脂质双层囊泡代使用微流控喷射

该程序的总体目标是生成磷脂双层囊泡，并增加对膜、unla、摩尔浓度、单分散性和内部内容物的控制。使用 cad，由亚克力板和天然橡胶制造腔室。通过将脂质和溶液加载到腔室中来产生悬浮的脂质双层。

接下来，使用喷射装置设置包含待封装溶液的喷墨打印机。一旦建立了适当的设置，喷射流体脉冲将产生脂质双层囊泡。最终，微流体喷射产生可重复的单分散双层囊泡。

与电形成、乳化或液滴生成等现有方法相比，该技术的主要优点是提高了控制膜、单侧摩尔浓度、单分散性和内部内容物的控制水平。演示该程序的是实验室的研究生 Johanna Harrow，本科生 Kara Patel 将协助使用 CAD 软件，使用激光切割机先钻一个可以由亚克力制成的腔室形状，在组装好的亚克力腔室的两侧有一个 16 英寸的通孔。这将排到无限形状的井。

其次，用剪刀从 0.2 毫米的亚克力板上剪出一个小矩形，作为无限形状的底部。用快干粘合剂将其固定到位，确保不要让胶水进入观察区域。亚克力板应冲洗到腔室壁上并固定在腔室底部。

第三，使用速干胶将一块薄薄的天然橡胶板粘在钻孔上。用镊子将它们压入到位。测试所有胶合接缝是否有泄漏。

不应该有任何。最后，使用 23 号针头，通过钻孔在橡胶上戳孔，压电喷墨尖端将插入这些孔。原液磷脂应溶于氯仿中，并在零下 20 摄氏度下储存。

D-P-H-P-C 或 DOPC。本演示中使用了脂质。将溶解在氯仿中的脂质转移到玻璃瓶中，同时以一定角度握住小瓶，在氩气或氮气下轻轻干燥脂质。

然后将瓶盖略微松动的样品瓶在真空下放置 1 到 2 小时，以去除残留溶剂。干燥剂也可用于此步骤。现在溶解端部甲板中的脂质，使最终脂质浓度为 25 毫克/毫升。

涡旋溶液。用 param 短暂密封瓶盖，然后超声处理 15 分钟。将此溶液储存在零下 20 摄氏度。

接下来，制备具有生理学渗透压的蔗糖储备液。这就是喷射点胶解决方案。考虑在溶液中加入一滴深色食用染料或荧光珠，以增加对比度或荧光。

将蔗糖溶液装入 1 毫升注射器中，以去除滞留的空气。轻弹注射器，使任何气泡上升到诱饵开口并可以排出。接下来，将 33 毫米 0.22 微米的过滤器连接到注射器上，并将一个液滴推出穿过过滤器。

现在拧下喷墨打印机的母诱饵适配器并将其压在过滤器的末端。推出一些液体以去除任何滞留的空气。最后，将注射器连接到喷墨流体的顶部。

如果注射器已正确连接，则应移动到喷墨喷嘴。首先，将注射器组件安装到显微镜载物台上，并为本实验连接喷墨控制器。载物台和注射器需要独立控制，载物台和注射器都在三个维度上移动以实现可视化。

设置一个每秒至少 1000 帧的高速摄像机。将其设置为使用基于图像的自动触发来启动录制。现在，用胶带将腔室固定在载物台上，并小心地将喷墨尖端与腔室侧面橡胶板上的孔对齐。

首先，通过肉眼调整，然后使用显微镜进行微调。对齐后，沿一个维度向后拉出注射器，以加载无限形状。然后对柱塞施加轻微的压力，使喷嘴上形成液滴。

这提供了一些初始背压。需要设置喷射参数。接下来，梯形双极波的具体值在屏幕上显示，施加的电压和每个触发的射流脉冲数控制囊泡大小。

现在在十年末期向腔室中加载 25 至 30 微升脂质溶液，覆盖无限形状的整个表面。然后，将 25 微升葡萄糖溶液添加到最外缘，缓慢平稳地移液，葡萄糖不应混入脂质溶液中。在 10 分钟内，脂质双层将在腔室中心形成。

设置双层是最关键的步骤，因为双层不稳定，并且可能会根据准备工作而断裂。要有耐心。一旦你练习几次填充腔室，它就会起作用。

现在，当喷墨喷头距离液滴界面 200 微米以内时，小心地将喷墨喷头插回腔室。双层，开始喷射过程并使用喷墨记录数据，从而深入了解囊泡生成过程。例如，改变喷墨喷嘴和脂质双层之间的距离会影响使膜变形的力。关闭。

靠近双层会聚焦射流并防止膜将能量从囊泡生成点分散出去。此外，涡流行程随着施加到压电电动执行器的电压而增加。囊泡形成被可视化为它们形成后的一系列事件。

囊泡稳定性往往随囊泡直径而变化，较小的囊泡更稳定。看完这个视频后，您应该对如何使用微流控喷射生成脂质违规囊泡有了很好的了解。