隔离和小鼠主动脉切除;心血管疾病研究的一个多功能的技术
2014年11月24日
主动脉病理学可导致严重的发病率和死亡率，因此有必要研究疾病进展和潜在疗法。在这里，我们提出了一种分离和切除小鼠主动脉的方案，以帮助研究人员研究心血管疾病。
该程序的总体目标是 sterly、isolate 和 切除小鼠主动脉。这是通过首先暴露胸腔和腹腔来实现的。第二步是灌注冷的无菌盐水。
接下来，切除胸腔和腹腔的器官，使心脏附着在主动脉上。最后一步是从主动脉切除血管周围脂肪组织和外出组织。最终，使用解剖显微镜验证所有周围组织均已切除，主动脉可用于各种实验分析。
因此，这项技术有助于回答心血管研究领域的关键问题，例如动脉瘤的发展和动脉粥样硬化斑块的形成。因此，您可以通过观察分子生物学的变化来观察这些变化，例如基因和蛋白质表达。对鼠标实施安乐死后，通过捏住脚趾来验证安乐死状态。
接下来，用 70% 乙醇润湿腹部毛皮对皮肤进行消毒。然后将鼠标固定在手术板上，仰卧着伸出附件。使用镊子定位并隔离剑突下方的腹部皮肤，开始手术。
接下来，提起皮肤并用剪刀修剪。这应该暴露腹膜的上部和下胸腔。然后使用镊子和剪刀提起剑突，并沿肋下缘做一个位于其下方的侧切口。
要解剖胸腔，请通过隔膜进入，注意在此过程中不要损坏心脏或任何主要血管。现在颅骨沿肋下缘延伸侧切口。因此，去除肋骨的前部。
可能需要进行钝性解剖，从前胸壁切除心脏才能完成这些切口。现在使用纱布清理胸腔中多余的液体，使器官更容易进入。然后用镊子和剪刀逐个肺叶切除肺部。
然后应完全暴露心脏和主动脉，并易于进入，以便通过心脏穿刺采集血液。现在这样做 在进行灌注以灌注心脏之前，用 10 毫升无菌冰冷的 XPBS 填充 10 cc 注射器。然后连接一根 25 号针头。
小心地将针头插入左心室。然后在右心房切开一个切口，这样下一步循环系统中就不会积聚过大的压力。现在，在接下来的两到三分钟内，慢慢地将 PBS 从注射器喷射到心脏中。
在 PBS 喷射过程中，使用无菌纱布吸收从切口处心房流出的液体。当 PERFUSE 8 全部弹出时，用纱布吸收任何残留的液体，从而遮挡胸腔的清晰视野。为了暴露胃肠道内容物，巧妙地切开腹壁，将切口延伸到耻骨上区域。
一旦在那里，向双侧向下肢切割以形成皮瓣，可以固定或切除。继续前进会去除几个器官，肝脏叶、胰腺、脾脏、肠道和食道下部。这将打开主动脉的视图。
解剖 perren 区域时要格外小心，因为该区域有从主动脉到肾动脉的浅表分支。精确而小心地进行解剖，因为胃肠道的细菌会污染其他组织，用一个 XPBS 冲洗干净的区域，并用纱布吸收多余的溶液，主动脉应该很容易进入。因此，用剪刀和镊子将主动脉与脊柱分开。
钝性解剖是合适的，强烈建议使用解剖显微镜。主动脉可以切除，从 coddly 或 cran. 开始。重要的是有序的工厂清洁和分离组织的过程。
解剖血管周围脂肪组织时，用细微剪刀将其去除，以避免损伤主动脉壁。这最大限度地减少了培养主动脉平滑肌细胞时成纤维细胞污染的机会。仔细切除血管周围、脂肪组织和外膜非常重要。
任何残留的组织都可能导致细胞培养污染，但也会影响您的分子检测。使用该程序，起源于心脏的完整主动脉下降到胸腔和腹腔。在获得肾动脉仍然连接的情况下，可以对主动脉进行原位成像以量化形态变化，这在腹主动脉瘤的研究中具有诊断意义。
随后，可以切除、固定和染色主动脉以查看组织学变化，例如使用 hemat、toin 和 eoin 染色，或使用 ver Hoff Van Geen 染色来查看弹性蛋白带，从而查看主动脉的结构完整性。主动脉细胞还可用于原代细胞分离和体外研究，例如活力研究和蛋白质定位。该程序之后，您可以使用其他技术（例如蛋白质和 RNA 分离）来查看蛋白质表达、酶活性以及基因表达。
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概述
本文介绍了一种用于分离和切除小鼠主动脉的协议，这对于研究心血管疾病至关重要。由于其对发病率和死亡率的影响，了解主动脉的病理学非常重要。
关键研究组成部分
科学领域
- 心血管疾病
- 小鼠模型
- 病理学研究
背景
- 主动脉的病理学可能导致严重的健康问题。
- 研究疾病进展对于开发治疗方法至关重要。
- 分离主动脉允许进行详细的实验分析。
- 该协议帮助研究人员进行调查。
研究目的
- 提供一种可靠的方法来分离小鼠主动脉。
- 促进心血管疾病的研究。
- 增强对主动脉病理学的理解。
使用的方法
- 暴露胸腔和腹腔。
- 用冷的、无菌的生理盐水灌流。
- 在保持心脏附着于主动脉的同时移除器官。
- 切除主动脉周围的脂肪组织和外膜组织。
主要结果
- 成功分离小鼠主动脉。
- 使用解剖显微镜验证完全移除周围组织。
- 准备主动脉进行各种实验分析。
结论
- 该协议提供了一种系统的主动脉分离方法。
- 这种方法可以显著帮助心血管研究。
- 未来的研究可以在这种基础技术的基础上进行。
常见问题
Executive Industry Relevance
Isolation of the murine aorta enables direct assessment of vascular pathology in preclinical models, supporting target validation and mechanistic de-risking in cardiovascular drug discovery. This technique provides quantitative morphometric and molecular readouts that improve predictive confidence in early-stage therapeutic evaluation. By facilitating reproducible tissue preparation, it strengthens translational continuity from discovery through preclinical validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of aortic tissue to clarify disease mechanisms and validate therapeutic targets in atherosclerosis and aneurysm models.
- Operational Value: Supports functional target validation through molecular analysis of protein and gene expression in isolated tissue.
- Predictive Value: Enhances portfolio triage by providing direct readouts of target engagement and pathway modulation.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated aortic tissue for downstream assays, including viability studies and protein localization.
- Operational Value: Enables standardization of tissue preparation for reproducible compound evaluation in in vitro systems.
- Scalability: Supports platform reuse across multiple experimental readouts such as histology, molecular profiling, and primary cell isolation.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Maintains disease relevance by preserving aortic structure for histologic and elastin band analysis.
- Operational Value: Ensures continuity from discovery through preclinical validation by enabling consistent tissue preparation.
- Risk Mitigation: Supports risk-adjusted advancement decisions via quantifiable morphometric changes diagnostic of abdominal aortic aneurysm.
Pipeline & Workflow Integration
The aorta isolation technique fits within the discovery continuum, supporting hypothesis testing in early discovery, assay readiness in screening, and quantitative analytics in preclinical evaluation.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification through direct tissue analysis.
- Screening: Enables assay readiness via standardized tissue preparation and removal of confounding perivascular tissue.
- Analytics: Delivers quantitative morphometric and molecular measurements for comparative condition analysis.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity through histologic staining and elastin band assessment.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable capability for cardiovascular pathology studies across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence through direct assessment of aortic pathology and target modulation.
- Operational Value: Standardization and reproducibility in tissue preparation for molecular and histologic assays.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions via reduced biological uncertainty in cardiovascular models.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on quantifiable aortic structural and functional readouts.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine dissection and sterile tissue handling.
- Dependent on dissection microscope and surgical instrumentation for precision tissue isolation.
- Necessitates cross-team standardization of perfusion and excision protocols.
- Involves adaptation considerations when applying to different disease models or strain backgrounds.
- Limited by terminal nature of the procedure, requiring animal sacrifice per sample.
