Name: 豚鼠非终端采血技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: 学习豚鼠非终端采血技术，包括外侧隐静脉和跗静脉采血方法，适用于清醒或麻醉状态下的实验动物。本视频演示安全有效的血液采集流程，帮助研究人员掌握规范操作并确保动物福利。

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我们感谢哥本哈根大学健康与医学科学学院弗雷德里克斯堡校区实验医学系的Annie B. Kristensen、Elisabeth V. Andersen、Belinda B. Bringtoft以及动物饲养人员提供的娴熟协助。感谢Jacob Lønholdt在拍摄实验操作过程中提供的出色技术支持。本研究部分由LIFEPHARM研究中心资助 在体内 药理学与哥本哈根大学。

所示操作均根据丹麦食品、农业和渔业部下属的丹麦动物实验监察局批准的方案进行。
1. 从外侧隐静脉或跗静脉采血
<ol>
	<li>在无麻醉条件下进行此操作，需由两名研究人员协作完成，一人负责固定豚鼠，另一人负责采集样本。</li>
	<li>用电剃须刀剃除后肢跗部区域的毛发，直至静脉可见。确保剃毛范围足够大，以避免毛发干扰穿刺部位。</li>
	<li>将后肢置于温水中，轻轻揉搓腿部，使静脉更加扩张和明显。</li>
	<li>用干净的毛巾擦拭腿部，并用蘸有70%酒精的纱布或棉签对穿刺部位进行消毒。</li>
	<li>固定豚鼠，并将后肢向下伸展，同时在膝关节上方施加轻柔压力以造成静脉淤血。</li>
	<li>使用21 G针头或采血针穿刺静脉采血 例如使用收集管或毛细管采集血液。轻柔地活动腿部以促进血液流动。</li>
	<li>解除止血带，采集样本后立即进行。用一块纱布或棉球在穿刺部位轻轻按压，直至出血停止。</li>
	<li>将动物放回笼中，观察5-10分钟，以确保止血。</li>
</ol>
2. 耳静脉采血
<ol>
	<li>此操作无需麻醉，可单独进行，但最好在一位同事协助下完成。</li>
	<li>使用蘸有70%酒精的纱布或棉签对耳部背侧表面进行消毒。</li>
	<li>轻压耳根部以造成静脉血流停滞。</li>
	<li>使用21 G针头或采血针穿刺静脉，并采集血液。</li>
	<li>采样完成后解除血流停滞，立即用纱布或棉球对穿刺部位施加轻柔压力，直至出血停止。</li>
	<li>将动物放回笼中，并观察5-10分钟，确保止血完全。</li>
</ol>
3. 颈静脉采血
<ol>
	<li>此操作需在另一名研究人员协助下进行；一人负责固定豚鼠，另一人负责采集样本。</li>
	<li>在整个操作过程中，使用适当的麻醉剂对豚鼠进行麻醉。可采用替来他明（0.93 mg/kg）、唑拉西泮（0.93 mg/kg）、赛拉嗪（1.49 mg/kg）和布托啡诺（0.06 mg/kg）的混合制剂。</li>
	<li>将麻醉后的豚鼠仰卧放置，并轻轻将前肢向尾侧牵拉。</li>
	<li>剃除并消毒（例如用70%酒精擦拭颈部腹侧。</li>
	<li>采样前用肝素或EDTA润洗注射器，以降低凝血风险。</li>
	<li>触摸肩胛骨，将装有1 ml注射器的25 G（或23 G）针头在肩关节水平、距中线约1 cm处向外侧插入。注射器保持轻微向上和向内侧的角度，同时施加轻微负压。注意避免损伤深层结构，因为颈静脉位置较浅。将豚鼠颈部稍向后倾斜，以增加静脉的血液淤滞。</li>
	<li>采集血样后松开前肢，拔出针头前解除淤血状态。使用一块干燥的纱布或棉球对穿刺部位施加轻柔压力。</li>
	<li>将动物放回恢复笼中，并进行监测，以确保止血及从麻醉中恢复。</li>
</ol>

<ol><li>DeOgburn, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+increased+dietary+cholesterol+with+carbohydrate+restriction+on+hepatic+lipid+metabolism+in+Guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.Med%22%5BJournal%5D)">Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs.</a> Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).</li>
<li>Fernandez, M., Volek, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guinea+pigs+a+suitable+animal+model+to+study+lipoprotein+metabolism%2C+atherosclerosis+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation.</a> Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).</li>
<li>Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+dietary+fat+and+cholesterol+exacerbates+chronic+vitamin+C+deficiency+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nutr%22%5BJournal%5D)">High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs.</a> Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).</li>
<li>Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saphenous+vein+puncture+for+blood+sampling+of+the+mouse%2C+rat%2C+hamster%2C+gerbil%2C+guinea+pig%2C+ferret+and+mink%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink.</a> Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Guillen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FELASA+guidelines+and+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">FELASA guidelines and recommendations.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).</li>
<li>Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+fat+diets+and+pathology+in+the+guinea+pig+Atherosclerosis+or+liver+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage.</a> Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).</li>
<li>Tveden-Nyborg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+vitamin+C+deficiency+during+pregnancy+persistently+impairs+hippocampal+neurogenesis+in+offspring+of+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs.</a> PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).</li>
<li>Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+maternal+vitamin+C+deficiency+overrides+preferential+fetal+ascorbate+transport+but+does+not+influence+perinatal+survival+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs.</a> Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).</li>
<li>Greulich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretory+products+of+guinea+pig+epicardial+fat+induce+insulin+resistance+and+impair+primary+adult+rat+cardiomyocyte+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function.</a> J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).</li>
<li>Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicardial+fat+from+guinea+pig+a+model+to+study+the+paracrine+network+of+interactions+between+epicardial+fat+and+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Drugs+Ther%22%5BJournal%5D)">Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium.</a> Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).</li>
<li>Pilny, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+hematology+of+rodent+species%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.Clin+North+Am+Exot+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Clinical hematology of rodent species.</a> Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).</li>
<li>Franco, N. H., Olsson, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientists+and+the+3Rs%3A+attitudes+to+animal+use+in+biomedical+research+and+the+effect+of+mandatory+training+in+laboratory+animal+science%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science.</a> Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).</li>
<li>Van, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((eAssessing+the+application+of+the+3Rs+a+survey+among+animal+welfare+officers+in+The+Netherlands%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands.</a> Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).</li>
<li>Sloan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+doses+of+ketamine-xylazine+anesthesia+reduce+cardiac+ischemia-reperfusion+injury+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).</li>
<li>Jacobson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+anaesthetic+regimen+for+surgical+procedures+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs.</a> Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).</li>
<li>Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+hyperglycemia+induced+by+ketamine+xylazine+anesthesia+in+rats+mechanisms+and+implications+for+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models.</a> Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。所有实验程序均经丹麦动物实验法案批准，该法案符合欧洲委员会公约 ETS 123 的规定。

与小鼠和大鼠相比，豚鼠天性胆怯，必须以平和的方式接近，并正确地进行抓取和操作，以减少其应激反应。从动物福利的角度来看，谨慎操作自然是首要原则；然而，这样做也能降低因焦虑对所采集数据造成干扰的风险，例如，皮质类固醇和葡萄糖的血液水平升高12。同样，每日的抓取操作可使动物逐渐适应常规实验流程，从而进一步减轻应激反应。在实际掌握某种采血技术之前，应首先观察经验丰富的操作人员进行示范，随后在监督下练习该技术，直至熟练掌握。所选择的采血方法应尽可能将动物的应激和不适降至最低，同时确保动物存活，并满足采样量和采样可及性的要求。对于本文介绍的所有采血方法，均应采用无菌技术，以最大限度降低感染风险，并确保采集到未受污染的样本。
图示的采血方法可确保动物存活，前提是采血量和采血频率符合相关指南要求，且所有方法均可用于短期和长期研究中的重复采血6。这使得能够对个体动物进行持续监测，从而降低实验数据的变异性并减少所需动物数量，符合“3R原则”中的“减量”（reduction）原则13,14。本文介绍的技术可获取的采血量范...

豚鼠是一种有价值且经过验证的实验动物模型，因其在生物学上与人类具有多种相似性，例如需要从饮食中摄取维生素C，血浆脂蛋白代谢酶和脂蛋白谱相似，以及在胎盘形成和产前发育方面与人类具有共同的相似特征。1-3,7,8这使得豚鼠成为研究饮食相关疾病（如非酒精性脂肪肝病、心血管疾病以及维生素C缺乏的潜在影响）效应的理想且合适的模型，同时也适用于研究 例如母体饮食干预对子代发育的影响
在长期和短期的体内研究中，通常需要多次采血。由于不同物种在解剖结构上存在特异性差异，与其它啮齿类动物模型相比，对豚鼠采血技术的操作需进行相应调整4,5。这包括血管走行的差异，以及豚鼠没有尾巴，因此在采血方式和动物操作方面具有不同的要求和选择。从隐静脉或跗外侧静脉采血可使动物承受最小的不适和应激，且无需麻醉3,9。该技术可用于多次采集少量血液（100–400 µl），例如用于测定血浆中的生物化学标志物。若所需样本量更小（50–100 µl），则可通过穿刺耳缘静脉较容易地获取。该方法也可在清醒动物中实施，适用于例如血糖监测等应用10,11。颈静脉采血可获得较大量的血液（1–2 ml），但需要麻醉。
本文介绍了针对清醒或麻醉豚鼠的四种不同采血技术。只要采血体积和采样次数不超过实验动物血液采集指南所规定的限度，所有这些操作均为非终末性操作6。为了保障科学研究的质量和动物福利，应尽可能减少动物的应激反应。因此，动物操作必须由经过充分培训且具备资质的人员实施。

<table><tbody><tr><td>电动剃须刀</td><td>Wella (Contura), 丹麦</td><td>273207</td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>注射器&amp;nbsp;</td><td>B.Braun-Omnifix-F, 德国</td><td>9161406V</td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>针头</td><td>BD Microlance, 西班牙</td><td>301156</td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>Microvette 采血管&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt, D-51588N&amp;uuml;mbrecht, 德国</td><td>201,288,100</td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>Accu-Check 分析仪</td><td>Roche A/S 诊断公司, 丹麦</td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>肝素 5000 IE/ml</td><td>LEO Pharma, 丹麦</td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>麻醉剂</td><td>Zoletil 50, Chemvet, 丹麦</td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>麻醉剂</td><td>Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, 丹麦</td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>麻醉剂</td><td>Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, 丹麦</td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>中性眼膏</td><td></td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>纱布或棉签&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr><tr><td>消毒剂（70% 酒精）</td><td></td><td></td><td>可使用替代产品。多家供应商可提供</td></tr></tbody></table>

豚鼠的非终末采血技术

Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs

豚鼠具有与人类相似的多种生物学特征，是经过验证的实验动物模型1-3然而，目前豚鼠的使用仍局限于相对狭窄的研究领域，针对具体方法的描述性数据也相应匮乏。豚鼠的解剖学特征与其他啮齿类动物模型略有不同，因此需要对取样技术进行调整，以适应物种间的特异性差异。 例如与小鼠和大鼠相比，获取足够数量且高质量的样本需要更长的时间，无论是长期还是短期 体内 研究常需多次采集血液样本，因此应充分考虑采样技术的选择，以减少动物的应激和不适，同时确保动物存活，并满足样本量和可及性的要求。豚鼠的静脉血可在多个部位采集。 例如，大隐静脉和颈静脉，每种技术均各有优缺点4,5在此，我们介绍了四种适用于清醒或麻醉豚鼠的采血技术。只要采血量和采血次数不超过实验动物血液采集指南的规定，所有这些操作均为非终末性操作。6所有所述方法均经过充分测试，并已应用于多次重复实验 体内 在本研究机构开展的研究中进行血液采样。

本文介绍了在清醒或麻醉状态下豚鼠非终末活体采血的四种不同方法。图1展示了豚鼠外侧隐静脉和跖外侧静脉的走行路径及可能的穿刺部位。图2展示了豚鼠耳部背侧表面可见的耳缘静脉，当仅需采集极少量血液时，可使用这些静脉进行采血。豚鼠颈静脉采血时的体位如图3所示，图中箭头标示了颈静脉的走行路径，其中最上方的箭头指向推荐的穿刺部位。
<img alt="大鼠解剖实验；戴手套的手突出显示尾巴上可能的炎症；生物研究。" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51982/51982fig1highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 豚鼠的外侧隐静脉和跗外侧静脉。 该图像展示了从豚鼠外侧隐静脉（上方箭头）或跗外侧静脉（下方箭头）采血时的血管走行及穿刺部位。
<p clas...

尽管豚鼠是一种已知的实验动物模型，但目前在实验动物科学领域仍属于小众，有关大多数实验操作实施的资料十分有限。本文介绍了在清醒或麻醉状态的豚鼠中进行非终末性 体内 血液采样的四种不同方法。

豚鼠在生物学上与人类具有多种相似性，是经过验证的实验动物模型1-3。然而，目前豚鼠的使用在……

本视频的总体目标是展示在豚鼠中进行采血的四种不同技术方法。所展示的操作过程均不属于终末性操作，除非采血量或采样次数超出动物血液采集指南规定的限度。在实验动物中，此处我们看到的是外侧耳静脉和跗静脉的走向。外侧跖背静脉沿跗关节的背侧和外侧走行。每条后肢最多应采集三个样本，每个样本可收集约100至400 µL血液。所需设备包括电动剃毛器、温水浴、干净毛巾、棉球、消毒剂（如70%酒精）、无菌针头以及21号或更小的收集管。如果目标是测量血糖并使用AccuCheck采样器，则可以在不进行麻醉的情况下从豚鼠的头静脉或跗静脉采血。由经过培训的助手固定住豚鼠，并应采用无菌技术操作。用电动剃须刀剃除覆盖跗部区域的毛发，并用温水浸泡并加温后肢。除了清洁腿部外，此操作还可使静脉扩张并变得更加明显。将后肢伸展，并在膝盖上方轻轻施加向下的压力以实现静脉淤血，从而使静脉在采样前立即显现。剃毛区域用消毒剂擦拭。用针头或采血针刺穿静脉，可将血液收集到毛细管或微量管中。血液采集完成后，解除血流阻断，并用一小块棉絮轻轻按压以促进止血。此处可见豚鼠耳背面的浅表动脉和静脉。当仅需采集极少量血液时，可利用这些血管进行采血。一个例子是血糖测量。在固定住豚鼠的同时，应使其耳朵保持可接触状态。采样前必须对穿刺部位进行无菌处理，但无需剃毛。可在耳基部施加轻微压力，以使静脉更加明显。使用针头或采血针穿刺静脉，用毛细管收集血液，或立即使用AccuCheck采样系统检测血糖水平。采血完成后，应对手指穿刺部位施加轻柔压力，以促进止血。此图片展示了用于颈静脉采血的豚鼠体位以及颈静脉的解剖位置。该操作仅可在麻醉动物上进行。所需设备包括麻醉药物、电动剃毛器、脱脂棉、70%酒精等消毒剂、听诊器、中性眼膏、1毫升注射器以及无菌针头（通常为23或25号）。在采样前，可使用肝素和EDTA冲洗注射器，以防止血液凝固。豚鼠的麻醉方案有多种。本实验中，动物采用平衡麻醉法，通过皮下注射颈部给予盐酸赛拉嗪和布托啡诺的混合物进行麻醉。该混合物可用生理盐水稀释，以使给药更加准确。注射后，应将豚鼠放回笼中并保持安静。通常在注射后约10分钟出现周围效应，持续30至40分钟，随后进行取样。通过检查反射来评估麻醉深度，并给予中性眼膏以保护眼睛。将豚鼠仰卧放置，前肢向两侧外展，暴露颈静脉。对该区域进行剃毛并作无菌准备，触诊锁骨，在中线外约一厘米处、锁骨头侧背侧方向，插入连接一毫升注射器的23号针头。注射器应保持轻微向上和向内侧的角度。一旦刺穿皮肤，由于颈静脉位置较浅，应立即对注射器施加轻微负压，进针深度约为3至4毫米即可。采集样本后，放松前肢的张力，并对穿刺部位施加轻柔压力。随后可将动物放回恢复笼中，但必须进行监测，以确保止血以及从麻醉中恢复。当豚鼠完全从麻醉中恢复后，可将其放回饲养栏。豚鼠的解剖学特征与其他啮齿类动物模型略有不同，因此需要对取样技术进行

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