两种方法从子宫切除标本小学建立人子宫内膜基质细胞

该程序的总体目标是从切除的子宫切除术中建立原代子宫内膜基质细胞培养物。这是通过首先区分和分离子宫层以分离子宫内膜组织的一部分来实现的。第二步是在使用刮擦方法时，在刮擦法和 tryin 方法之间选择细胞分离技术。

机械力和刮擦用于分离和解离子宫内膜基质细胞。或者，当使用胰蛋白酶方法时，胰蛋白酶的酶活性用于分离和解离子宫内膜基质细胞。最终，显微镜用于观察细胞生长和形态，而手稿中讨论的其他技术用于验证子宫内膜基质培养物。

这种方法可以帮助回答生殖领域现象中的关键生理学问题，例如生殖周期和月经 本手稿中使用的子宫切除术标本是根据大学 IRB 批准的伦理协议收集的，编号为 I-R-B-H-S-R 编号 1 4 4 2 4。在处理样品之前，将患者来源的组织保存在含有 RPMI 或 DMEM 且 4 摄氏度高葡萄糖的 50 毫升试管中不超过 24 小时。准备开始时，用一个 XPBS 洗涤组织样品 3 次，并在每次洗涤之间丢弃溶液。

然后向组织样品中加入 4 至 10 毫升补充有 10% FBS 和 1% 青霉素链霉素的生长培养基。此外，添加真菌区至终浓度为 0.25 μg/mL，并孵育 30 分钟。接下来，丢弃生长培养基，用一个 XPBS 洗涤组织两次。

将组织放在 6 厘米的细胞培养板上，并使用这些图像作为指导识别子宫内膜层。然后分离子宫内膜并保存其他组织层以备将来使用。使用手术刀或剃须刀片将组织切成小块，同时在细胞培养皿上刮擦。

划痕促进了新兴的原代子宫内膜基质细胞的附着。接下来，将 2 毫升生长培养基轻轻加入到有划痕的培养皿中。在这个阶段，组织碎片将可见并因抓挠运动而固定。

将培养皿放入与其他细胞系分开的指定细胞培养箱中，以避免污染。每天使用光学显微镜监测细胞。每三天寻找在第 2 天或第 3 天从切片组织中出现的小细胞群。

用一个 XPBS 轻轻去除旧的培养基洗涤培养物，然后加入 2 毫升新鲜的生长培养基。开始添加 4 毫升生长培养基。一旦增殖速率在洗涤步骤中增加，吸出剩余的组织块。

新的菌落不太可能从组织中出现。生长传代一周后，细胞使用 0.05% 胰蛋白酶。当细胞达到 75% 到 80% 的 co 流畅度时，然后冷冻一板细胞。

一旦维持 2 个或 3 个板，原代细胞就不能无限期传代。要开始 tripsin 介导的分离，将一小块子宫内膜组织放入锥形管中，其中含有 2 毫升 0.25% 胰蛋白酶，每毫升补充 0.03 毫克。然后，Can mycin 将组织在 37 摄氏度的旋转平台上孵育 30 分钟。

接下来，短暂涡旋组织，然后以 200 至 400 倍 G 离心 2 分钟，弃去上清液并加入新鲜胰蛋白酶。然后 Can mycin 将组织在 37 摄氏度下孵育一小时，同时旋转。孵育后，涡旋组织 5 到 10 秒。

然后加入两毫升含有 10% FBS 和 1% 青霉素链霉素的生长培养基。要使胰蛋白酶失活，请将细胞以 200 至 400 倍 G 离心 2 至 3 分钟。然后弃去上清液并重悬细胞沉淀。

在 2 mL 生长培养基中，将细胞悬液接种在 6 cm 的细胞培养皿上，然后刮擦板以增强原代细胞的附着。每天用光学显微镜监测细胞生长，每两到三天更换一次生长培养基。一旦细胞达到 75% 至 80% 的共流畅度，使用 0.05% 或 0.25% 胰蛋白酶传代，分离子宫内膜基质细胞。

使用抓取方法生成早期出现的细胞簇。沿着手术刀诱导的划痕，子宫内膜基质细胞可以通过其成纤维细胞形态来识别。胰蛋白酶法的制备时间比刮取法长，但更早观察到活细胞。

tryin 方法还可以生成具有成簇和分散生长模式的细胞。尚未发现子宫内膜基质细胞的组织特异性标志物。识别子宫内膜基质细胞的一种方法是测量标志物的丢失。

用于上皮细胞，如细胞角蛋白。缺乏细胞角蛋白表明子宫内膜上皮细胞缺失。与第 2 次传代相比，第 5 次传代观察到的细胞角蛋白染色丢失证实了上皮细胞的缺失。

可以使用脱细胞测定提供子宫内膜基质细胞存在的功能证据。CAMP 和醋酸羟孕酮治疗后催乳素和胰岛素样生长因子结合蛋白 1 的增加表明子宫内膜基质培养成功建立。观看此视频后，您应该对如何从切除的子宫切除术中建立原代子宫内膜基质细胞培养物有很好的了解。