Name: 一个高度可重复的和直接的方法来执行体内眼剜除术中的鼠标眼睛开放后 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: 学习小鼠体内眼球摘除术，通过钳夹视神经实现快速、低出血的眼剜除操作。该方法可重复性强，适用于研究视觉可塑性与感觉剥夺对大脑的影响。

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我们感谢Ellen Ytebrouck在大鼠方法应用方面提供的宝贵信息。本研究工作得到了鲁汶大学研究委员会（OT09/22）和弗兰德斯科学研究基金（FWO Vlaanderen）的支持。Jeroen Aerts获得了弗兰德斯科学与技术创新局（IWT Vlaanderen）博士奖学金的资助，Julie Nys获得了FWO弗兰德斯博士研究基金的资助。

所有实验均经鲁汶大学（KU Leuven）伦理研究委员会批准，严格遵守2010年9月22日欧洲共同体理事会指令（2010/63/EU）以及比利时法律法规（2013年5月29日皇家法令）。我们尽一切可能减轻动物痛苦，并尽量减少动物使用数量。
1. 动物处理与麻醉
<ol>
	<li>通过腹腔注射盐水配制的盐酸氯胺酮（75 mg/ml）和盐酸美托咪啶（1 mg/kg）混合物麻醉小鼠。</li>
	<li>用镊子轻夹脚趾检查反射，确认小鼠已完全镇静。</li>
	<li>使用棉签蘸取70%乙醇消毒眼睑及眼部周围区域。检查眼睑反射以进一步评估镇静程度。</li>
</ol>
2. 摘除眼球
<ol>
	<li>确保动物处于平坦、干燥且光滑的表面上。</li>
	<li>使用镊子（推荐使用带锯齿的弯曲尖端，尖端尺寸：0.5 × 0.4 mm）并进行灭菌处理。</li>
	<li>用镊子轻轻按压眼角（眼睛的外角），直至眼球从眼窝中移位，视神经暴露可及。</li>
	<li>将镊子引导至眼球后方，牢固夹住视神经，&#160;建议使用镊子弯曲处的起始部分而非最尖端进行夹持。这有助于将眼球完全从眼窝中提起，并夹紧整个视神经。</li>
	<li>保持小鼠位于平坦表面上，用手持镊子做圆周运动，沿阻力最小的方向旋转。小鼠会随着手部运动方向在表面上随之摆动。</li>
	<li>逐渐加快旋转速度，直至视神经被完全绞断（通常需7至15次圆周运动，每秒约半圈至一圈）。此时，眼球即被完全摘除。</li>
</ol>
3. 术后护理
<ol>
	<li>若发生出血（罕见情况），用黏稠的凝固剂和止血剂填充眼眶。</li>
	<li>通过腹腔注射盐水溶解的1 mg/kg阿替美唑盐酸盐来逆转麻醉作用。</li>
	<li>每24小时腹腔注射1 mg/kg美洛昔康以缓解疼痛&#160;。</li>
	<li>对保留的眼睛涂抹眼膏，以防止角膜脱水。</li>
	<li>将动物置于加热板上，或用隔热材料包裹后放入单独的笼子中，以控制体温。</li>
	<li>至少连续2天每天测量小鼠体重&#160;。体重下降可能提示动物痛苦，在此情况下应持续给予美洛昔康治疗，直至动物完全恢复。</li>
</ol>

<ol><li>Toldi, J., Fehér, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+%28and+binocular%29+enucleation%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li>
<li>Steeves, J. K. E., González, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vision+with+one+eye%3A+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation%5BTitle%5D)+AND+%22Spatial+vision%22%5BJournal%5D)">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li>
<li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li>
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<li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush%3A+A+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Research%22%5BJournal%5D)">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li>
<li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice%3A+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li>
<li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li>
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<li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li>
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<li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li>
<li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061(2012).</li>
<li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%3A+Clinical%22%5BJournal%5D)">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li>
<li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat%3A+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li>
<li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+behavior%22%5BJournal%5D)">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology & behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li>
<li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li>
<li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Okajimas+folia+anatomica+Japonica%22%5BJournal%5D)">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li>
<li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li>
<li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li>
<li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

根据我们的方法进行成功的去核操作时，需考虑最关键的步骤包括：1）使用尖端呈适当尺寸的弯曲且带齿的镊子；2）在光滑且干燥的表面上进行去核操作；3）沿摩擦最小的方向逐渐加快环形运动的速度。
为获得理想效果，必须使用具有弯曲且带齿尖端的镊子（推荐尖端尺寸：小鼠：0.5 × 0.4 mm；大鼠：2.15 × 1.3 mm）。弯曲设计有助于眼球移位后顺利接触视神经，并在执行环形操作时确保手部正确放置。不推荐使用光滑尖端的镊子，因其在夹持视神经时无法提供足够的抓握力。若在环形操作过程中未能稳妥夹持视神经，可能导致眼动脉破裂、眼球剥离不充分，从而影响实验的可重复性。&#160;因此，建议首先在已实施安乐死的动物上练习该技术，以优化镊子的操作手法，从而在实际应用该方法时确保动物福利的最大化 体内在本实验室，近期已采用相同技术成功完成大鼠的眼球摘除手术，唯一不同之处在于手动转动动物体位，而保持镊子固定不动。
该技术的一个局限性是可能对视网膜造成损伤。因此，该方法不太适用于采集视网膜进行组织学分析5。此外，我们的方法仅限于眼睑张开后的年龄段，因为需要在不移除或切割眼睑的情况下将眼球从眼窝中移位。
在不同物种（包括啮齿类动物）中进行眼球摘除手术通常采用多种替代方法，这些方法往往需要切除眼睑并切断视神经18,23-25。与本文所述技术相比，这些方法更具侵入性，且学习难度更高。本方法无需切除或缝合眼睑，从而最大限度地缩短了术后恢复时间，提高了动物福利，并获得更可重复的实验结果。

摘除眼球从而不可逆地破坏感觉受体表面（视网膜），会导致视觉通路中的感觉输入显著丧失。在青少年和成年视觉系统中，眼球摘除模型已被证明对于理解不同视觉中枢的发育、可塑性及功能具有重要价值1-4。这种感觉剥夺所引发的分子、细胞和生理学后果，有助于揭示正常发育过程是如何被调控的，以及既有的皮层环路如何应对并改变其结构与功能，以响应此类重大的经验改变。
存在多种视觉剥夺方法，每种方法在视觉相关研究中都有其特定优势。例如，暗室饲养可特异性消除视觉驱动的活动，但不影响视网膜的自发性活动。类似地，眼睑缝合或佩戴眼罩可去除模式化视觉输入，同时不干扰自发性活动，但允许弥散光透过闭合的眼睑进入眼内。这些方法具有可逆性，已被证明在理解模式化视觉以及双眼输入的低水平相关性在发育过程中塑造皮层环路中的作用方面具有重要价值6-8。在青光眼研究中，成年动物的视神经 crush 模型被广泛使用，因为它可建立一种渐进性的视网膜神经节细胞输入丧失，而这些细胞构成了视神经的主要成分9,10。另一方面，眼球摘除术（enucleation）通过完全且即时地移除眼球及视网膜，是在需要不可逆地同时消除自发性和模式化视觉输入时的合适选择。该方法还可诱导强烈的 intraocular 活动失衡，从而在活动图谱研究中增强信噪比11,12。将眼球摘除后所引发的功能与结构变化，与眼睑缝合等较温和剥夺方法后的变化进行比较，可能进一步揭示自发性视网膜活动在稳态可塑性和突触可塑性中的作用。
去核术会引发直接视网膜靶区营养影响的丧失。例如，脑源性神经营养因子（BDNF）的水平在成年去核大鼠的外侧膝状体核（LGN）和上丘中显著下调13。作为介导结构重塑的信使分子的活性氧物质，也在成年大鼠视觉系统的皮层下结构中被检测到14。此外，在小鼠不同皮层下视觉靶区结构中，小胶质细胞和星形胶质细胞的活化发生在去核后特定的一周时间窗内15。综上所述，视神经去传入在胶质细胞、结构和分子水平上引起不同的皮层下反应。尽管存在这些皮层下效应，但并不必然意味着皮层水平也会受到影响16。值得注意的是，跨模态皮层可塑性在单眼（ME）3,4,17,18和双眼（BE）1,17去核术后均会发生，包括非视觉输入向被剥夺视觉皮层的强化以及邻近其他感觉区域的改变。
除了对视觉神经科学做出贡献外，去传入（去神经传入）作为一种去传入类型，还可用于研究中枢神经系统神经保护19与神经退行性特性20-22之间的平衡。
文献中已描述了多种进行去核操作的不同方法。某些去核技术 体内 由于需要对眼眶肌肉和组织进行不必要的切片，大鼠和小鼠的ME操作较为复杂23-25. 其他出版物，例如 Mahajan 等 (2011)5 提供一种使用钝性解剖法高效收集眼球的详细方案，用于研究基因型-表型关联，可能在死后进行。该方法因其便捷和快速，适用于其特定目的。然而，此方法较不适用于 体内 去眼球术，当研究者选择在活体动物中研究去眼球术后传入视觉通路而非眼球本身时。在这种情况下，去眼球术后的存活率至关重要。此外，应尽量减少 体内 视神经和眶内组织的损伤较小且保存良好。在此，我们介绍一种改良的眼球摘除方法，该方法更接近Faguet所描述的方法 等 (2008)26，具有某些优势特性：术后恢复迅速，且研究人员的学习门槛极低。通常情况下，不同方法可根据后续研究的重点——眼部形态学或视觉通路研究——相互补充。
总之，去核技术可应用于从视觉研究到稳态及跨模态脑可塑性、胶质细胞反应特性以及轴突稳定性的研究。在本可视化文章中，我们展示了一种可行且可靠的去核方法 体内 小鼠眼球摘除术

<table><tbody><tr><td>盐酸氯胺酮（Anesketin）</td><td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td><td>BE-V136516</td><td></td></tr><tr><td>盐酸美托咪啶（Domitor）</td><td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td><td>BE-V151742</td><td></td></tr><tr><td>盐酸阿替米唑（Antisedan）</td><td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td><td>BE-V153352</td><td></td></tr><tr><td>抗生素（头孢唑啉，Kefzol）</td><td>Eurocept Pharmaceuticals</td><td>BE 106267</td><td></td></tr><tr><td>眼膏（Fucithalmic）</td><td>Leo Pharma nv-sa</td><td>BE 144654</td><td></td></tr><tr><td>Moria MC31 镊子 - 带齿弯头</td><td>Fine Science Tools</td><td>11370-31</td><td>适用于小鼠。只要镊尖呈弯曲且带齿，任何尺寸相似的镊子均可使用。</td></tr><tr><td>窄头型弯镊</td><td>Fine Science Tools</td><td>11003-13</td><td>适用于大鼠。只要镊尖呈弯曲且带齿，任何尺寸相似的镊子均可使用。</td></tr><tr><td>止血棉球</td><td>Qualiphar</td><td>N/A</td><td>其他止血剂同样适用（&lt;em&gt;例如&lt;/em&gt;，Viscostat，#649，Ultradent Products）</td></tr></tbody></table>

一种高度可重复且简便的实验操作方法 体内 小鼠睁眼后的摘眼球术

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

眼球摘除或手术切除眼睛通常可作为神经去传入的模型。该方法为研究哺乳动物视觉系统中视觉、跨模态及发育可塑性的各个方面提供了有价值的工具1-4。
本文展示了一种优雅且简便的小鼠单眼或双眼摘除技术，该技术已在出生20天至成年小鼠中得到验证。简而言之，使用一把已消毒的弯头镊子夹住眼球后方的视神经，随后进行环形运动以收缩视神经并摘除眼球。该技术的优点包括高度可重复性、几乎无出血、术后恢复迅速，且实验人员的学习门槛极低。因此，可在最小工作量下对大量动物进行操作和处理。此技术在操作过程中可能对视网膜造成轻微损伤，若研究目标为收集和分析视网膜组织，则该方法相较于Mahajan et al. (2011)5 的方法适用性较低。此外，本方法仅适用于睁眼后的年龄段（小鼠：P10–13及以上），因为摘除时需在不切开眼睑的情况下将眼球从眼窝中移出。本文所描述的体内眼球摘除技术近期已在大鼠中通过少量修改成功应用，表明其在研究啮齿类动物传入性视觉通路方面具有广泛适用性。

图1展示了使用所述方案成功摘除眼球的结果，其特征是无出血，且眶内组织或眼窝无任何明显的物理损伤（图1A，1B）。此外，摘除的眼球角膜、脉络膜及视盘表面光滑，表明眼球结构完整无损（图1C）。由于本方案包括在眼球后方夹闭视神经并进行机械旋转，因此摘除的眼球在视网膜基底部可见视神经受压变窄（图1D）。采用该操作方法可获得整齐切断的视神经，同时不损伤周围脑组织区域（图1E）。
单眼摘除结合活动图谱绘制（图2），可清晰界定小鼠对侧视觉皮层中的功能特异性或眼源性输入区域12,27，甚至可在灵长类等高等哺乳动物中界定眼优势柱28。
在小鼠实验中，通过摘除单眼（ME）或双眼（BE），并结合特定的视觉刺激以及检测zif268 mRNA 或 c-Fos 蛋白的表达水平，以揭示视觉皮层中的区域性神经元激活情况12,27。与接受视觉刺激的对照组相比（图2A），双眼摘除小鼠由于完全缺乏视觉输入，在视觉皮层中仅表现出基础水平的活动（图2B）。因此，可以清晰分辨出视觉皮层与非视觉皮层之间的边界（即在更靠前的脑区为体感皮层，而在更靠后的脑区为听觉皮层）。单眼摘除小鼠在术后存活一周的结果显示，对侧视觉皮层中存在与特定眼输入对应的区域。这两个由单眼驱动的区域活性较低，分别位于中央双眼区的内侧和外侧（图2C）。
<img alt="小鼠解剖学研究；图像显示眼球摘除（A-C）和脑组织解剖（E）" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 眼球摘除后眼眶状态、摘除眼球及视神经的定性评估。 使用弯头镊子摘除眼球后（A），眼眶内未见出血或损伤（B）。摘除的眼球完整无损，角膜和脉络膜形态正常（C,D）。视神经在离开眼球的视盘处变窄（D）。对脑腹侧部分进行检查，可见视神经被整齐切断（星号），其他结构无明显损伤（E）。C、D 中的比例尺：1 mm；E 中的比例尺：5 mm。A：前部；L：左侧；P：后部；R：右侧。
<img alt="神经连接图，小鼠脑部分析，视觉处理通路，实验数据。" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig2highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. 通过去眼球术揭示的小鼠视觉皮层中功能性的、眼输入特异性分区。连接眼睛与皮层的黑色和灰色线条代表视网膜传入纤维的交叉以及眼特异性输入区域。通过放射性原位杂交（ISH）检测zif268（灰度图像），在Bregma水平约-3.40 mm的冠状切面上可视化对照组（A）、单侧去眼球（BE）（B）和双侧去眼球（ME）（C）小鼠的神经活动。在对照组动物（A）中，双侧半球的视觉皮层在视觉刺激后均表现出高水平的活动。当一只或两只眼睛被摘除后，相应的去传入皮层区域中活动信号明显减弱。单侧去眼球（C）小鼠在视觉皮层的双眼区显示出一个高活性区域，其周围单眼区的信号降低，这些单眼区位于被摘除眼睛的对侧。比例尺：2 mm。经Van Brussel 等12许可重印。

摘除眼球，也称为去眼球术（enucleation），是一种研究哺乳动物视觉系统中视觉、跨模态及发育可塑性的重要策略，因为它可诱导不可逆的部分（单眼）或完全（双眼）视力丧失。本文介绍了一种高度可重复且简便的方法，用于实施活体（in vivo）去眼球术。

去核术或眼球的手术摘除通常可作为神经去传入的模型。它为研究……提供了一种有价值的工具。

本实验方案的总体目标是以一种极为直接且可重复的方式，成功地从一只麻醉小鼠身上摘除眼球。首先，使用弯头镊子轻轻按压眼角部位，使眼球移位。该操作的第二步是将镊子引导至眼球后方，牢固夹住视神经。第三步是做环形运动。用持镊子的手带动小鼠身体朝同一方向移动。最后一步是逐渐加快运动速度，以确保视神经收缩，从而导致眼球脱离。最终，可以通过该方法对小鼠大脑中不同的感觉剥夺可塑性过程进行研究，从而纵向地探究 AFR 视觉通路。与现有常用缝合和钝性分离的方法相比，本技术的主要优势在于，我们的方法仅基于视神经的结扎，因而几乎无出血或出血极少，且易于掌握。首先通过腹腔注射氯胺酮与甲苯噻嗪的生理盐水混合液，对小鼠进行麻醉。通过检查小鼠的反射来确认麻醉效果。用镊子轻捏脚趾，观察是否存在反射反应。若无反应，则使用棉签蘸取70%乙醇清洁眼睑及眼部周围区域。若无眨眼反应，则进行眼球摘除。将小鼠置于稳定、平坦、光滑且干燥的表面上。使用玻璃珠灭菌器对弯齿镊的尖端进行灭菌。最佳的镊子尖端尺寸为 0.5 乘以 0.4 毫米。接下来，用镊子轻轻按压眼角，直至眼球从眼窝中移出，使视神经能够被触及。然后将镊子引导至眼球后方，牢固地夹住视神经并保持夹持状态，缓慢沿阻力最小的方向做环形移动。将小鼠紧贴手术台并固定好，其身体也应随之移动。逐渐加快速度，直至经过7到15次环形运动后，视神经收缩，眼球脱离。如果旋转速度过快或镊子牵拉过猛，神经将过早断裂，随之会出现挣扎现象。首先开始逆转麻醉状态。向小鼠腹腔注射盐水中溶解的 aamaz all 盐酸盐。然后，肌肉注射0.05毫升配制好的止痛药（如美洛昔康），镇痛药应每24小时给药一次。现在，将眼膏涂抹于另一只眼睛，以防止角膜脱水。如果在手术前应用，它会涂抹到桌面上。将小鼠移至饲养笼，恢复期间使用加热板或保温毯控制小鼠体温，当动物恢复运动控制能力后，将其转移回原饲养笼。成功摘除眼球的特征是无出血，且眶内组织或眼窝无任何明显的物理损伤。去核的眼球应具有完整眼球的特征，例如光滑的角膜和脉络膜。视神经应在视网膜基底部变窄。动物体内残留的神经长度应呈现整齐的切口，且周围脑组织不应受损。采用这些技术进行了一项实验，随后通过放射性标记的原位杂交检测 Z 2 68 mRNA，以揭示大脑皮层中由视觉诱导的神经元活动。与接受视觉刺激的对照组小鼠相比，双眼被摘除且去除了细胞核的小鼠在左右视觉皮层中仅表现出基础水平的活动，这是由于完全缺乏视觉输入所致。因此，视觉皮层与非视觉皮层之间的边界得以显现。单眼摘除显示，在视觉皮层中，对侧于被移除染料眼的两个单眼驱动区域呈低活性。这些区域位于中央双眼区的内侧和外侧。一旦掌握，若操作得当，该技术可在不到一分钟内完成。因此，它为研究耳鼻喉视觉通路中的活动性、可塑性或其他现象提供了一种高效的方法。

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