小鼠面神经切断术：研究运动神经元损伤反应的模型

本实验的总体目标是暴露面神经，以研究周围神经损伤。面神经起源于脑干的脑桥，经茎乳孔离开颅骨，随后分支形成其主要组成部分。

暴露后，面神经在其自茎乳孔穿出处进行自体切断。有两个主要解剖标志有助于定位面神经。第一个是外耳道，由珍珠白色软骨板通过薄膜连接而成。

另一个是二腹肌的前腹，它位于面神经及其从茎乳孔穿出的位置之上。面神经损伤后，研究人员可以研究多种因素，例如运动神经元死亡或基因表达。面神经损伤模型是目前研究最为透彻的周围神经损伤模型之一。

该技术的优点在于操作简便、可重复性高，且后续的面神经麻痹不会影响重要的生理功能。此外，由于神经系统具有高度对称性，未损伤的一侧可作为实验的配对内对照。为确保整个操作过程中无菌技术的实施，务必提前将所有器械进行高压灭菌，并准备好玻璃珠灭菌器，以便在不同手术之间对器械进行消毒。

通过在加热垫上放置吸水垫、设置显微镜并用胶带固定鼻罩使其与视野边缘对齐，来准备手术台。麻醉小鼠后，需确保小鼠对包括脚趾夹捏在内的各种操作均无任何生理反应。随后将气流从麻醉舱转移至鼻罩，并涂抹眼膏。

将小鼠左侧卧于手术垫上，下方放置加热垫。持续监测动物呼吸，并根据需要调整异氟烷气流以维持麻醉状态。接下来，为暴露手术区域，用胶带将右耳固定至鼻罩。

应观察到耳后静脉穿过耳部。接下来，用70%乙醇润湿毛发并剃除术区毛发。去除毛发后，用碘酒和70%乙醇交替擦拭三次，彻底清洁术区皮肤。

继续进行手术。务必使动物头部侧方朝上，口部摆正，耳缘静脉呈水平走向。这将有助于更方便地找到面神经。

为确定第一处切口的位置，从耳垂处沿耳后静脉向耳突后方区域进行追踪。然后使用弹簧剪刀，在耳突后方2至3毫米处做一个4毫米的切口，此步骤出于教学目的。该切口将被扩大，以暴露其下方的解剖结构。

现在对皮下脂肪和筋膜进行钝性分离。血管和肌肉容易被剪刀损伤。如果发生出血。

用无菌棉签施加压力至少 30 秒。如果出现明显的液体流失，可用 25 或 27 号针头向腹腔内注射最多半毫升的生理盐水。现在利用关键解剖标志定位面神经。

副神经位于面神经的浅层，可见其从颅骨的乳突部穿行而出。为支配斜方肌，需辨认软骨性耳道，该结构呈珍珠白色，位于面神经的头侧。

面神经环绕耳道的髁状部分。随后辨认位于面神经上方及邻近面神经的前腹二腹肌的肌腹。在此结构下方进行解剖，以暴露面神经。

它是一个坚实的白色结构，附着于深层筋膜层。辨认面神经的主要分支，并从后方追溯其源自茎乳孔的起源。

使用精细镊子夹住并撑开手术部位，同时用弹簧剪的尖端沿面神经走行方向进行分离。用镊子可触碰到Raymond处的乳突骨孔。现在，辨认出面神经主干，以进行神经挤压损伤。

用精细镊子以恒定压力挤压30秒，以切断所有轴突。然后将挤压角度垂直旋转，再次挤压30秒。

在不同实验之间保持压力一致。现在相关解剖标志已确定，我将演示更为精细的手术技术。采用较小的切口，从耳垂处沿耳后静脉向耳突后方走行，于耳突后方 2 至 3 毫米处做一 4 毫米长的切口。

现在，利用三个解剖标志——副神经、耳道和二腹肌前腹，钝性分离皮下脂肪和筋膜。暴露面神经，沿面神经向茎乳孔方向追踪，直至到达面神经主干；用精细镊子轻柔固定，然后用剪刀切断该神经。

避免对神经施加过大的牵拉力，否则可能导致其从脑干撕脱。然后将神经残端分开，或切除一段神经，确保神经无法重新连接。最后，仔细检查神经，确认其已完全切断。

在完成解剖后，将所有脂肪和肌肉复位至其大致原始位置。随后使用7.5毫米伤口夹、缝合钉或氰基丙烯酸酯胶水关闭切口。必要时，此时可给予镇痛剂，关闭麻醉装置，并将小鼠放回无垫料的空笼中。

在动物恢复期间，检查其是否存在面瘫迹象，胡须是否瘫痪。如果胡须向脸颊后侧偏斜，鼻子会显得偏移，且眼睛对气流刺激无眨眼反应。若该动物为雌性，应将其与另一只雌性动物同笼饲养。

但如果雄性小鼠单独饲养，需在其眨眼功能恢复前每天涂抹眼膏以预防角膜并发症。同时，在手术部位愈合前持续监测小鼠是否出现感染或其他并发症的迹象。在接受面部神经横断手术的8周龄野生型小鼠中，运动神经元丢失的程度因小鼠的年龄和遗传背景而存在显著差异。

在坐骨神经切断术后28天，约有86%的运动神经元存活。在肌萎缩侧索硬化症的SOD1小鼠模型以及免疫缺陷的重组激活基因2敲除小鼠的激光捕获显微切割实验中，观察到更为显著的细胞丢失。

采用显微解剖技术分离面神经运动核的组织。可完整获取整个面神经运动核，也可分别单独收集其亚核。

该技术具有很高的精确性。可单独捕获运动神经元，剩余的神经组织也可收集用于后续分析。采用定量PCR检测腹内侧亚核（以虚线表示）和腹外侧亚核（以实线表示）中与神经再生反应相关的四个基因的表达水平。

在这些亚核之间发现了一些差异。Gap 43 表达在亚核之间的差异最为显著。一旦掌握该技术，手术可在短短几分钟内完成。

务必注意正确摆放动物体位，在准确位置做切口，并利用解剖学标志定位面神经。头颈部区域结构复杂，容易迷失方向，如果感到困惑，只需找到软骨性耳道并沿其向后追溯，即可找到面神经。