Name: 解剖和免疫染色成虫盘的果蝇 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 学习解剖果蝇幼虫成虫盘并进行免疫组织化学染色的标准方法。该方案利用荧光显微镜揭示基因和蛋白质在眼触角盘等组织中的时空表达模式，为发育生物学研究提供可靠技术。

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我们感谢 Donald Ready 和 Kevin Moses 教授 JPK 最初的成虫盘解剖技术。我们还感谢 Bonnie Weasner 提供了图&#160;1B中的生殖盘和图&#160;2A中的眼盘，Brandon Weasner 提供了图&#160;3，布卢明顿果蝇品系中心（Bloomington Drosophila Stock Center）提供的果蝇品系，以及发育研究杂交瘤库（Developmental Studies Hybridoma Bank）提供的抗体。CMS 得到了美国国立卫生研究院（NIH）GCMS 培训项目（T32-GM007757）、Frank W. Putnam 研究奖学金和 Robert Briggs 研究奖学金的资助。JPK 得到了美国国家眼科研究所资助项目（R01 EY014863）的支持。

1. 幼虫的制备
<ol>
	<li>在35 mm培养皿中加入解剖缓冲液。</li>
	<li>将幼虫放入培养皿中，使其游动数分钟（自清洁步骤）。</li>
	<li>将幼虫转移至硅胶解剖板上的一团解剖缓冲液中。该液滴应位于解剖板的一侧边缘。解剖板由倒入玻璃培养皿中并固化的硅胶溶液构成。</li>
	<li>使用巴斯德吸管，在解剖板中央放置较大体积的解剖缓冲液。</li>
	<li>使用#5镊子，将一只已清洁的单个幼虫从小液滴转移至中央较大的解剖缓冲液中。</li>
</ol>
2. 幼虫的粗解剖
<ol>
	<li>当幼虫仍处于大量解剖缓冲液中时，用镊子夹住幼虫。用一对镊子夹住口钩，同时用另一对镊子固定幼虫身体（在体长约1/3处轻柔夹住），使其保持静止。</li>
	<li>稳稳握住夹住口钩附近表皮的那对镊子，同时用第二对镊子迅速将身体其余部分拉离。</li>
	<li>当幼虫开始撕裂时，会感到轻微的张力释放。此时松开镊子，使幼虫的“内脏”自然流出。这有助于保持成虫盘的正常形态，防止其发生变形。</li>
	<li>用一对镊子再次夹住口钩，以固定幼虫前端。使用另一对镊子移除包括内部脏器在内的幼虫下半部（约占整体的2/3）。注意：剩余结构应包含口钩、眼-触角成虫盘、脑半球、腹神经节、唾液腺、部分足成虫盘以及覆盖其上的表皮。</li>
	<li>用镊子小心去除覆盖的表皮、唾液腺、足成虫盘及其他组织。注意：最终仅应保留口钩、眼-触角成虫盘、脑半球和腹神经节（图&#160;3）。</li>
	<li>重复步骤2.1–2.5，继续处理其他幼虫，持续15–20分钟。注意：在解剖缓冲液中存放时间过长的成虫盘容易降解，最终将难以获得理想的显微拍摄样本。因此，所有解剖得到的组织在最多20分钟后应立即转移至PLP固定液中（见下文）。</li>
</ol>
3. 使用抗体对组织进行固定和染色
<ol>
	<li>使用P-200移液器将解剖的组织转移至含有冷的多聚甲醛-赖氨酸-过碘酸盐（PLP）固定液的表面皿中。转移的解剖缓冲液体积应限制在50 µl以内，以尽量减少对PLP的稀释。务必用剃刀片切去吸头尖端，使开口足够大以容纳解剖组织。使用一对镊子或钨针确保解剖组织完全浸没在固定液中，以保证充分固定。将解剖组织在冷PLP固定液中孵育45分钟。此孵育可在室温下静置进行。</li>
	<li>使用P-200移液器和另一个切去尖端的黄色吸头，将解剖组织转移至洗涤缓冲液（室温）中，孵育45分钟。转移的PLP液体积应限制在50 µl以内，以尽量减少对洗涤缓冲液的稀释。注意：所有解剖组织必须完全浸没。</li>
	<li>将20–30组解剖组织转移至1.5 ml微量离心管中。注意：若管内合并过多眼-触角盘复合体，可能导致管底组织无法充分接触抗体。为获得最佳结果，单个离心管中不应超过20–30个眼-触角盘复合体。解剖组织将沉降至微量离心管底部。因此，在后续步骤中应使用移液器移除并更换洗涤缓冲液、封闭液和抗体溶液。</li>
	<li>移除洗涤缓冲液，加入100 µl封闭液：含10%正常山羊血清的洗涤缓冲液。在室温下置于旋转仪上轻柔旋转孵育10分钟。</li>
	<li>移除封闭液，加入100 µl已用10%正常山羊血清适当稀释的一抗溶液。在室温下轻柔旋转孵育16小时。</li>
	<li>移除一抗溶液，加入750 µl洗涤缓冲液。将离心管置于摇摆混合器（nutator）上，在室温下摇动10分钟。注意：一抗溶液可保存（4 °C储存）并后续重复使用。多次重复使用抗体有助于降低非特异性结合。</li>
	<li>让组织沉降至管底，然后移除洗涤缓冲液，加入100 µl已用10%正常血清适当稀释的二抗溶液。在室温下轻柔旋转孵育2–4小时。</li>
	<li>移除二抗溶液，加入500 µl洗涤缓冲液。让组织沉降至管底。</li>
	<li>使用P-200移液器和切去尖端的黄色吸头，将所有解剖组织转移至解剖皿中预先放置的洗涤缓冲液池中。在进行下一步精细解剖的同时，组织将在洗涤缓冲液中继续孵育，以帮助去除多余的二抗。</li>
</ol>
4. 复眼-触角盘复合体的精细解剖及载玻片封片
<ol>
	<li>用一对镊子夹住口钩处的角质层，使复合体的腹面朝下。用第二对镊子插入脑与眼盘之间的空隙（图&#160;3，红色箭头），夹紧后迅速将脑从口钩处拉离，以去除两个脑叶。</li>
	<li>在持续夹住口钩的同时，尽可能靠近眼-触角盘触角部分与口钩的连接处将组织剪断（图&#160;3，蓝色箭头）。注意：眼-触角盘复合体应完全去除所有附属组织（图&#160;1A）。重复操作直至获取所有需要用于制片的组织。本方案也可用于分离翅、平衡棒、腿和生殖原基盘组织（图&#160;1B-E）。</li>
	<li>在解剖皿中相距约3英寸处放置两小片大小与盖玻片相当的滤纸。将一张载玻片置于解剖皿上，使滤纸分别位于载玻片两端下方，以防止载玻片粘附在解剖皿的硅胶底面上。</li>
	<li>使用P-20移液器配合未剪切的枪头，向载玻片中央加入9 µl抗荧光淬灭剂，以防止组织在荧光显微镜观察过程中发生荧光淬灭。</li>
	<li>用同一支未剪切的枪头收集所有眼-触角盘，并将其加入抗淬灭剂液滴中。尽量减少携带的洗涤缓冲液体积，控制在10 µl或以下。</li>
	<li>用一对镊子在抗淬灭剂液滴内将眼-触角盘分开并铺展开。让组织在抗淬灭剂中孵育数分钟。注意：随着组织吸收抗淬灭剂，盘会逐渐变透明。</li>
	<li>用细毛刷轻轻将盖玻片覆盖在样本上，以避免产生气泡。</li>
	<li>将制好的载玻片存放在-20 °C环境中，待后续使用光学显微镜或荧光显微镜观察眼-触角盘或其他原基盘组织。</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

尽管本方案主要侧重于眼-触角盘的分离及后续处理，但也可用于分离和分析翅、平衡棒、足和生殖盘（图&#160;4）。与其他盘（如眼-触角盘）相比，分离这些盘所需的唯一修改在于粗解剖方法（方案第2节）。第一胸节足（T1）成对位于幼虫前端，可按照眼-触角盘分离方案进行回收。然而，第二胸节足（T2）盘附着于体壁。为分离这些盘，应使用一对镊子夹住口钩（如上所述），同时用另一对镊子夹住动物腹侧体壁（确保夹取位置距口钩约1/3体长处），然后通过撕开腹侧体壁的方式将幼虫剖开，T2足将保留在体壁上。第三胸节（T3）足与翅和平衡棒盘共同组成一个复合体，该复合体也附着于体壁。此时可选择将盘复合体和T2足从体壁上分离，也可在后续固定/抗体孵育步骤中保持体壁-盘复合体完整，并在精细解剖阶段（方案第4节）再分离各盘。对于生殖盘的回收，建议用一对镊子夹住幼虫中段，再用另一对镊子从腹侧中段开始向后端剥离体壁。推荐使用镊子清除所有多余组织，然后用P-200移液器配合切去末端的黄色枪头，将生殖盘转移至固定液中。
该方法最适合厚度有限的组织，例如成虫盘，且当所用抗体具有高滴度和高特异性时...

一个多世纪以来，果蝇（Drosophila melanogaster）一直是研究发育、行为和生理学的首选模式系统。果蝇的发育可分为两个主要阶段：胚胎期和胚后期，其中后一阶段的大部分过程发生在称为成虫盘的单层上皮组织中1-3。 成虫盘的示意图最早由奥古斯特·魏斯曼（August Weismann）于1864年发表，作为其关于昆虫发育的综合性专著的一部分1。这些成虫盘在胚胎发生期间开始发育，在幼虫阶段进行模式形成，在蛹早期经历大规模组织溶解后仍能存活，并最终形成成体果蝇中大部分的成体结构1-14。在幼虫发育过程中，每个成虫盘需做出多个关键决定，包括细胞命运、形状和大小。在第一和第二龄幼虫阶段，成虫盘需确定基本命运、建立区室边界、获得正确的形态并产生所需数量的细胞15-16。在第三龄幼虫及早期前蛹阶段，成虫盘继续进行细胞分裂，同时细胞逐步确定其终末命运，完成模式构建16。
在果蝇（Drosophila）发育生物学的早期研究中，成虫盘几乎仅在正常发育背景下进行研究，仅在少数功能缺失或功能获得性突变体能够存活的情况下才被分析。利用X射线诱导有丝分裂重组的方法，使得在幼虫和成体组织中的细胞克隆内分析致死性突变成为可能。随着转基因技术的引入，该方法得到改进，可用于在幼虫和成体组织中分析功能缺失和功能获得性突变。此外，用于描述野生型和突变型组织分子图谱的抗体、转录报告基因以及蛋白质捕获工具的数量也在持续增长。利用这些分子标记物来分析功能缺失和功能获得性突变的细胞克隆，使得实时理解突变细胞在发育过程中如何偏离其野生型同类变得日益可行。为了充分有效地利用这些工具和试剂，获得高质量的成虫盘样本以供观察、拍照和分析至关重要。本论文的目标是提供一种优化的方案，用于分离和制备眼-触角成虫盘复合体（图&#160;1A）。该方法也可成功用于分离多种其他类型的成虫盘，包括发育为翅、平衡棒、T1-T3足以及生殖器的成虫盘（图&#160;1B-E）。此操作流程经过少量修改后，已用于果蝇（Drosophila）成虫盘的分离近八十年之久。
如上所述，由于大多数基因在发育的多个阶段以及多种组织中均有表达，因此通常难以研究无效突变体对整个眼睛的影响，因为动物在到达三龄幼虫阶段之前便已死亡。目前已有四种方法使对视网膜等较成熟组织的研究变得更加可行。第一种是Flippase（FLP）/Flippase Recombination Target（FRT）方法，可在整体为野生型的组织中产生突变细胞克隆17-19。在此方法中，突变组织通过缺乏绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）等可视标记物来识别，并可与周围表达GFP的野生型组织进行比较（图&#160;2D）。第二种是“flp-out”方法，即在一群细胞中诱导转基因表达20。在此情况下，细胞克隆通过GFP的存在来识别，并与周围缺乏GFP报告基因的野生型组织进行比较（图&#160;2E）。第三种是可抑制性细胞标记嵌合体分析（Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker, MARCM）技术，该技术结合了FLP/FRT突变克隆与flp-out表达系统的要素21。通过该方法，可在一群同时对某一遗传位点呈突变状态的细胞中表达转基因。与flp-out克隆类似，MARCM克隆通过GFP的存在来识别，并与周围缺乏GFP标记的野生型组织进行比较（图&#160;2F）。最后一种方法是利用特定的启动子-GAL4构建体，在成虫盘组织中表达基因或RNAi构建体。这四种方法提高了人们对成虫盘研究的兴趣，因为突变或过表达的克隆或表达模式可直接与邻近的野生型组织进行比较。本实验方案所描述的方法旨在帮助研究黑腹果蝇（Drosophila）成体组织胚后发育的研究人员，特别是研究眼-触角成虫盘来源组织的研究者，能够获得高质量的组织用于分析。尽管个别研究者对该方法进行了细微调整，但其核心步骤（本文所述内容）基本保持不变。由于获取高质量组织对于成虫盘研究至关重要，我们希望本书面实验方案及配套视频能成为有价值的教育资源。

<table><tbody><tr><td>Sylgard 184 硅酮弹性体试剂盒</td><td>Dow Corning</td><td>184 SIL ELAST KIT 0.5 KG</td><td>用于制作解剖板的基底</td></tr><tr><td>Pryex 玻璃培养皿 150 x 20 mm</td><td>Dow Corning</td><td>3160-152CO</td><td>用其盖子作为解剖板</td></tr><tr><td>#5 解剖镊</td><td>Ted Pella</td><td>525</td><td>镊子必须保持非常锋利</td></tr><tr><td>9 孔表面皿</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>用于固定成虫盘复合体</td></tr><tr><td>50 ml 锥形烧瓶</td><td>Various Vendors</td><td></td><td></td></tr><tr><td>小型搅拌子</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>尺寸需足够小以放入锥形烧瓶中</td></tr><tr><td>50 ml 离心管</td><td>Various Vendors</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml 微量离心管</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>根据应用选择透明或避光管</td></tr><tr><td>微量离心管架</td><td>Various Vendors</td><td></td><td></td></tr><tr><td>台式旋转混合仪</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>低速设置下 100 &amp;#956;l 体积不应产生飞溅</td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>Macron Chemicals</td><td>2-26555-1</td><td>用作固定剂</td></tr><tr><td>磷酸二氢钠</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>S-3139</td><td>用于配制解剖和洗涤缓冲液</td></tr><tr><td>磷酸氢二钠</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>71636</td><td>用于配制解剖和洗涤缓冲液</td></tr><tr><td>赖氨酸</td><td>Acros Organics</td><td>125221000</td><td>用于固定液溶液中</td></tr><tr><td>高碘酸钠</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>S-1878</td><td>用于固定液溶液中</td></tr><tr><td>吐温 X-100</td><td>EMD Chemicals</td><td>MTX1568-1</td><td>用于穿孔处理成虫盘</td></tr><tr><td>氢氧化钠</td><td>EM Science</td><td>SX0593-3</td><td>用于溶解多聚甲醛</td></tr><tr><td>100% 正常山羊血清</td><td>Jackson Laboratories</td><td>005-000-121</td><td>用作封闭溶液</td></tr><tr><td>一抗</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>按生产商说明用 10% 山羊血清稀释</td></tr><tr><td>二抗</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>按生产商说明用 10% 山羊血清稀释</td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Molecular Probes</td><td>H-1000</td><td>防止样品荧光淬灭</td></tr><tr><td>显微镜载玻片</td><td>Fischer Scientific</td><td>48312-003</td><td></td></tr><tr><td>玻璃盖玻片 18 x 18 mm</td><td>Fischer Scientific</td><td>12-542A</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe 擦镜纸</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>防止载玻片粘附于硅胶基底</td></tr><tr><td>Panit 000 号画笔</td><td>Various Vendors</td><td></td><td>用于轻柔地将盖玻片覆盖在样品上</td></tr></tbody></table>

黑腹果蝇drosophila melanogaster幼虫盘的解剖与免疫染色

Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

在果蝇Drosophila melanogaster的胚后发育过程中，很大一部分发生在一组囊状结构——成虫盘（imaginal discs）中。这些成虫盘发育为成体果蝇体内绝大多数的成体结构。本文描述了一种经过优化的实验方案，用于回收这些成虫盘并使其适用于抗体、转录报告基因和蛋白质捕获标记的分析。该方案最适合用于成虫盘等较薄的组织，但也可稍作修改后用于较厚的组织，如幼虫大脑和成体卵巢。书面协议及配套视频将指导读者/观看者完成三龄幼虫的解剖、组织固定以及成虫盘的抗体处理。该方案也可用于解剖较年轻的的一龄和二龄幼虫的成虫盘。本方案的优点在于步骤相对简短，并且已针对解剖后组织的高质量保存进行了优化。另一个优点是所采用的固定程序与绝大多数识别Drosophila蛋白的抗体具有良好兼容性。根据我们的经验，仅有极少数敏感抗体不适用于此固定方法。在此类情况下，补救措施似乎是改用其他固定液配方，同时继续遵循我们在解剖步骤和抗体孵育方面所设定的操作规范。

上述方法可稳定地制备出高质量的分析用材料 原位 探针、转录报告基因、蛋白质捕获工具和抗体。在 图1 我们展示了通过该方法常规获得的眼-触角、生殖器、翅、平衡棒和腿成虫盘。这些成虫盘经鬼笔环肽偶联的荧光染料处理，该染料可结合F-肌动蛋白，从而标记每个细胞的轮廓。若组织固定得当，眼成虫盘中的形态发生沟、生殖器、触角和腿成虫盘中同心环状组织褶皱的边缘，以及翅和平衡棒成虫盘的背腹轴均会呈现清晰的边界。若组织固定良好，则抗体、荧光蛋白及 原位 探针也将显示出清晰的图案。以下是几个示例。 图2上方三个图显示了用不同抗体染色的圆盘，下方三个图显示了利用GFP标记细胞群体的圆盘。
眼-触角盘最显著的特征之一是形态发生沟（图 1A），其在组织中表现为沿背腹轴延伸的一道凹陷1, 22。在三龄幼虫期之前，发育中的眼区所有细胞均未形成模式、未分化，且在形态上彼此无法区分。在三龄幼虫期开始时，形态发生沟从眼区的后缘启动，并向前推进至眼-触角边界<su...

成体结构 果蝇 来源于一种称为成虫盘的囊状结构。对这些成虫盘的分析有助于深入了解多种发育过程，包括组织决定、区室边界建立、细胞增殖、细胞命运特化以及平面细胞极性。本实验方案用于制备适用于光学/荧光显微镜观察的成虫盘。

黑腹果蝇Drosophila melanogaster幼虫盘的解剖与免疫染色

果蝇（Drosophila melanogaster）的大部分胚后发育过程发生在一组囊状结构内，这些结构称为……

本实验的总体目标是从果蝇幼虫中解离出成虫盘，用于免疫组织化学分析。首先，从幼虫中移除头部复合体，包括口器、钩状结构、眼盘、触角盘和脑组织。第二步是固定头部复合体，并用一抗和二抗进行孵育。随后，将眼盘和触角盘从头部复合体中分离出来。最后一步是将成虫盘组织用抗淬灭剂封片于载玻片上。最终，通过荧光显微镜观察荧光报告基因或LAC Z报告基因以及抗体染色结果，可以揭示基因和蛋白质在成虫盘组织中的时空表达模式。尽管该技术可用于研究整个成虫盘中基因和蛋白质的定位。它也可应用于其他成虫盘组织，例如翅腿和平衡棒。开始实验时，用解剖缓冲液填充一个35毫米的培养皿。将10至20条幼虫放入培养皿中，使其游动五分钟。为了使用工具进行自我清洁，先在硅基解剖板中央制备一个较大的解剖缓冲液池。在大液滴周围放置三个较小的液滴，并用镊子将幼虫转移至最下方的小液滴中。接着，使用5号镊子将一只已清洁的幼虫从较小的液滴转移至较大的解剖缓冲液池中。开始粗分离时，用一对镊子夹住口钩，另一对镊子轻轻夹住幼虫。在距其体长三分之一处固定住口钩，然后用第二对镊子迅速将虫体其余部分拉离。松开镊子，使幼虫内脏自然逸出，从而让成虫盘保持其正常形态。然后夹住口钩，用另一把镊子移除幼虫下半部分的三分之二，包括内部肠道。接着，轻柔地去除唾液腺、足成虫盘及其他组织。应保留的组织仅有少量上覆的角质层、口钩、眼和端盘、脑半球以及腹神经节。在最多20分钟后，将所有解剖得到的组织转移至多聚甲醛-赖氨酸-高碘酸盐固定液中。固定样本或使用PLP固定液。解剖后的成虫盘组织在解剖缓冲液中停留时间不得超过20分钟，否则组织将发生降解。将解剖得到的组织以100 µL为单位分批转移至含有冷PLP的表面皿中。使用一对镊子确保已解剖的组织完全浸没。将已解剖的组织在室温下置于冷 PLP 固定液中孵育 45 分钟，不振荡。接着，将 100 微升已解剖的组织从 PLP 转移至洗涤缓冲液中。确保组织完全浸没，并在室温下静置孵育45分钟。然后将分离的组织转移至1.5毫升微量离心管中。吸除洗涤缓冲液，并加入100微升封闭液替代。将组织置于室温下，在台式旋转仪上轻轻旋转孵育10分钟。封闭后，移除溶液，并加入100 µL含10%正常山羊血清的一抗溶液。根据抗体的强度，将组织在室温下轻轻旋转孵育16小时。接下来，移除一抗，并加入 750 微升洗涤缓冲液。将离心管置于室温摇床上孵育 10 分钟。从摇床上取出离心管，静置使组织沉降至管底。然后移除洗涤缓冲液，并加入100微升含10%正常血清的二抗溶液。根据抗体强度，将试管在室温下轻轻旋转孵育至少2小时。孵育结束后，从组织中移除二抗溶液。加入 500 微升洗涤缓冲液，使组织沉降至管底。在硅胶解剖板上放置三份洗涤缓冲液。将所有解剖得到的组织转移至解剖皿上较大的洗涤缓冲液池中。这有助于去除多余的二抗，开始精细解剖。将头部复合体腹面朝下放置，用镊子夹住口钩。将第二把镊子插入大脑与眼盘之间的空隙，迅速将大脑从口钩处拉开，以分离两个脑叶，同时继续夹住口钩。尽可能靠近眼-触角盘的触角部分与口钩之间的连接处，将组织剪断。继续操作直至所有目标组织均被分离。随后，将两小片大小与盖玻片相当的滤纸置于解剖皿中，间隔约三英寸。将载玻片放置于这两片滤纸上，以防止载玻片粘附在解剖皿的硅胶底座上。使用 P20 移液器，在玻璃显微镜载玻片中央加入 9 µL 抗淬灭剂，以防止组织荧光发生漂白；使用同一未切割的吸头，收集所有幼虫盘和成虫盘，并将其加入抗淬灭剂液滴中。接着，用镊子在抗淬灭剂液滴内将眼-成虫盘分开并铺展开，确保没有任何两个成虫盘相互接触。然后，使用细毛刷轻轻将盖玻片缓慢放入抗淬灭剂液滴上，避免产生气泡。最后，将载玻片储存于负20摄氏度，直至准备使用明场或荧光显微镜观察和成像离子顶盘。该方法可稳定地制备出高质量的分析样本，如这些成像盘的共聚焦图像所示。这些成像盘经鬼笔环肽偶联的荧光染料处理，该染料可结合F-肌动蛋白，从而勾勒出每个细胞的轮廓。眼盘最显著的特征之一是形态发生沟，可在组织内观察到沿背腹轴延伸的凹陷结构。随着形态发生沟在眼区中推进，无序排列的细胞群体被转化为周期性间隔排列的规则小眼单元，即小眼（ommatidia）。该方法的后续应用包括克隆表达的验证以及对幼虫成体盘的分析。上方三个图显示了使用不同抗体染色的碟状结构，例如 ilis、A DPP、LAC Z 转录报告基因，以及细胞特异性标记物，如胚胎致死性异常视觉（embryonic, lethal, abnormal vision）或 vy，后者编码一种泛神经元 RNA 结合蛋白。下方三个图展示了利用 GFP 标记特定细胞群体的碟状结构。一旦熟练掌握该操作流程，从 10 至 20 条幼虫中分离头部复合体约需 10 分钟，此外，从这些复合体中精细分离离子碟状结构也大约需要 10 分钟。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

解剖和免疫染色成虫盘的果蝇

本实验方案演示了从三龄幼虫阶段的果蝇幼虫中分离成虫盘的解剖技术。在解剖后，直接在显微镜载玻片上对组织进行固定，并展示去除翅、腿和眼成虫盘的方法，以便后续观察。...

解剖3龄黑腹果蝇幼虫的成虫盘

我们描述了一种新型的红色荧光蛋白（RFP）报告基因，该报告基因特异性地在黑腹果蝇（Drosophila）眼部表达。本文详细介绍了眼成虫盘的解剖方法，以及如何利用该报告基因辅助解剖并鉴定发育过程中眼部的特定细胞类型。...

一种新型RFP报告系统有助于可视化果蝇复眼原基盘 果蝇

Drosophila melanogaster 的神经肌肉接头（NMJ）是研究正常突触功能以及某些神经系统疾病中突触功能异常的重要模型系统。本文介绍了一种用于解剖 Drosophila 幼虫运动系统的实验方案，以及对 NMJ...

活性区的分离与成像 果蝇 神经肌肉接头

抗体染色 果蝇 蛹可增强对成虫腹部发育遗传学的基因分析。我们介绍了针对分期蛹的解剖、固定及抗体染色的实验方案。 黑腹果蝇...

Drosophila 蛹腹部免疫组织化学

果蝇（Drosophila）视网膜是一种晶体状的晶格结构，由少数几种以固定模式生成的细胞类型组成1。其适用于复杂的遗传学分析，可用于研究复杂的发育程序。本实验方案描述了在三个不同发育阶段进行视网膜解剖及免疫组织化学的方法，重点聚焦于光感受器细胞的分化过程。...

幼虫、蛹及成虫 Drosophila 视网膜的解剖与免疫组织化学

在对Drosophila成虫盘进行染色时，通常先进行粗略解剖，使成虫盘暴露但仍与身体相连。染色完成后，再分离出目标成虫盘并进行封片。本示例方案演示了翅成虫盘的解剖与封片操作流程。...

Drosophila 幼虫成虫盘解剖：一种观察发育中上皮组织的方法

该技术的目的是使研究人员能够对任意年龄的黑腹果蝇（Drosophila...

Drosophila 蛹眼成虫盘的解剖与制片

本实验方案演示了如何在果蝇（Drosophila）眼/触角成虫盘（EAD）中生成带有荧光标记且遗传背景明确的克隆肿瘤。方案详细描述了如何从三龄幼虫中解剖出EAD和脑组织，并对其进行处理，以观察和定量基因表达变化及肿瘤侵袭性。...

Drosophila 幼虫盘肿瘤模型：利用遗传镶嵌体可视化与定量分析基因表达及肿瘤侵袭性

本文提供了一种用于活体成像晚期胚胎期黑腹果蝇（Drosophila）雄性生殖腺的解剖方案。该方案可用于在正常条件下，或经过转基因操作及药物干预后，观察细胞内的动态过程。...

晚期胚胎的解剖与活体成像 果蝇 性腺

我们描述了一种利用基于GFP重组的方法，在活体果蝇翅成虫盘中测量相邻上皮层细胞间接触的实验方案。...

基于GFP互补的双表达系统用于活体评估由细胞突起介导的细胞间接触 果蝇 翅成虫盘

本文介绍了一种高效且节省试剂的成虫盘解剖与抗体染色方案，便于对少量成虫盘进行操作和处理。...

果蝇（Drosophila melanogaster）眼部-触角及翅成虫盘的小规模解剖与抗体染色

学习解剖果蝇幼虫成虫盘并进行免疫组织化学染色的标准方法。该方案利用荧光显微镜揭示基因和蛋白质在眼触角盘等组织中的时空表达模式，为发育生物学研究提供可靠技术。

黑腹果蝇Drosophila melanogaster幼虫盘的解剖与免疫染色

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