技术的稳定性允许人们进行可以持续数小时的作。最后，说明了在膀胱扩张 VMR 手术期间仔细监测体温的重要性。以下是一组数据，表明体温从 37.5 摄氏度降低到 33.5 摄氏度会导致 VMR 显着降低至 60 毫米的汞囊膨胀。

看完这个视频后，您应该对如何通过手术植入金属丝电极和膀胱导管有一个很好的了解，以用于内脏疼痛的膀胱扩张模型。您还应该更好地了解如何分析该分析生成的数据。感谢您的观看，祝您的实验好运。