提取毒液和毒腺Microdissections从蜘蛛的蛋白质组学和转录组分析

该程序的总体目标是从蜘蛛中提取毒液并解剖毒腺以进行转录组学和蛋白质组学研究，这是通过首先准备通过电刺激收集毒液所需的设备和试剂来实现的。第二步是在解剖显微镜下用镊子固定麻醉蜘蛛。接下来，用电流脉冲蜘蛛，并用微型毛细管收集释放的毒液。

最后一步是在两到三天后解剖蜘蛛的毒腺。最终，毒液的质谱或其他蛋白质组学分析用于显示组成毒液蛋白的序列。这种方法的视觉演示至关重要，因为毒液收集步骤很难学习，因为它们涉及一系列协调一致的作，必须快速而小心地执行。

首先，将电刺激器电源线连接到插座，并将外部脚踏板连接到外部信号输入。接下来，确保极性开关处于正常模式，并将正极连接到电刺激器上的红色输出端子，并将负极连接到黑色输出端子。然后将刺激器设置为以下推荐的初始设置。

通过将鳄鱼夹连接到正负电压表测试引线来测试电极输出。然后打开刺激器电源开关，用脚踏板输送电流。准备轻量级镊子，用液态塑料涂上一个叉子，等待四个小时，塑料干燥后涂层干燥，用单层棉缝纫线紧紧包裹 15 毫米的 AP 相对叉尖，并通过将末端打结来固定线。

接下来，使用锋利的剪刀剪断钝皮下注射针的尖端，该针头足够小，不会伤害蜘蛛，但又足够大，可以避免堵塞。用砂纸抹平开口，然后将针头连接到真空废液收集器上。然后使用乙烯基覆盖的双叉夹将羽量级镊子水平放置在紧密关闭的位置，该夹子在解剖显微镜的视野下固定在磁性底座上，塑料涂层叉在顶部，螺纹涂层叉在底部。

接下来，将正极鳄鱼夹连接到螺纹上游的底部插脚上，并将负极鳄鱼夹连接到钝金属真空针上。然后将正极引线放在线和鳄鱼夹之间的镊子叉上，将负极引线放在钝真空针上。要测试电压表电路电流，请踩下脚踏板以确保检测到足够的电流，并在佩戴防护眼镜时取下引线。

准备几个用于毒液收集的微毛细管。接下来，将安装油灰条放入培养皿中，并将微毛细管放在条带上。戴手套的手握住一端的微型毛细管，用无菌金属镊子将另一端放在本生灯火焰上，然后将一端从火焰中拉出以产生细长的尖端，同时将另一端保持在静止位置，在解剖显微镜下检查微毛细管末端，并用消毒金属镊子在拉动的一端创建一个小的斜面开口。

关闭试管并将它们放在冰上。要开始蜘蛛固定，请打开 CO2 室气体。然后用长金属镊子将蜘蛛网从封闭的塑料收集瓶转移到 CO2 室中。

将蜘蛛蜘蛛留在腔室中 5 到 10 分钟，然后检查蜘蛛是否不再移动。用长镊子轻轻戳它。然后使用蘸有盐水溶液的移液管润湿镊子上的线。

接下来，通过抓住前腿从 CO2 室中取出麻醉的蜘蛛。使用钝器解剖钳和戴手套的手，将麻醉的蜘蛛移动到羽量级镊子装置上。然后分离闭合的羽量级镊子的尖头，并将蜘蛛的头头尖放在尖头之间。

让叉齿合上，以确保蜘蛛形板紧紧固定到位但不被压碎 快速确保将叉形针背侧向下放置，放在涂有螺纹的叉齿上，汽车的腹侧面向塑料涂层，而正极保持连接到底部叉形。接下来，调整解剖显微镜的放大倍率、焦距和光源，直到蜘蛛的叫声和尖牙清晰可见。要开始毒液收集，请打开真空并用水喷洒蜘蛛煤矿。

使用第二个钝头注射器针头，用真空针头吸走水分以去除杂质。接下来，将带有负极的真空针接触蜘蛛的喙部，并用脚踏板传递脉冲。蜘蛛的腿会收缩，毒液会以清晰的液滴从尖牙中冒出

如有必要，用真空吸尘器吸走反流物。然后用微型毛细管尖端收集毒液滴，并将毛细管尖端转移到装有水的 0.5 毫升管中，水将被吸入毛细管中。避免用毛细管刺穿蜘蛛，避免用丝和丝上的胶水污染毛细管。

接下来，将带有管适配器的转移注射器连接到与收集头相对的一端的微毛细管上，然后将毒液溶液分配回管中，然后将管子放在零下 80 摄氏度的冰储存毒液管上。完成后，完成毒液收集后，将一个打开的塑料收集瓶及其盖子放在靠近蜘蛛的位置。为了快速转移，用一只手握着钝的解剖钳小心地抓住蜘蛛的腿，另一只手小心地打开轻量级的镊子。

然后用钝镊子将蜘蛛滑入收集瓶中。并在毒液收集后两到三天迅速盖上盖子，在 CO2 室中麻醉蜘蛛，然后填充液氮载体并将其放在解剖显微镜旁边。用 RNA 清洁解剖区域和镊子。

然后在一个小培养皿中加入 1 x 盐水柠檬酸钠，并将其置于解剖显微镜下。接下来，将蜘蛛从 CO2 室转移到培养皿中，并使用镊子将头头孔与腹部快速分离。然后用镊子将头颅放在解剖显微镜下，并将煤矿置于视野中。

使用第二对镊子的锋利末端切割角质层，将甲基横向连接到煤矿的侧面。用第二对镊子抓住煤矿，轻轻地来回拉动，直到毒腺被拉出。所需时间不超过 15 分钟。

腺体与煤矿分离，并将它们转移到冷冻安全的 0.5 毫升试管中。将封闭的试管放入液氮中，将质谱技术与毒腺 CD NA 生成的序列数据库相结合。文库能够鉴定毒液蛋白。Laro inept 肽是使用质谱法从黑寡妇毒液中鉴定的 36 种蛋白质之一。

不要忘记，与黑寡妇这样的蜘蛛一起工作可能非常危险，因此在执行此程序时应始终采取预防措施，例如戴防护手套。