Highly Efficient Ligation of Small RNA Molecules for MicroRNA Quantitation by High-Throughput Sequencing

Jerome E. Lee; Rui Yi

doi:10.3791/52095

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Highly Efficient Ligation of Small RNA Molecules for MicroRNA Quantitation by High-Throughput Sequencing

小RNA分子的高效结扎的微小RNA定量高通量测序

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14:15 min

November 18, 2014

DOI: 10.3791/52095-v

Jerome E. Lee¹, Rui Yi^1,2

¹Molecular, Cellular, and Developmental Biology,University of Colorado, Boulder, ²Linda Crnic Institute for Down Syndrome,University of Colorado, Denver

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

MicroRNA （miRNA）是一类广泛保守的调节分子。在这里，我们描述了一种 miRNA 克隆方法，该方法依赖于两个有效的连接步骤，然后进行高通量测序。我们的方法允许对 miRNA 进行准确的全基因组定量。

该程序的总体目标是无偏倚地制备用于高通量测序的 microRNA。这是通过首先制备或购买能够连接到 micro RNA 的三个主要末端的 DNA 寡核苷酸来实现的。第二步是将三个引物 DNA 寡核苷酸连接到微 RNA 的三个引物末端。

接下来，对连接产物进行凝胶纯化，并将 5 个引物 RNA 寡核苷酸接头连接到 micro RNA 的 5 个引物末端。最后一步是将杂交分子转化为 CDNA，然后通过聚合酶链反应扩增 CDNA。最终，micro RNA 克隆和高通量测序用于以单个核苷酸分辨率以定量方式显示 microRNA 的转录组宽谱。

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