Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Katherine W. Rogers; Alexander Bl&#228;&#223;le; Alexander F. Schier; Patrick M&#252;ller

doi:10.3791/52266

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Developmental Biology

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Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

测量生活中的斑马鱼胚胎蛋白质稳定性使用荧光衰减光转化后（FDAP）

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09:45 min

January 28, 2015

DOI: 10.3791/52266-v

Katherine W. Rogers¹, Alexander Bläßle², Alexander F. Schier¹, Patrick Müller²

¹Department of Molecular and Cellular Biology,Harvard University, ²Systems Biology of Development Group,Friedrich Miescher Laboratory of the Max Planck Society

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在细胞和组织中的蛋白水平通常紧紧蛋白质生产和清除的平衡调节。使用荧光衰减光转化（FDAP）后，蛋白质的间隙动力学可以通过实验在体内测量。

以下实验的总体目标是测量活斑马鱼胚胎的细胞内和细胞外蛋白质稳定性。这是通过用光转换荧光蛋白标记目标蛋白质，并将编码融合和荧光染料的 mRNA 注射到斑马鱼胚胎中来实现的。接下来，光转化融合蛋白进行光转化，脉冲标记蛋白质。

在这个例子中，分泌融合蛋白，然后随着时间的推移监测细胞内和细胞外光转换荧光强度的衰减，并拟合指数递减的功能，以确定融合蛋白的细胞内和细胞外半衰期。结果表明，基于荧光信号随时间衰减的光转换融合蛋白的体内稳定性。这种方法可以帮助回答细胞和发育生物学领域的关键问题。

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