2014年12月13日
在这里,我们提出了一个量化压力个体回避的协议。这种范式功能强大但用户友好,可用于评估基因和环境对黑腹果蝇一种社会互动的影响。
该程序的目标是量化苍蝇对压力个体发出的社会信号的反应。这是通过在实验前不超过两天首先收集、响应和发射机飞行来实现的。第二步是在实验前两小时将发射极和响应蝇转移到新鲜的小瓶中,让它们适应将要进行分析的环境受控房间。
接下来,将响应果蝇放入 TMA 中,并在先前对果蝇施加压力的小瓶(包含果蝇应激气味剂)和新鲜小瓶之间进行选择,最后一步是计算 DSO 小瓶和电梯中新鲜小瓶中的响应果蝇数量,以量化它们对 DSO 的反应。最终,T 迷宫用于测量苍蝇对社交压力信号的回避,特别是 gilo 压力气味剂。我第一次想到这种方法是在加州理工学院做博士后的时候。
当时,Greg Sue 和他的博士后导师 David Anderson 正在研究 Phyla 中的恐惧或社交回避,但没有现有的分析方法。他们找到我是因为我在 S 品牌实验室进行了很多行为分析,在进行照片出租车和嗅觉学习实验时,我注意到苍蝇被其他苍蝇在其中度过了一些不受干扰的时间的小瓶所吸引,同时避开了当时苍蝇受到电击压力的小瓶。主教。这种方法的演示至关重要,因为社交回避测定的实验过程需要一些练习才能快速有效地转移 bios 而不会丢失任何果蝇或 DSL。
与计算机辅助视频跟踪等现有方法相比,这种技术检查社交互动的主要优点是,这是一种易于掌握和实施的分析方法,但对于量化压力个体的社交回避非常有效。要开始实验,请切割多孔聚乙烯片材以覆盖 12.7 厘米 x 10.2 厘米的盒子。用碎冰装满盒子,并用床单盖住,以完成果蝇冷麻醉仪。
在覆盖着白色工作台盖和前面白板的长凳上进行实验,以确保均匀的照明条件。接下来,准备涡旋飞行吸气器队友装置、温度计和计时器。实验前一到两天,结肠麻醉苍蝇。
用漏斗将苍蝇转移到 50 毫升的试管中,然后将试管放入冰面以下的绝缘冰桶中。等待 5 分钟,让苍蝇进入寒冷昏迷状态。然后在室温下将果蝇转移到多孔聚乙烯板上,并在立体显微镜下分拣出响应性果蝇。
将 3 到 7 天龄的雄性果蝇与雌性果蝇分开,并将这些果蝇保持在 40 只一组中,轻轻收集混合性别的 Canton 的发射果蝇。使用口吸器允许苍蝇。一晚的恢复,以尽量减少该系列对行为的任何混杂影响。
接下来,打开装有测试样品瓶的袋子,用新鲜空气替换袋子中带有塑料气味的陈旧空气。实验前,确保测试室温度在 25 摄氏度,房间光线均匀,湿度大于 30%实验前两小时将响应者和发射机转移到新鲜食品小瓶中,让苍蝇适应将进行实验的工作台上的环境。将茶迷宫放在捣打垫上并拧紧螺丝夹,使电梯稳定。
接下来,将响应型苍蝇转移到新的测试瓶中,并将装有响应型苍蝇的小瓶卡在茶迷宫顶部。然后倾斜茶迷宫装置,在敲击垫上敲击它,使果蝇掉进电梯。将电梯的顶部向下移动,将苍蝇放置在 TMA 的顶部和底部之间,并确保电梯位于选择点上方,以防止苍蝇在响应苍蝇适应新环境时逃脱。
将发射器蝇放入新的测试瓶中,并在上面放上一块棉花。以这种方式在小涡旋上搅拌样品瓶。苍蝇会发射 DSO,将苍蝇转移到食品瓶中,并迅速将装满 DSO 的小瓶放入团队的两侧之一。
另一种是填充 DSO 的样品瓶的放置侧。在每次新的运行中,将一个新的测试瓶放在团队 A 的另一侧,然后将电梯完全放下,以便果蝇可以在新的测试瓶和填充 DSO 的小瓶之间进行选择。立即启动计时器。
一分钟后,将电梯向上移动,将新鲜样品瓶和 DSO 样品瓶中的果蝇与卡在电梯中的果蝇分开。计算每个小瓶和电梯中的苍蝇数量。重复此作。
对于每种基因型和/或条件组,应答果蝇的大小不会影响它们避免 DSO。在 10 至 80 只果蝇身上进行实验后,T 检验显示应答果蝇的性能指标或 PI 之间没有统计学意义。如图所示,发射器苍蝇的数量会影响苍蝇对 DSO 的回避,它代表了不同的试验。
每个发射器飞行使用 10 到 160 个。仅 10 只受压的果蝇仍然检测到大量回避。果蝇的选择、时间和遗传背景会影响对 DSO 的反应,如图所示,它说明了 Canton s 和 Elwood 菌株的反应。
两种基因型都显示出比 Oregon 更强地避免 DSO 和一些 markin 菌株在其发育后。这项技术为神经科学领域的研究人员确定了感知和避免 CO2 的神经回路铺平了道路,CO2 是 DSO 的组成部分之一。它还被用于研究自闭症候选基因在影响社交行为中的作用。
在约瑟夫·阿诺·加斯特 (Joseph Ano Gaster) 中。一旦掌握,该技术可以在每个重复的不到 5 分钟内完成。观看此视频后,您应该对如何进行社交回避分析有一个很好的了解,从测试发射器和响应者果蝇之前的准备到生成 DSL 字段 bios 和纵队友为响应者提供二进制选择。
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该协议量化了黑腹果蝇对来自受压力个体的社交信号的回避行为。它有效地评估了遗传和环境因素对社交互动的影响。
This assay enables high-throughput quantification of social avoidance behavior in Drosophila, providing a genetically tractable model for de-risking target validation in neuropsychiatric drug discovery. By linking genetic and environmental modulation to measurable behavioral outputs, it supports early-stage mechanistic screening for compounds affecting social cognition pathways. The low-cost, robust design facilitates scalable screening of mutant libraries or environmental conditions relevant to social deficit phenotypes.
The assay fits within early discovery workflows, supporting hypothesis testing in target validation and enabling scalable screening prior to lead identification efforts.