蛋白通过流体动力基因传递在小鼠体内瞬时表达

该程序的总体目标是使用流体动力学基因递送或 HGD 在小鼠中瞬时表达基因来做到这一点。称量小鼠并加入适量的含盐水质粒。制备 DNA 并装入注射器中。

然后加热小鼠以扩张尾部血管，并使用背动脉将其放置在限制器中。作为参考，找到侧侧 coddle 静脉，并将 DNA 盐水混合物注射到其中一个 coddle 静脉中。最后，将鼠标从限制器中取出并放在温暖的垫子上进行恢复。

最终，可以通过 Western blot 监测血液蛋白水平来获得显示转基因表达的结果。与其他现有方法（例如病毒输血表达）相比，该技术的主要优点是流体动力学基因递送允许使用裸格子 DNA，该 DNA 易于生产、使用安全且大小限制较小。我是丹妮拉·科瓦契奇。

我是 Jane Raper 博士实验室的博士后，我将演示这种方法。通过使用 Sharpie 标记白鼠的背部来开始此过程，以表明他们的实验组根据需要随着时间的推移重新应用标记。在实验当天，在放置在数字实验室天平上的动物秤盘或桶中称量每只小鼠。

按照随附文档中的说明记录每只鼠标的重量。为每只要注射的小鼠准备足够的注射混合物，加上一种注射混合物，因为正确装载注射器需要一些额外的注射混合物。使用已批准用于人类的不含防腐剂和内毒素的无菌盐水。

让所有溶液达到室温后，将无菌 20 号针头连接到 3 毫升下锁注射器上，并吸出 DNA 盐水混合物 x。为每次注射准备一个注射器。确保不要产生任何气泡。

避免使用大容量注射器，因为注射液中的氟化物不能很好地控制，而且很难用一只手纵较大的注射器。接下来，改用无菌 27 号针头。根据计算结果调整 DNA 盐水混合物的体积。

将多余的溶液弹出回锥形管中以备后用。这将填充针头。不引入气泡。

注射前不要让未加帽的针头接触任何非无菌表面以保护针头。用单手技术回顾一下。将盖子放在平坦的表面上，然后用另一只手握住盖子，插入针头并将带帽的针头压在坚固的物体上。

为了固定盖子，请以相同的方式准备所有需要的注射器。在开始进样之前进入。将装有床上用品的鼠标笼放在加热垫上五分钟，使床上用品的温度约为 38 至 39 摄氏度。

这会扩张小鼠的血管。请注意，当小鼠加热时，不建议对此过程进行麻醉，请使用实验室胶带将背侧通道限制器固定在平坦的表面上。五分钟后，打开注射器的盖子，用于第一次小鼠注射。

将注射器放在盖子上，以防止未加盖的针头接触不干净的表面。为了安全和清洁。一次保持一根针头不盖帽。

接下来，捡起一只老鼠的尾巴。将其轻轻放入限制器中并插入插头。根据需要使用尽可能少的约束装置以保持尾巴固定。

确保鼠标自由呼吸。接下来，通过直视鼠标的背面来定位外侧 coddle 静脉。尾部中间的红线是动脉。

虽然尾巴两侧的蓝线是外侧 coddle 静脉，但放置鼠标，以便可以看到其中一条外侧 coddle 静脉。然后用酒精棉签彻底擦拭鼠标的尾巴。用非注射的手，将尾巴紧紧地夹在食指和中指之间，使尾巴从食指下方穿过中指和无名指，以及小指下方。

让拇指保持自由活动。用另一只手用酒精棉签擦拭注射区域。同样，让该区域干燥。

现在用注射手拿起装满的注射器，并握住拇指和其他四个手指之间的桶。不要抓住柱塞。将注射器与尾部平行放置，针头指向鼠标身体，针头的斜面或倾斜边缘朝上。

将针头插入尾静脉。如果静脉位置正确，针头将在保持针头稳定的情况下无阻力滑入，用握针头的手的拇指关闭针头的针座，然后将针头轴压在针尾部以将针头固定到位。不要施加过大的压力，也不要握住针杆，因为这会阻碍液体流入静脉。

接下来，重新定位握住注射器的手，使食指和中指握住法兰，拇指位于柱塞的末端。连续按下柱塞，并在 6 到 8 秒内注入全部体积的液体。从静脉中取出针头，用纸巾轻轻按压尾部以止血。

这里实时显示注射过程。请注意，不建议完全插入针头，因为会增加静脉剪切的风险 注射后，从限制器中取出鼠标，并将其放入放置在加热垫顶部的恢复笼中。如果注射室很冷，此步骤对于小鼠的生存至关重要。

握住鼠标的尾巴，直到出血完全停止。在流体动力学后观察鼠标一小时。DNA 递送。

最初的喘气和不动是正常的，但请确保鼠标有恢复的迹象。在老鼠恢复后大约五分钟后，将其放回笼子并确保它有充足的食物和水供应。接下来，我们将使用替代手部位置演示尾部注入。

当需要将小鼠注射到更靠近尾巴底部的地方时，这种方法特别有用。例如，当在同一天纠正失败的注射或注射尾巴较短的小鼠时，准备注射鼠标并将其放置在限制器中。和以前一样，将未注射的手放在平坦的表面上，四根手指弯曲成 90 度角，手指应相互重叠。

创建一个平台，将鼠标尾部放在拇指和指向的手指之间。用另一只手用酒精棉签擦拭要注射的区域。让该区域干燥。

用 I 注射手抓住注射注射器，握住其法兰和柱塞末端，准备注射。然后将注射器与尾部平行放置，针头指向鼠标身体，针头的斜面朝上。像以前一样注射以评估在特定序列位置添加 hiss 标签是否会干扰狒狒 APO 的正确加工和分泌。

L 1 蛋白小鼠注射携带 3 个差异组蛋白标记的狒狒 APO L 1 基因之一的质粒，以及携带狒狒 HPR 的质粒。通过注射后 2 天小鼠血液中循环 HPR 水平的蛋白质血液分析来评估注射成功。如图所示，狒狒 HPR 在所有小鼠的血浆中高表达，但其中一只转染小鼠表明 HGD 成功。

水平的轻微下降，如在 B APO L 中的一只小鼠中观察到的那样，他的标签组 1 通常归因于注射速度的 1 到 2 秒的非常小的降低。此处，血浆样品泳道 1 显示完全缺乏蛋白表达。这表明 HGD 失败，很可能是由于输送载体的全部体积注射不完全，无法评估他的标记对 B APO L 的影响，还评估了嘶嘶声标签的一种分泌表达，如图所示。

第 1 组和第 2 组完全缺乏可检测到的 hist 标记蛋白。唯一一组在血浆中检测到蛋白质水平的小鼠是第 3 组。综上所述，这些数据表明，第 1 组和第 2 组中缺少 His 标记的蛋白质是基因表达或蛋白质加工差异的结果，而不是注射失败的结果。

它还强调了在注射混合物中加入示踪蛋白的重要性，以监测 HGD 的成功。看完这个视频，你应该对如何准备小鼠和注射器以及如何将针头插入尾静脉以快速注射Temid DNA以通过流体动力学基因递送来表达基因和小鼠有了很好的了解。此过程最困难的方面是在整个注射过程中保持针头的位置。

正确插入的针头可能会因注射人员或未麻醉的鼠标的意外移动而睡错位置，以增加成功的机会。我们避免注射体重超过 27 克的小鼠，因为在处理已装入 3 毫升的注射器时。容量更难。

我们发现体重 23 至 27 克的小鼠最方便注射。体重低于 20 克的小鼠的静脉可能太小而无法注射。