渗透离心技术质外体中提取植物液使用叶菜豆为例

该程序的目的是演示使用渗透离心技术从植物叶片中提取再生障碍液。这是通过首先将叶片浸入浸润液中，然后利用注射器或真空泵产生的压力差将其完全浸润来实现的。第二步是使用支撑装置准备要离心的叶子。

接下来，轻轻离心叶子以获得 APO 塑料洗涤液。最后一步是确定 APO 塑料稀释因子并测定 alast 洗涤液的质量。最终，浸润离心分析用于获得可用于各种下游分析的代表性 APO plast 样品。

其他现有方法的这种技术的主要优点是，它很容易针对各种叶子类型进行优化，以获得对细胞质化合物污染最小的上层样品。这种方法可以帮助回答植物生理学和植物微生物相互作用等领域的关键问题，在这些领域中，了解 APL 的组成在不同植物之间如何变化以及在不同生理条件或胁迫下的变化非常重要。作为第一步，通过穿着实验服、手套和护目镜规则来采取安全预防措施。

接下来，准备一定量的蒸馏水，将叶子样品浸入其中。准备好剃须刀片来收集样品，在这种情况下，来自豆类品种嫩绿色的叶子。将剃须刀片靠在叶子的宠物上，然后连接植物的叶子。

收集后，将新鲜切除的叶子浸入蒸馏水中以去除叶子表面的污染物。然后用吸水纸巾或纸轻轻阻止叶子干燥。在进行渗透之前测量叶子的重量。

这将有助于稍后估算渗透体积。使用 60 毫升注射器开始浸润过程。取下柱塞后，小心地将叶子卷入和/或折叠到注射器中。

接下来，用渗透液填充注射器。在这里，使用的是蒸馏水。插入柱塞并倒置注射器以排出其中的任何空气。

记下叶子的颜色，以便以后比较。使用一小块 para param 将柱塞移动到 40 毫升标记处。盖上注射器尖端。

然后将柱塞拉至 60 毫升标记以产生负压。倒置注射器以从叶子表面释放气泡。在大约两秒钟内慢慢将柱塞放回起始位置。

揭开注射器尖端并排出所有空气。然后再次盖住尖端并按压柱塞以产生适量的正压。继续施加负压，喷射空气并施加正压，直到叶子完全渗透。

完全浸润的证据是浸润区域的颜色变暗。一旦看到这种情况，就从注射器中取出叶子。用吸水纸轻轻堵住叶子，以去除表面液体。

然后测量浸润叶子的重量，另一种浸润方法使用真空瓶。再次收集一片叶子并用蒸馏水冲洗。炸干后，测量叶子的重量。

获得最小容量为 250 毫升的手枪培养瓶。将叶子放入烧瓶中，用蒸馏水盖住。接下来，在烧瓶中放置一个塞子，并将真空泵连接到手枪上。

培养瓶施加足够长的真空以达到压力。大约 650 毫米汞柱。在减压下轻轻摇动培养瓶，以释放叶子中的气泡。

然后在大约 10 秒钟内小心缓慢地释放真空吸尘器。重复施加真空、搅拌培养瓶并释放真空的过程，直到叶子完全浸润。完全浸润的证据是浸润区域的颜色变暗。

从培养瓶中取出完全浸润的叶子，然后用吸水纸轻轻吸干叶子。为了去除表面液体，测量浸润叶子的重量以确定近似的浸润体积。叶子完全浸润后，准备离心。

铺设一块 4 英寸宽的段落膜。将叶子放在 para film 上。然后使用 5 毫升移液器吸头，将片段膜中的叶子卷起。

取出一个 20 毫升的注射器主体，取下柱塞，然后用移液器吸头插入卷起的叶子。定位任何切下的叶片边缘并面向柱塞端。取一根 50 毫升的聚乙烯或聚碳酸酯管，然后将注射器插入其中。

使用带有摆动吊篮转子的离心机。装入含有浸润叶子的试管，并在 4 摄氏度和 1000 G 下离心 10 分钟。离心后，检查叶片以确定大部分浸润液是否已排出。

离心管现在包含回收的 APO 塑料清洗液，继续将回收的 alast 清洗液移液到新的 1.5 毫升试管中。将 APO 塑料洗涤液样品放入离心机中，以 15， 000 G 离心 5 分钟，以去除任何细胞或颗粒物。离心后，将 supinate 移液到新试管中。

将样品保存在冰上，直到可以在零下 80 摄氏度下储存。评估 APO 平台清洗液质量的一种方法是计算 APO 平台稀释因子。为此，请准备两倍体积的浸润液蒸馏水，在这种情况下，每体积足以进行多次渗透。

添加靛蓝胭脂红粉至终浓度为 50 微摩尔。不要给另一个添加任何内容。获得 96 孔微孔板，用 200 微升浸润溶液填充三个孔。

用靛蓝胭脂红，用 200 微升纯正的浸润溶液再填充三个，将微孔板置于读数仪中，以测量每种液体的吸光度。在 610 纳米处，含靛蓝胭脂红的流体的平均吸光度减去不含靛蓝胭脂红的流体的平均吸收剂，得出浸润物的校正吸光度。接下来，为每个渗透解决方案复制叶子渗透方案 3 次。

将叶子样品浸入水中。使用靛蓝胭脂红渗透液时施加负压和正压，渗透后用蒸馏水冲洗叶子，以去除叶子表面残留的靛蓝胭脂红。通过离心回收 last 洗涤液。

回收最后的洗涤液后，返回到微孔板孔中的读板器中。放置 200 微升每种靛蓝胭脂红免提取液，以及 200 微升每种靛蓝胭脂红 Alast 洗涤液提取。测量样品在 610 纳米处的吸光度以获得校正后的吸光度。

平均每组数字并取差值。使用浸润液的校正吸光度和再生障碍性清洗液的校正吸光度来确定 APL 稀释因子，以获得再生障碍液中浓度或活性的估计值。植入机将 alast 洗涤液的浓度或活性值乘以从 fasi vulgaris 培养品种中提取的 alast 洗涤液的稀释因子。

使用柔和的绿色生产这种气相色谱质谱有机酸。单糖和氨基酸代表了可识别代谢物的大部分。这是 SDS 页面的比较，Fasi vulgarus alast 洗涤液叶提取物的 Kumasi 染色凝胶。

提取物的细胞质污染量不同。这被观察到为不同数量的石膏酶 rubis。执行此程序时，请务必记住至少要尽可能轻柔，以避免造成任何组织损伤或细胞质污染。遵循此程序。

可以进行其他方法，例如蛋白质或代谢物质谱法，以回答有关再生障碍液成分的其他问题。再生障碍性洗涤液也可用作总培养基，以研究再生障碍性化学品对定植植物组织的微生物的影响。