新技术脱发的定量分析小鼠使用灰度分析

脱发是一种常见的脱发形式，可能发生在许多不同的情况下，包括化疗的副作用。 我们开发了一种量化小鼠脱发的方法，利用标准凝胶成像仪进行灰度分析，以促进有前途的新脱发疗法的研究。

该程序的总体目标是使用光吸收提供头发密度的量化。这是通过首先在凝胶成像仪上拍摄动物来实现的。下一步是在照片上定义一个感兴趣区域，并确定感兴趣区域内的光吸收。

然后将光吸收与照相标准进行比较。最终，可以在经过类似治疗的动物之间平均光吸收，以显示干预对毛发生长的影响。这种技术的主要优点是无偏倚、可量化和可重复。

这非常重要，因为它允许您使用标准、统计技术（如 Inova）来确定结果的统计显着性。对于此协议，使用带有内置光源的凝胶成像仪进行反射摄影。这确保了良好的光均匀性，而反式照明会产生不适合分析的暗影。

首先准备凝胶成像仪，设置焦点和视野。使用一些打印文本时，鼠标可能会略微失焦，因为这实际上是有效的。为了减少感兴趣小区域的量子误差，然后验证整个拍摄区域的光源均匀性，目的是在感兴趣区域实现出色的光学平均。

接下来，准备动物。选择起效快、作用持续时间短的麻醉剂，并提供足以让动物保持静止以进行摄影的麻醉剂。现在将动物垂直放置在成像仪上，并尽可能接近平行。

对于背照，将动物置于俯卧位，四肢伸展。对于腹侧照片，将动物置于仰卧位。确保它们没有横向旋转。

可以在图像之间提取吸收值，但这不是机器的设计目的。因此，添加灰度标准可以让我们在编译数据时对吸收值进行归一化。现在将灰度标准放置在拍摄区域。

然后关闭暗室，并减少可能进入摄像机暗室的环境照明。将 F 制光圈设置为使感兴趣区域不会过度饱和或曝光不足的曝光。然后拍张照片。

如果选择 F 档以使图像饱和，则灰度值将固定在该值，而 B 没有任何用处。然后将 F.Stop 更改 1，将感兴趣区域和标准保持在线性曝光范围内，并在完成拍摄后拍摄第二张照片。将动物放在加热台上并监测它们，直到它们恢复。

胸骨卧位。然后将动物放回笼子，最终放回饲养箱以完全恢复。要使用凝胶成像软件量化光吸收，请在动物图像上标记感兴趣的区域，以获得整个动物的背视图。

使用矩形图像、椭圆形图像或徒手工具勾勒出从上肢到下肢的空间，并尽可能横向延伸。保持在动物背部的边缘内，以获得整个动物的腹侧视图。使用两个矩形。

一个用于覆盖经过修饰的骨盆区域，另一个用于覆盖未修饰的胸部区域。较小的感兴趣区域（例如给药位置）也可以标记为必需。其次，在灰度吸收标准品上标记感兴趣区域。

然后记录每个标记的感兴趣区域的吸收，以便在照片之间进行比较。使用暴露与吸收的对数对数关系将吸收水平归一化为背景标准。为此，绘制暴露对数与吸收对数的曲线。

使用从灰度吸收标准获得的值，然后根据每张照片的标准变化进行调整，如下所示。首先，选择用于读取 ROI 的 F 光圈值和用于参考光圈值的 F 光圈值，并计算在读取 F 光圈值时所有照片中标准品的平均吸收。该平均值是参考标准值或 RSV。

接下来，计算每张照片中读数和参考 F 制光圈设置之间的吸收差异，并对标准和每个定义的 ROI 进行相同的计算。现在使用来自一个 F 值的数据，使用所示公式计算每个 ROI 的校正吸收。在此之后，应用标准统计方法分析数据 C3 HHEJ 移植小鼠，其模型脱发 ADA 使用描述的方法在不同暴露下进行分析。

正如预期的那样，不重叠的 ROI 的变化密切相关。类似的比较在三周的时间内产生了相同的紧密相关性。对小鼠进行成像以量化它们预期的脱发。

80% 的成像小鼠在此时间范围内出现脱发。相比之下，正常的 C 57 black 6 小鼠在同一时间范围内没有表现出任何脱发。在第二项研究中，使用所描述的技术量化化疗引起的脱发。

小鼠用环磷酰胺治疗 3 周，两个月后，与对照组相比，它们表现出明显的脱发。掌握后，每张图像都可以在不到 5 分钟的时间内进行分析。观看此视频后，您应该对如何使用标准凝胶成像系统量化啮齿动物的毛发生长量有很好的了解。