Name: 对于异位小鼠心脏移植技术的一种改进方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: 学习小鼠异位心脏移植的显微外科技术，包括供心获取、血管吻合及术后监测方法。该模型可用于研究移植排斥反应机制及品系相容性对移植成功的影响。

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本研究由澳大利亚国家卫生与医学研究理事会（NHMRC）项目资助 1029205、澳大利亚Microsearch基金会以及Myee Codrington医学研究基金会资助。

在开始实验之前，须获得相关机构动物护理伦理委员会对计划实验的批准。应按照所在机构的要求饲养小鼠。以下方案已获得悉尼大学和皇家阿尔弗雷德亲王医院委员会的批准。
在开始手术前，所有器械应彻底清洁，并通过浸泡于80%乙醇中进行消毒。某些机构规定需使用高压灭菌，但这长期来看可能会损坏精密的显微外科器械。&#160;在条件允许的情况下，应使用无菌的一次性器械。
1. 麻醉
<ol>
	<li>将小鼠置于密闭容器中用异氟烷麻醉，然后将其仰卧固定于手术板上，并迅速连接麻醉鼻罩。通过夹捏后肢足部测试麻醉深度，确保无痛觉反射。</li>
	<li>使用手术刀片剃除手术区域毛发，并用80%乙醇消毒。此外，也可使用含2%氯己定的70%异丙醇进行皮肤消毒。&#160;诱导麻醉时异氟烷浓度为3%，维持麻醉时应降低至1–1.5%。根据动物呼吸频率和心率对浓度进行微调，以维持稳定的生理状态。使用加热垫维持动物体温。</li>
</ol>
2. 供体手术
<ol>
	<li>通过在肋笼两侧从肋缘向上至腋窝处切开胸腔，形成胸壁瓣，进行开胸手术以暴露心脏和血管，随后在剑突水平做一横向切口。将此胸壁瓣抬起并翻转至头部一侧，用针固定于手术板上。撕除心包膜以暴露心脏和血管。</li>
	<li>用一把镊子夹住下腔静脉（IVC），另一只手将1 ml冷肝素化生理盐水经下腔静脉靠近心脏近端处注入，然后在下腔静脉上放置一个小动脉夹，防止灌注液从针孔倒流。</li>
	<li>使用纱布和棉签将心脏向下牵拉，暴露升主动脉和肺动脉。将显微剪刀的一叶插入主动脉与肺动脉束后方的通道（横窦）内，尽可能向远端同时剪断主动脉和肺动脉，以确保吻合时有足够的长度。</li>
	<li>使用6-0丝线结扎并切断下腔静脉、右上腔静脉（SVC）、左上腔静脉（SVC）及肺静脉。分别结扎下腔静脉和右上腔静脉，然后在心脏后方放置一根单独的缝线，环绕左上腔静脉与肺静脉并结扎。在结扎线远端切断血管，从供体部位获取心脏，随后将其保存于4 °C的冷无菌生理盐水中，直至移植。此操作将导致供体因失血过多而死亡。</li>
</ol>
3. 受体操作
<ol>
	<li>按上述方法麻醉受体动物（第1节）。小心剃除腹部毛发以避免刺激，&#160;然后从耻骨至剑突沿正中线做腹正中切口，使用弯折的回形针作为拉钩进行牵拉。将肠管用温热的无菌生理盐水浸湿的纱布包裹，并移至腹部右上方。</li>
	<li>为暴露肾下腹主动脉和下腔静脉（IVC），使用电凝设备将从左肾动脉和静脉至髂总动脉分叉处之间的腹主动脉与下腔静脉束段与腰动脉分离。注意电凝设备应调节至适当温度，并持续足够时间以切断并封闭血管断端。</li>
	<li>在远端和近端分别对腹主动脉和下腔静脉段施加小型无创血管夹。在腹主动脉前壁做切口时，先用30 G&#160;针头穿刺一个小孔，再用显微剪沿垂直方向剪开，使其切口大小与供体主动脉相匹配。用肝素化生理盐水冲洗主动脉管腔，以清除任何血栓。</li>
	<li>将供体心脏用冷生理盐水浸湿的纱布覆盖后转移至受体手术区域，并置于腹部右侧。确保供体主动脉紧邻受体主动脉的切口位置，供体肺动脉紧邻受体下腔静脉。</li>
	<li>使用连续缝合的10-0尼龙线将供体主动脉端侧吻合至受体主动脉，缝合从近端角开始，先沿左侧壁缝合直至远端角，此时将动物旋转180°。轻柔地将供体心脏移至腹部左侧，以暴露主动脉右侧壁，继续从远端向近端完成右侧壁的缝合。在关闭主动脉吻合口前，用肝素化生理盐水轻柔冲洗管腔，以清除任何血栓和空气。</li>
	<li>将供体肺动脉（PA）端侧吻合至受体下腔静脉（IVC）。在下腔静脉前壁垂直剪开一个切口，位置应与动脉吻合部位相对应。使用连续缝合的10-0尼龙线，从下腔静脉管腔内左壁远端开始，将供体PA与受体IVC吻合。到达近端后，继续沿前右侧壁缝合至远端，完成吻合。在关闭吻合口前，轻柔冲洗管腔以清除血栓和空气。</li>
	<li>在松开血管夹之前，在吻合口周围放置Gelfoam止血海绵，并用棉签轻轻加压，直至实现止血。在再灌注时，先松开远端血管夹，随后松开近端血管夹。</li>
	<li>再灌注后，将37 °C的温生理盐水外敷于移植心脏表面，以促进其功能恢复。移植心脏通常立即出现纤维性颤动，并在数分钟内自发恢复为窦性心律。皮下注射0.6 ml温生理盐水以维持受体动物的体液平衡。在手术结束前，皮下注射布托啡诺以提供镇痛。</li>
	<li>使用一根5-0可吸收缝线连续缝合两层组织关闭腹壁切口。&#160;先完成内层缝合，再继续缝合皮肤层。</li>
</ol>
4. 恢复与移植监测
<ol>
	<li>注射氨苄青霉素以预防感染，并将受体动物置于37 °C加热垫上以促进恢复。大多数动物恢复迅速，通常在3小时内即可饮水，且常开始进食。若小鼠出现痛苦迹象，应密切检查以确定原因。若无明显病因，给予丁丙诺啡治疗并密切监测。如果症状严重或持续超过8小时，应咨询兽医，并考虑实施安乐死。如有必要，每12&#160;小时持续注射一次丁丙诺啡，直至症状消失。&#160;若小鼠在8小时后仍出现痛苦迹象，应继续每12小时注射一次丁丙诺啡，直至症状缓解。若症状持续超过48小时，应咨询兽医，并在必要时实施安乐死。</li>
	<li>通过直接腹部触诊监测移植物心脏搏动，并记录搏动强度：++++表示移植物健康，+表示因严重排斥导致搏动微弱，–表示因移植物完全排斥而无搏动。实验最初10天内每日监测小鼠，之后每周监测3次，直至实验结束。</li>
</ol>

<ol><li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10+but+not+transforming+growth+factor-beta+is+essential+for+generation+and+suppressor+function+of+regulatory+cells+induced+by+intratracheal+delivery+of+alloantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10 but not transforming growth factor-beta is essential for generation and suppressor function of regulatory cells induced by intratracheal delivery of alloantigen.</a> Transplantation. 79, 568-576 (2005).</li>
<li>Chen, R. H., Bushell, A., Fuggle, S. V., Wood, K. J., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+granzyme+A+and+perforin+in+mouse+heart+transplants+immunosuppressed+with+donor-specific+transfusion+and+anti-CD4+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Expression of granzyme A and perforin in mouse heart transplants immunosuppressed with donor-specific transfusion and anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 61, 625-629 (1996).</li>
<li>Poulin, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-9+promotes+eosinophilic+rejection+of+mouse+heart+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-9 promotes eosinophilic rejection of mouse heart allografts.</a> Transplantation. 76, 572-577 (2003).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thorac.+Cardiovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 57, 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li>
<li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-gp39+interactions+play+a+critical+role+during+allograft+rejection.+Suppression+of+allograft+rejection+by+blockade+of+the+CD40-gp39+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">CD40-gp39 interactions play a critical role during allograft rejection. Suppression of allograft rejection by blockade of the CD40-gp39 pathway.</a> Transplantation. 61, 4-9 (1996).</li>
<li>Saitovitch, D., Bushell, A., Mabbs, D. W., Morris, P. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+induction+of+transplantation+tolerance+with+a+nondepleting+anti-Cd4+monoclonal+antibody+and+donor-specific+transfusion+before+transplantation.+A+critical+period+of+time+is+required+for+development+of+immunological+unresponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Kinetics of induction of transplantation tolerance with a nondepleting anti-Cd4 monoclonal antibody and donor-specific transfusion before transplantation. A critical period of time is required for development of immunological unresponsiveness.</a> Transplantation. 61, 1642-1647 (1996).</li>
<li>Callaghan, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+allograft+survival+by+inhibitory+FcgammaRIIb+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of allograft survival by inhibitory FcgammaRIIb signaling.</a> J. Immunol. 189, 5694-5702 (2012).</li>
<li>Qian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+donor+MHC+Class+I+or+Class+II+antigen+deficiency+on+first-+and+second-set+rejection+of+mouse+heart+or+liver+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Impact of donor MHC Class I or Class II antigen deficiency on first- and second-set rejection of mouse heart or liver allografts.</a> Immunology. 88, 124-129 (1996).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+acceptance+of+mouse+kidney+allografts+is+associated+with+increased+Foxp3+expression+and+differences+in+the+B+and+T+cell+compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Spontaneous acceptance of mouse kidney allografts is associated with increased Foxp3 expression and differences in the B and T cell compartments.</a> Transpl. Immunol. 24, 149-156 (2011).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Heart Transplantation in Mice.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li>
<li>Mottram, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrocardiographic+monitoring+of+cardiac+transplants+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Electrocardiographic monitoring of cardiac transplants in mice.</a> Cardiovasc. Res. 22, 315-321 (1988).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

小鼠心脏移植是一种具有挑战性的显微外科技术，需要相当的手术技巧才能掌握。最具挑战性的方面在于血管直径较小。此外，还需尽量缩短受体手术时间并控制出血。小鼠心脏移植技术最早由 Corry et al. 于1973年描述，随后由 Mottram et al12 进行改进。我们的改良主要包括以下几点：首先，在开胸后立即用冷肝素化生理盐水灌注供体心脏，并在灌注后迅速切断主动脉和肺动脉束&#160;，可防止获取过程中发生热缺血。其次，在供体心脏获取完成后立即开始受体准备工作，而不是在供体操作前准备受体，可减少受体腹部暴露时间，从而提高存活率。最后，使用小型无创血管夹阻断血流，而非结扎受体主动脉/下腔静脉束，通常可减少血管损伤，并降低后肢瘫痪的发生率。
此外，以下几点对于实验成功至关重要。供体和受体动物的最佳体重为 23 至 26 克，最佳年龄为 10 至 12 周。年龄较大的动物血管并不更粗，且其脂肪含量增加会使腹主动脉和下腔静脉的暴露更加困难。手术过程中必须避免受体动物脱水和低体温。受体的肠道应使用温热的生理盐水浸湿的纱布妥善保护，并...

器官移植的动物模型可为改善临床移植患者的治疗提供重要信息。由于存在大量基因改造小鼠品系以及针对小鼠的特异性试剂，而这些资源在其他动物模型中尚不可用，因此小鼠模型在研究器官移植排斥或接受的免疫机制方面尤为有用1-3。移植小鼠模型面临的一个挑战是供体与受体体积较小，需要相当高的技术水平才能获得理想的结果。
一种大鼠异位心脏移植技术首次被描述4 随后由Corry将其改进用于小鼠心脏移植 等5该技术涉及在供体手术前对受体进行预处理，且供体心脏不进行灌注，这两种操作均可能影响移植心脏或受体的存活。该方法自最初描述以来已被广泛用于研究移植排斥反应与免疫耐受的机制。6-8其他人已将 Ono 和 Lindsey 建立的大鼠心脏移植手术改良，用于小鼠的心脏移植9,10最近，一种克服了Corry方法相关部分问题的小鼠心脏移植技术被发表 等11. 本方案基于Mottram的方法，并结合了我们的改进 等12，包括： 原位 开胸后立即用冷肝素化生理盐水灌注，并在受体手术之前完成供体手术操作，以最大限度缩短受体手术时间。此外，我们采用小型无创血管钳代替6-0丝线结扎。尽管血管钳占用空间较大，但其操作控制更为简便，而丝线结扎过紧或过松均会影响效果，且拆除时不如血管钳方便。本方法采用单根连续缝合进行血管吻合；但在初期学习阶段，可选择在近端和远端角部使用固定缝线，以确保缝合均匀，从而保障吻合口通畅。

<table><tbody><tr><td>手术显微镜&amp;nbsp;</td><td>Leica, Heerbrugg, Switzerland</td><td>M651</td><td>10-25倍放大</td></tr><tr><td>麻醉机&amp;nbsp;</td><td>Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia</td><td>Vett3</td><td>可输送异氟烷与氧气的混合气体&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>手术板&amp;nbsp;</td><td>五金店或办公用品供应商</td><td></td><td>致密软木或可插针的合成材料</td></tr><tr><td>肝素化生理盐水（5 U/ml，4 &amp;deg;C）</td><td>Pfizer, USA</td><td>FW25</td><td>置于冰上，1 ml 注射器配 23 G 针头</td></tr><tr><td>生理盐水（37 &amp;deg;C）</td><td>AstraZeneca Pty Ltd, Australia</td><td>4538</td><td>置于加热垫上，1 ml 注射器配 23 G 针头</td></tr><tr><td>缝线 10- 尼龙线，5-0 Vicryl</td><td>Ethicon, Inc. NJ, USA</td><td>2870G/J421H</td><td></td></tr><tr><td>布托啡诺（0.05 mg/kg，溶于 0.1 ml 生理盐水）</td><td>Reckitt Benckiser, Sydney, Australia</td><td></td><td>置于冰上，1 ml 注射器配 23 G 针头</td></tr><tr><td>氨苄西林（5 mg/kg，溶于 0.1 ml 生理盐水）</td><td>Aspen, Sydney, Australia</td><td></td><td>置于冰上，1 ml 注射器配 23 G 针头</td></tr><tr><td>明胶海绵（Gel Foam）</td><td>Pharmacia &amp;amp; Upjohn Co. USA</td><td>801289304</td><td>切成小块</td></tr><tr><td>高温电凝设备</td><td>Medtronic, USA</td><td>8444000</td><td></td></tr><tr><td>加热垫/Right Temp</td><td>Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;显微外科器械：&lt;/strong&gt;</td><td>上海医疗器械有限公司&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微持针器</td><td>上海, 中国</td><td>WT2020</td><td></td></tr><tr><td>显微剪刀</td><td>&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;</td><td>WT1020</td><td></td></tr><tr><td>显微镊（直头）</td><td>&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;</td><td>WA3010</td><td></td></tr><tr><td>显微镊（弯头）</td><td>&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>微型蚊式钳（1 对）</td><td>&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;</td><td>W40350</td><td></td></tr><tr><td>微血管无创钳（1 对）</td><td>&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &quot;</td><td>W40130/W40150</td><td></td></tr></tbody></table>

一种改良的小鼠异位心脏移植方法

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

小鼠常被用作移植免疫学研究中的心脏移植供体和受体，原因是可获得多种转基因小鼠品系及相关试剂。然而，由于动物体型较小，心脏移植所需的显微外科手术在技术上具有相当大的挑战性。特别是移植术后早期可能出现较高的技术失败率，原因包括受体死亡以及术后并发症，如后肢瘫痪或心脏无搏动等。本文展示了异位小鼠心脏移植的完整技术操作，包括供体心脏的获取及其在受体小鼠体内的后续移植。供体心脏在供体动物处死后的立即进行获取 原位 用冷肝素化生理盐水灌注，并横断升主动脉和肺动脉。受体手术包括准备腹主动脉和下腔静脉（IVC），随后使用单根连续缝合的10-0微血管缝线将供体主动脉与受体主动脉行端侧吻合，并以类似方式将供体肺动脉与受体下腔静脉行吻合。术后，动物皮下注射0.6 ml生理盐水，并置于37 °C加热垫上恢复。227例小鼠心脏移植结果总结显示，术后48小时手术成功率为86.8%。在48小时内失败的13.2%病例中，5例（2.2%）出现后肢瘫痪，10例（4.4%）因移植物缺血性损伤和/或血栓形成导致心脏无搏动，15例（6.6%）在48小时内死亡。

在经过初始训练阶段后，我们团队分析了227例小鼠异位心脏移植病例。术后24小时内的成功率为90.3%，48小时内的成功率为86.8%。在48小时内发生的30例（13.2%）失败病例中，5例（2.2%）出现后肢瘫痪而需实施安乐死，10例（4.4%）因移植物缺血损伤和/或血栓形成导致心脏无搏动，另有15例（6.6%）在48小时内死亡。部分实验性移植物存活情况见表1，其中包含多种品系组合。相同供体与受体品系间的心脏移植可获得长期存活，而不同品系间的心脏移植则会发生排斥反应。
移植心脏的外观如图所示 图1心脏移植失败的原因通常根据移植后心脏停止跳动的时间以及心脏的外观来确定。如有必要，应通过心脏组织学分析来确认停搏原因。例如，在一只C57BL/6品系受体接受DBA/2供体心脏移植的案例中，心脏于术后第2天停止跳动，这种情况极为罕见，因为在未致敏的受体中，排斥反应通常至少需要一周时间才会发生。 图1A 显示该受体心脏存在血栓形成及心肌组织梗死的证据。在C57BL/6供体至C57BL/6受体的...

本文演示了一种小鼠心脏异位移植的显微外科技术，包括简化的供体心脏获取和受体血管吻合方法。

小鼠常被用作心脏移植研究中的供体和受体，因其具有多种转基因小鼠品系及丰富的试剂资源……

本实验的总体目标是将供体小鼠的心脏移植到受体小鼠体内。首先从供体胸腔中取出心脏，并将其保存在冷生理盐水中。接下来的步骤是将心脏移植到受体小鼠的腹腔内，然后监测移植后的心跳情况。最后，通过肉眼观察和病理学分析确认移植排斥反应。最终结果表明，不同品系小鼠之间的心脏移植会发生排斥，而相同品系小鼠之间的心脏移植则会被接受。该操作的长期视频演示至关重要，因为供体和受体动物体积非常小，显微外科步骤难以掌握。涉及的手术操作较为复杂，且需要提高受体手术操作的准确性和速度。务必确保所有器械均在80%乙醇溶液中彻底清洗并灭菌。强烈建议使用一次性无菌器械。将供体小鼠在异氟烷麻醉室中麻醉后，将其仰卧位固定于手术板上。然后迅速连接鼻罩，输送麻醉剂。务必通过夹捏后肢足部来检测麻醉效果。若无退缩反应，即可开始使用手术刀剃除皮肤上的毛发。然后在手术过程中，使用含70%异丙醇的2%氯己定溶液交替擦拭皮肤三次以进行消毒。密切观察动物的呼吸和心跳，并据此调整异氟烷的输送量。首先进行开胸术，通过肋骨两侧切开胸腔以暴露心脏和血管。从肋缘向上至腋窝，并横向切至剑突水平，形成胸壁皮瓣。将瓣膜固定在靠近头部的手术板上以保持开放。随后去除心脏周围的心包膜。用镊子提起下腔静脉，于靠近心脏的下腔静脉近端注射1毫升冷肝素化生理盐水。然后用纱布和棉签在下腔静脉（IVC）上固定一个小型动脉夹，以防止溶液从针孔处回流。将心脏向下移动，暴露主动脉和肺动脉。横窦是位于主动脉与肺动脉束后方的通道。接下来，尽可能远端切断主动脉和肺动脉，以最大化吻合所需血管的长度。现在分别切断下腔静脉、右上腔静脉、左上腔静脉以及肺静脉。每条血管均应使用6.0丝线结扎分离。首先，结扎下腔静脉（IVC）和右上腔静脉（SVC）。然后结扎左上腔静脉（SVC）和肺静脉。现在，在结扎线远端切断所有血管，取下心脏。将心脏保存在4°C的冷无菌生理盐水中，直至移植。按照供体所述方法完成动物手术准备后，开始进行剖腹手术。沿中线从耻骨切至剑突。使用弯成拉钩状的回形针。打开腹腔，用温热的生理盐水浸湿的纱布包裹肠管，并将其牵拉至腹腔右上方。接着，暴露髂总动脉分叉处与左肾动、静脉之间的肾下腹主动脉和下腔静脉。游离主动脉和下腔静脉的成束节段。然后使用校准的电凝设备将主动脉和下腔静脉与腰动脉分离。在游离的主动脉-下腔静脉节段的近端和远端分别施加小型无创血管夹。使用30号针头，从垂直切开的孔处在主动脉前壁上穿刺一个与供体主动脉大小相同的孔。借此机会用肝素化生理盐水冲洗，清除主动脉腔内的任何血栓。现在将供体心脏放入冷生理盐水中。将供体心脏置于受体主动脉切口旁。使用10-0连续尼龙缝线将供体肺动脉与受体下腔静脉（IVC）并置。将主动脉行端侧吻合。从近端角开始，沿左侧缝合至远端角。然后将动物旋转180度，移动心脏位置，继续从远端向近端方向缝合主动脉壁的右侧。在关闭吻合口之前，用肝素眼用生理盐水轻轻冲洗管腔，以清除血凝块和空气。然后完成缝合。接下来，在下腔静脉前壁做一纵向切口，用于与肺动脉进行吻合。第二，使用10-0缝线进行吻合。从下腔静脉（IVC）近端腔内左侧壁的远端起始处开始，沿前右侧壁连续缝合至远端，再次完成缝合。在完成吻合前，应对管腔进行充分冲洗。接下来在吻合口周围放置明胶海绵碎片。使用棉签施加轻柔压力以实现止血。为了重建受体的血运，应先松开远端血管夹，再松开近端血管夹。在受体手术过程中，至关重要的是优化手术的精确性和操作速度。因此，交叉阻断时间理想情况下应少于30分钟。为促进恢复，应在移植部位应用37摄氏度的温盐水。心室颤动应立即出现，并在数分钟内自行转复为窦性心律。在关闭手术部位之前，应肌肉注射布托啡诺。使用一根5-0可吸收缝线连续缝合所有组织层，以完成手术。关闭手术切口后，给受体动物注射氨苄青霉素以及0.6毫升生理盐水的皮下注射。为帮助动物补水，将其置于设定为37摄氏度的加热垫上，直至其恢复意识。大多数动物在手术后三小时内即可饮水，甚至进食。如果在八小时后，小鼠仍表现出痛苦迹象，应每12小时注射一次布托啡诺，直至症状消失。如果小鼠的痛苦状态持续超过48小时，在术后前10天内应联系兽医。通过腹部触诊直接监测移植物的心跳。每天记录搏动强度，健康的移植物记为四加（++++），因严重排斥导致搏动微弱者记为一加（+）。若移植后10天内移植物完全被排斥且无搏动，则记录为阴性结果。在227例异位心脏移植后，每周监测移植心脏搏动三次，其中90.3%在术后24小时内成功，86.8%在术后48小时内成功。失败情况包括后肢瘫痪、因移植物缺血损伤和/或血栓形成导致的心脏无搏动以及受体死亡，存活的移植物受体被登记记录。心脏移植失败的原因由病理学检查确定。对移植心脏的分析显示，此处箭头所指的心脏组织血栓形成和梗死是导致该移植物在C57BL/6供体与受体品系组合中失败的原因；而在另一情况下，未发生心脏排斥反应，移植心脏存活超过100天。本例中，由于该心脏处于非维持生命状态，心肌出现继发性萎缩，导致心脏体积略有缩小。相比之下，在DBA二号供体向C57黑六号受体移植的排斥品系组合中，移植的心脏在第7天已停止跳动，并在第100天显示出明显的排斥迹象。同一颗心脏在后期完全纤维化并萎缩。如果操作得当，该技术可在90分钟或更短时间内完成，但切记，使用超声刀气体时可能存在极高风险。麻醉气体清除装置的使用非常普遍。

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套管技术通过避免对小血管进行技术难度较高的缝合吻合，从而缩短并简化了小鼠异位颈部心脏移植模型的建立过程。本视频论文中展示的技术细节应有助于研究人员在其实验室中成功建立该模型。...

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采用端侧吻合技术进行颈部异位小鼠心脏移植以研究移植免疫学

学习小鼠异位心脏移植的显微外科技术，包括供心获取、血管吻合及术后监测方法。该模型可用于研究移植排斥反应机制及品系相容性对移植成功的影响。

一种改良的小鼠异位心脏移植方法

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