Name: 新技术脱发的定量分析小鼠使用灰度分析 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: 学习使用凝胶成像仪和灰度分析技术对小鼠进行毛发密度定量分析的方法。该技术通过测量光吸收实现客观量化，为脱发治疗研究提供可重复的无偏评估工具。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

我们感谢蒙特菲奥里儿童医院儿科部门为这些研究提供了支持。我们感谢国家斑秃基金会为开展C3H/HeJ移植小鼠的研究提供了资金支持。

伦理声明：所有涉及动物的研究必须经机构的动物护理和使用委员会（IACUC）批准（本研究相关数据已获蒙特菲奥里医学中心 IACUC 批准，方案编号 #11-6-240 和 #13-7-100）。动物在拍摄过程中仅接受轻度麻醉，目的仅为保持其静止，本方案不涉及任何会引起疼痛的操作。
1. 照片的采集
<ol>
	<li>使用印有文字的纸张设置凝胶成像仪的焦距和视野。验证拍摄区域内光源的均匀性。为帮助确保均匀性，请使用带有内置光源的凝胶成像仪进行反射摄影。请勿使用透射光源，因为这会产生动物的轮廓影像，不适合进一步的灰度分析。 
	注意：这会使小鼠略微失焦，从而在感兴趣区域（ROI）内实现光学平均，有助于减少极小（即 &#60;10 像素）感兴趣区域的量子化误差。较大的感兴趣区域不会受到此微小对焦调整的影响，也不会受到动物大小差异的影响。</li>
	<li>使用氯胺酮（100 mg/ml）/赛拉嗪（20 mg/ml）（2:1）对动物进行麻醉，因其可快速起效并快速恢复，适合对多个动物进行拍照。 
	注意：当动物静止到足以进行摄影时，表明麻醉已生效。由于动物通常在此轻度麻醉下10–15分钟内即可恢复，兽医未建议使用眼膏。</li>
	<li>将麻醉后的动物垂直放置于凝胶成像仪上（尽可能接近平行）。
	<ol>
		<li>拍摄背部照片时，将动物置于俯卧位，四肢伸展。</li>
		<li>拍摄腹部照片时，将动物置于仰卧位，并注意避免动物发生侧向旋转。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在拍摄区域内放置灰度标准品。</li>
	<li>关闭访问门。重要提示：环境光可能引起曝光变化。</li>
	<li>设置光圈值（F-stop），使感兴趣区域处于图像采集的线性范围之内（读取光圈值）。 
	注意：大多数系统会显示图像饱和的位置。</li>
	<li>拍摄照片。</li>
	<li>通过增加或减少1个光圈值（F-stop），将光圈值调整至另一曝光设置，使感兴趣区域仍处于线性采集范围内，同时确保标准品和感兴趣区域均处于线性采集范围（参考光圈值）。</li>
	<li>拍摄照片。</li>
	<li>完成摄影后，将动物置于加热台上，并监测直至其能够维持胸卧位。将动物放回笼中。待所有动物完全恢复后，将其群体送回动物房。</li>
</ol>
2. 光吸收的定量分析
<ol>
	<li>使用凝胶成像仪配套软件在动物图像上标记感兴趣区域。
	<ol>
		<li>对于动物全身背侧视图，使用一个从上肢延伸至下肢的矩形或椭圆形区域，并尽可能向两侧扩展，确保该区域的任何部分均不超过动物背部范围，如图1A所示。 
		注意：也可使用手绘工具自由标记感兴趣区域。</li>
		<li>对于动物全身腹侧视图，使用两个矩形区域：一个覆盖骨盆区域，另一个覆盖胸部区域，如图1B所示。</li>
		<li>对于较小的感兴趣区域，即药物给药部位，根据实际情况进行标记。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在灰度吸收标准品图像上标记感兴趣区域。</li>
	<li>记录每个已标记感兴趣区域的吸收值。</li>
</ol>
3. 分析
感兴趣区域获得的吸光度水平可能需要相对于背景标准进行归一化，以便在不同照片之间进行比较。曝光与吸光度之间的关系为对数-对数关系。即， log（曝光）与log（吸收）之间存在线性关系。利用这一关系，可将感兴趣区域的吸收值归一化至一个标准背景值，从而实现不同照片之间吸收值的直接比较，包括在不同时间点拍摄的照片。即， 研究方案中的连续测量）。执行这些校正的具体步骤详见可选步骤 3.1 和 3.2。
<ol>
	<li>（可选）绘制 log（曝光）曲线 与 使用灰度吸收标准获得的值计算 log(吸收值)</li>
	<li>（可选）按如下方法对每张照片的拍摄标准差异进行校正：
	<ol>
		<li>选择用于读数的F值（由步骤1.6确定）和用于参考的F值（由步骤1.8确定）。</li>
		<li>在读取光圈值的所有照片中计算标准品的平均吸光度。该平均值即为参考标准值（RSV）。</li>
		<li>计算标准（delta-S）及每个定义的感兴趣区域（delta-ROI-1、delta-ROI-2……delta-ROI-X）在每张照片中读数与参考F挡光圈设置之间的吸光度差值</li>
		<li>按以下方法计算每个 ROI 的校正吸收值：ROI-X 的校正吸收值 = 读数光圈下的 ROI-X 吸收值 + (RSV - 标准物质在读数光圈下的吸收值) × (Δ-ROI-X / Δ-S)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>整理实验数据，并对连续变量采用标准统计方法进行数据分析即， 方差分析，T检验</li>
</ol>

<ol><li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Hair+Loss+Association%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">American Hair Loss Association.</a> , 
 <a target="_blank" href="http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp">http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp</a> (2011).</li>
<li>Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+alopecia+areata+in+Olmsted+County%2C+Minnesota%2C+1975+through+1989%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989.</a> Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).</li>
<li>Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+alopecia%3A+new+developments%5BTitle%5D)+AND+%22South+Med+J%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced alopecia: new developments.</a> South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).</li>
<li>Trueb, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+hair+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Therapy+Lett%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced hair loss.</a> Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).</li>
<li>Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adenovirus-mediated+expression+of+Sonic+hedgehog+gene+on+hair+regrowth+in+mice+with+chemotherapy-induced+alopecia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).</li>
<li>McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+sequelae+and+alopecia+among+women+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Pract%22%5BJournal%5D)">Psychological sequelae and alopecia among women with cancer.</a> Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).</li>
<li>Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+effect+on+cancer+patients%27+body+image%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Nurs%22%5BJournal%5D)">Alopecia: effect on cancer patients' body image.</a> Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).</li>
<li>Stough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effect%2C+pathophysiology%2C+and+management+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men.</a> Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).</li>
<li>Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+the+case+for+medical+necessity%5BTitle%5D)+AND+%22Skinmed%22%5BJournal%5D)">Alopecia: the case for medical necessity.</a> Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).</li>
<li>Olsen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+clinical+trial+of+5%25+topical+minoxidil+versus+2%25+topical+minoxidil+and+placebo+in+the+treatment+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men.</a> J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).</li>
<li>Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1+mg+daily+administration+on+male+androgenetic+alopecia+in+different+age+groups%3A+10-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Ther%22%5BJournal%5D)">1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up.</a> Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).</li>
<li>Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer-aided+quantification+of+scalp+hair%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Clin%22%5BJournal%5D)">Computer-aided quantification of scalp hair.</a> Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).</li>
<li>Fleming, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+a+structural+analysis+of+dermatoscopic+imagery%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Med+Imaging+Graph%22%5BJournal%5D)">Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery.</a> Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).</li>
<li>Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+evaluating+hair+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Australas+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods of evaluating hair growth.</a> Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).</li>
<li>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. 
 
 <a target="_blank" href="http://www.imatest.com/docs/q13/">http://www.imatest.com/docs/q13/</a> Forthcoming.</li>
<li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H%2FHeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+%28Tacrolimus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD%2C+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog%2C+in+a+non-depilated+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li>
<li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia%2C+using+PTH%2FPTHrP+receptor+agonist+and+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-cancer+drugs%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本报告详细介绍了一种用于定量啮齿类动物脱发的新技术。该技术利用凝胶成像仪进行图像采集与分析，此类设备在大多数实验室中均 readily available。研究表明，该方法对操作中的微小差异具有良好的稳健性（图4–图5），且与治疗模型中肉眼可见的脱发程度高度相关（图6）。这些技术已成功应用于雄激素性脱发实验疗法的评估17。
一种用于定量评估啮齿类动物毛发生长的工具在推动脱发症治疗研究方面可能具有重要价值。许多脱发小鼠模型具有内在变异性，这使得基于主观评估治疗干预效果变得困难。同样，若采用一种能够以连续变量形式提供结果的定量评估方法，则可通过组均值及标准差/标准误进行数据汇总，并可使用标准统计学方法（如方差分析、t检验）进行检验。该定量评估方法可用于测量一系列时间点的反应，并可用于构建受试化合物的剂量-反应曲线。因此，定量分析能够实现对正在开发的治疗手段疗效进行基于证据的评估。
该技术利用了多种小鼠品系中毛...

脱发（毛发脱落）是一种具有多重病因的心理和情绪困扰事件。男性型脱发是最常见的脱发原因，约三分之二的男性在35岁前会受到影响1。在患有多囊卵巢综合征的女性中也可观察到类似的脱发模式。在这两种疾病中，脱发均由雄激素介导。脱发也可能作为一种自身免疫性疾病发生，即斑秃，影响约1.7%的人群2。&#160; 脱发还可能作为某些医疗治疗的副作用出现，例如化疗3。&#160; 高比例（65–85%）的化疗患者会经历不同程度的脱发4,5。在化疗背景下，脱发的心理后果已被广泛研究。化疗引起的脱发可导致焦虑、抑郁、负面的身体形象、自尊心下降以及整体幸福感降低6,7。高比例（47–58%）的女性癌症患者认为脱发是化疗过程中最具创伤性的方面，高达8%的患者因害怕脱发而拒绝接受治疗4,6。在雄激素性脱发中，也有证据支持通过治疗来减轻脱发带来的心理甚至医学后果8,9。同样，斑秃也被报道具有严重的心理影响2，其斑片状的脱发特征可能导致比大多数其他脱发原因更令人不悦的外观后果。
尽管具有轻度抗雄激素作用的药物（例如，螺内酯）曾被用于脱发治疗，但疗效有限，而首个对脱发有效的药物是米诺地尔10。这种降压药具有促进毛发生长的观察到的副作用，现已被用作多种类型脱发的局部治疗手段。然而，治疗反应常常不完全，部分患者仅表现为脱发减缓，而非真正的毛发再生10。非那雄胺是一种II型5α-还原酶的竞争性拮抗剂，可阻断睾酮向双氢睾酮的转化，从而在部分全身性雄激素阻断的代价下改善雄激素性脱发。长期（10年）治疗的应答率约为50%11。总体而言，尽管该领域已有大量研究，目前仍缺乏针对脱发的充分有效疗法。
几十年来，科学家和临床医生一直在研究用于临床试验中测量头皮毛发生长的方法。随着治疗脱发药物的开发，人们越来越需要可靠、经济且微创的方法来测量毛发生长情况，特别是对治疗的反应。过去，利用图像分析技术对脱发疾病患者的毛发密度进行精确定量，已通过多种技术获得了稳定且有效的结果，这些技术包括数字化图像分析12、单根毛发及皮肤病变的图像分析13，以及对特定头皮区域进行显微扫描以定量毛发质量14。
遗憾的是，尽管上述方法在临床试验中对促进毛发生长干预措施的有效性评估有所改进，但这些方法尚未应用于临床前研究中的啮齿类动物实验。我们的目标是建立一种一致且可靠的方法来定量小鼠的脱发情况，从而使研究人员能够更准确地评估和比较针对各种类型脱发的新治疗策略。我们开发了一种方法，利用大多数实验室中常见的设备，可快速、可靠地定量具有棕色或黑色毛发的小鼠的毛发密度。该方法已在化疗诱导脱发、斑秃以及脱毛蜡致脱发的小鼠模型中进行了测试。本文提供了进行这些测量的详细操作方案，包括来自 C57BL/6 和 C3H/HeJ 小鼠品系的验证数据。由于该技术依赖于检测毛干中色素对光的吸收，因此无法用于检测白色小鼠或白化小鼠的毛发生长。

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 成像系统</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>用于获取和分析图像的凝胶成像仪，必须具备内置光源以进行反射摄影。</td></tr><tr><td>The Kodak/Tiffen Q-13 灰度标尺</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Imatest</a></td><td></td><td>灰度标准</td></tr><tr><td>C57BL/6J 小鼠</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>用于代表性研究的小鼠</td></tr><tr><td>C3H/HeJ 移植小鼠</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>用于代表性研究的小鼠</td></tr></tbody></table>

一种利用灰度分析对小鼠脱发进行定量分析的新技术

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

脱发是一种常见的毛发脱落现象，可在多种不同情况下发生，包括男性型脱发、多囊卵巢综合征以及斑秃。脱发也可能作为癌症患者化疗的副作用出现。本研究旨在建立一种稳定且可靠的方法，用于量化小鼠的毛发脱落情况，从而帮助研究人员准确评估和比较针对上述各类脱发疾病的新型治疗方法。该方法利用标准凝胶成像仪获取并处理小鼠图像，通过测量光吸收程度来反映小鼠体表黑色（或灰色）毛发量的大致比例。以该方式获得的量化数据可进一步采用标准统计学方法进行分析。即， ANOVA、T检验）。该方法已在化疗诱导脱发、斑秃以及脱蜡致脱发的小鼠模型中进行了测试。本报告提供了执行这些测量的详细方案，包括来自C57BL/6和C3H/HeJ品系小鼠的验证数据。这一新技术具有多项优势，包括操作相对简便、依赖大多数科研实验室中常见的设备，以及采用比主观评估更可靠的客观定量评估。对小鼠毛发生长量化方法的改进将有助于脱发模型的研究，并促进临床前研究中对潜在新疗法的评估。

本技术通过C3H/HeJ移植小鼠进行了验证，该小鼠是斑秃的动物模型16。这些动物会出现全身性脱发，且脱发程度随时间逐渐加重。然而，脱发呈斑片状分布，在不同小鼠之间表现可能存在差异，导致较大的变异性，从而影响定性评估的准确性。该模型为检测小鼠不同部位光学密度测量值之间的相关性提供了机会，以此作为有效性评估的依据。
第一个问题是，使用不同曝光条件、不同感兴趣区域（ROI）划定方式以及来自同一只小鼠非重叠区域的ROI所获得的测量结果之间是否存在相关性。结果显示存在显著相关性（p &lt;0.0001）在比较由矩形定义的感兴趣区域时观察到 与 小鼠背侧表面的椭圆形标准图4A）。在动物体的不同部位以及不同暴露水平下也观察到类似的高相关性（未显示）。这表明这些测量结果具有很高的精确度。此外，在F值2.0时的吸收率之间也存在显著相关性 与 1.2 使用矩形感兴趣区域（ROI）在背部背侧表面进行 &lt;0.0001, 图4B). 即使在同一小鼠的背侧与腹侧表面之间比较吸收...

脱发是一种常见的毛发脱落现象，可在多种不同情况下发生，包括作为化疗的副作用。我们建立了一种利用标准凝胶成像仪进行灰度分析来定量小鼠脱发程度的方法，以促进对有前景的新型脱发疗法的研究。

脱发是一种常见的毛发脱落现象，可在多种不同情况下发生，包括男性型脱发、多囊卵巢综合征等。

本实验的总体目标是通过光吸收法对毛发密度进行定量分析。首先在凝胶成像仪上拍摄动物图像，随后在图像上定义感兴趣区域，并测定该区域内光的吸收程度。然后将光吸收值与摄影标准进行比较。最终，可通过计算经相同处理的动物之间的平均光吸收值，来显示干预措施对毛发生长的影响。该技术的主要优点在于其无偏性、可量化性和可重复性。这一点极为重要，因为它使您能够使用标准品以及Inova等统计技术来确定结果的统计学显著性。对于本实验方案，应使用带有内置光源的凝胶成像系统进行反射摄影。这可确保光照均匀性良好，而透射照明则会产生不适合分析的剪影效应。首先准备凝胶成像仪，调节焦距和视野。使用一些印刷文字进行调整，小鼠图像可以略微失焦，因为这实际上可行。为了减少感兴趣小区域中的量子误差，需验证拍摄区域内光源的均匀性，以实现感兴趣区域内的优异光学平均效果。接下来，准备动物。选择一种起效迅速、作用时间短的麻醉剂，给予适量麻醉剂量，以确保动物在拍摄过程中保持静止。然后将动物垂直放置于成像仪上，并尽可能使其与成像平面平行。拍摄背侧照片时，将动物置于俯卧位，四肢伸展。拍摄腹侧照片时，将动物置于仰卧位。确保动物身体无侧向旋转。可以在图像之间提取吸光度值，但这并非该仪器的设计用途。因此，添加灰度标准有助于我们在整合数据时对吸光度值进行归一化处理。现在将灰度标准放置在拍摄区域内。然后关闭暗室，并减少可能进入相机视野的环境光照。将光圈调整至合适的曝光值，使目标区域既不曝光过度也不曝光不足。随后拍摄照片。如果选择的光圈值（F值）导致图像过饱和，则灰度值将固定在该值，此时B值完全无用。随后将光圈值（F.Stop）调整一级，保持感兴趣区域和标准物处于线性曝光范围内，并完成第二次拍摄。将动物置于加热台上，并在恢复期间持续监测其状态。仰卧位。然后将动物放回笼中，最终送回动物房以完成完全恢复。使用凝胶成像软件定量光吸收时，在动物全身背侧视图图像上标记感兴趣区域。使用矩形图像、椭圆形图像或手绘工具，尽可能向侧面延伸，勾勒出从上肢到下肢的区域。为获得完整的动物腹面视图，请保持在动物背部边缘范围内。使用两个矩形。一个用于覆盖经过修剪的盆腔区域，另一个用于覆盖未经修剪的胸部区域。根据需要，也可标记较小的兴趣区域，例如给药部位。第二步，在灰度吸收标准物上标记出兴趣区域。然后记录每个标记的兴趣区域的吸光度，以便在照片之间进行比较。使用曝光量与吸光度之间的对数-对数关系，将吸光度水平相对于背景标准进行归一化。为此，绘制曝光量对数与吸光度对数之间的曲线。根据灰度吸收标准获得的数值，随后对每张照片标准的差异进行校正，方法如下：首先，选择用于读取感兴趣区域（ROI）的光圈值（F-stop）和用于参考的光圈值（F-stop），并计算所有照片在读取光圈值下标准区域的平均吸收值。该平均值即为参考标准值（RSV）。接下来，计算每张照片中读数与参考F-Stop设置之间的吸光度差异，并对标准品及每个定义的ROI进行相同的计算。然后，利用某一F-Stop的数据，使用所示公式计算每个ROI的校正吸光度。随后，应用标准统计方法分析数据，对模拟斑秃ADA的C3 HHEJ移植小鼠在不同曝光条件下使用所述方法进行分析。非重叠 ROI 中的变异如预期所示呈现高度相关性。类似的比较在三周时间内均产生了同样高度的相关性。对小鼠进行成像以量化其预期的毛发脱落情况。在此时间段内，80%的成像小鼠出现了脱发。相比之下，正常的C57黑六小鼠在相同时间段内未出现任何脱发。在第二项研究中，使用所述技术对化疗诱导的脱发进行了定量分析。小鼠经环磷酰胺处理三周，两个月后与对照组相比表现出显著的脱发。掌握方法后，每张图像的分析可在五分钟内完成。观看本视频后，您应能充分理解如何使用标准凝胶成像系统对啮齿类动物的毛发生长量进行定量分析。

a-new-technique-for-quantitative-analysis-hair-loss-mice-using

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

新技术脱发的定量分析小鼠使用灰度分析

利用慢病毒介导功能获得或功能缺失，对毛囊再生模型进行组织特异性分析。...

毛发再生过程中上皮-间质信号传导的快速遗传学分析

本视频展示了一种将人类皮肤移植到中性粒细胞反应受抑制的免疫缺陷小鼠上的方法。该方法包括将人类薄层皮肤移植物贴附于小鼠的移植床，进行封闭并覆盖保护以促进恢复。最终，人类皮肤与小鼠皮肤牢固结合，建立血管化和血液循环，从而实现成功的异种皮肤移植。...

一种在小鼠模型中进行人类皮肤移植的技术

本视频展示了在小鼠耳廓毛囊中，机械刺激传入神经输出与神经末梢标记的联合记录技术。该方法概述了在暴露于荧光膜染料前后对毛囊神经末梢进行机械刺激的操作步骤、所产生动作电位的电生理记录，以及毛囊内神经末梢标记的可视化过程。...

联合记录小鼠毛囊机械刺激传入神经输出与神经末梢标记

哺乳动物的皮肤包含多种结构——如毛囊和神经末梢——这些结构具有独特的空间分布模式。将皮肤作为平铺标本进行分析，可利用该组织的二维几何特性，获得皮肤结构的全层高分辨率图像。...

小鼠皮肤平铺成像及其在毛囊排列模式与感觉轴突形态分析中的应用

本方案描述了如何在小鼠身上制备双侧全层切除性伤口，以及如何随后对伤口进行监测、采集和处理，以进行形态计量学分析。文中还包括如何利用连续组织学切片精确定义、定量检测形态计量缺陷的详细说明。...

小鼠全层皮肤缺损伤口愈合模型及组织形态计量学伤口分析

本文深入描述了一种基于显微计算机断层扫描技术的方法，用于对小鼠颅面骨进行三维模型的分割与测量，相较于现有方法，可更准确地评估小鼠颅面骨的发育情况。...

利用三维显微计算机断层扫描分析小鼠颅颌面畸形

甲襞微循环显微镜检查是一种简便易行的工具，可用于直接、经济且无创地观察微血管系统。本实验方案的目的是使研究人员能够利用甲襞微循环显微镜检查技术，观察小鼠甲床部位外周微血管的形态结构。...

利用毛细血管显微镜无创观察小鼠甲床微血管形态

本实验方案的目的是为评估C57Bl/6x129J实验小鼠的生理衰弱提供操作说明和指导。文中详细解释了生理衰弱指数中所用各项测量指标的具体内容，并介绍了多种报告衰弱结果的方法。...

衰老小鼠模型中的衰弱评估

活体双光子成像观察小鼠皮肤触觉感觉轴突形态

本文介绍了一种新颖的实验方案和试剂组合，旨在利用高内涵分析技术，对化合物和处理因素在神经元与星形胶质细胞共培养体系中的神经毒性效应进行高灵敏度检测。结果表明，高内涵分析技术是评估神经毒性的全新且富有前景的技术手段。...

一种用于神经毒性高内涵分析的神经元与星形胶质细胞共培养实验方法

学习使用凝胶成像仪和灰度分析技术对小鼠进行毛发密度定量分析的方法。该技术通过测量光吸收实现客观量化，为脱发治疗研究提供可重复的无偏评估工具。

一种利用灰度分析对小鼠脱发进行定量分析的新技术

探索更多视频