TIRFM and pH-sensitive GFP-probes to Evaluate Neurotransmitter Vesicle Dynamics in SH-SY5Y Neuroblastoma Cells: Cell Imaging and Data Analysis

Federica Daniele; Eliana S. Di Cairano; Stefania Moretti; Giovanni Piccoli; Carla Perego

doi:10.3791/52267

TIRFM和pH敏感的GFP-探针来评估神经递质囊泡动力学SH-SY5Y神经母细胞瘤：细胞成像和数据分析

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TIRFM and pH-sensitive GFP-probes to Evaluate Neurotransmitter Vesicle Dynamics in SH-SY5Y Neuroblastoma Cells: Cell Imaging and Data Analysis

TIRFM和pH敏感的GFP-探针来评估神经递质囊泡动力学SH-SY5Y神经母细胞瘤：细胞成像和数据分析

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13:47 min

January 29, 2015

DOI: 10.3791/52267-v

Federica Daniele¹, Eliana S. Di Cairano¹, Stefania Moretti¹, Giovanni Piccoli², Carla Perego^1,3

¹Department of Pharmacological and Biomolecular Sciences,Università degli Studi di Milano, ²San Raffaele Scientific Institute and Vita-Salute University, ³CEND Center of Excellence in Neurodegenerative Diseases,Università degli Studi di Milano

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

本文提供了一种使用 synaptobrevin2-pHluorin 构建体和全内反射荧光显微镜研究神经母细胞瘤细胞中神经递质囊泡动力学的方法。还报告了为图像处理和数据分析开发的策略。

该程序的总体目标是使用 pH 敏感探针和全内反射荧光显微镜或草皮地球研究神经母细胞瘤细胞中的神经递质囊泡动力学。这是通过首先将细胞接种在玻璃盖玻片上，然后用基因编码的囊泡融合和循环 pH 敏感荧光探针横切它们来实现的，这些探针选择性地靶向突触囊泡。预计在 24 至 48 小时内进行蛋白表达。

第二步是通过全内反射显微镜记录囊泡动力学。此步骤对于实验的成功尤为关键，并提供了有关如何实现草坪配置的分步描述。下一个。一旦达到正确的草坪配置，软件就可以在基础条件或刺激条件下自动记录序列图像。

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