Name: 适度的产前酒精暴露在成年大鼠社会行为的量化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: 了解大鼠产前酒精暴露方案及成年期社会行为量化方法。该实验使用Sprague-Dawley大鼠，通过行为学分析评估发育神经毒性影响，为神经科学研究提供可靠模型。

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由授予 DAH 的资助 AA019462 和授予 DDS 的资助 AA019884 提供支持。

本文及配套视频中所述所有操作程序均已获得新墨西哥大学健康科学中心和主校区机构动物护理和使用委员会的批准。
1. 产前乙醇暴露
<ol>
	<li>准备所有必需的材料和化学品：糖精钠盐水合物、190 proof 乙醇（体积分数为95%的酒精）、珠状玻璃饮水管、天然白色橡胶 #4 单孔塞、1&#34; 弯管-圆珠笔头型、从 www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers/ 打印的纸质标尺。</li>
	<li>从供应商或其他来源获取已验证的成年繁殖用大鼠。本实验方案中所使用的方法及代表性数据均采用 Long-Evans 品系繁殖鼠。雌鼠到达时体重为125–150 g，年龄为6–7周，使其在交配时（步骤1.5）约为9–10周龄。确保所有待用雌鼠均为初产母鼠。雄鼠应在到达时为12周龄，并在开始繁殖程序时达到15周龄。</li>
	<li>将动物单独饲养于塑料笼中，环境温度为22 °C，采用反向12小时光照/黑暗周期（光照时间为21:00至09:00）。在整个研究期间（包括所有饮水阶段）自由供应食物和自来水。在进入步骤1.4之前，至少给予1周时间以适应新环境。</li>
	<li>记录每只雌性大鼠的基础体重。</li>
	<li>在雌性大鼠妊娠前评估其饮水水平，持续2周。按顺序执行步骤1.5.1–1.5.6。
	<ol>
		<li>在第1天和第2天，使用含有0.066%糖精溶液（不含乙醇）的饮水管。为量化摄入量，在填充液体前，将带有毫米刻度的纸质标尺贴附于饮水管上。此方法可减少通过称重饮水管来测定乙醇消耗量时产生的误差。将液体加至标尺上的20 mm刻度处。每日四小时的饮水阶段（步骤1.5.1–1.5.6和1.7）从黑暗期开始后1小时（即10:00）启动，此时动物活动和饮水行为最活跃。</li>
		<li>每次饮水阶段结束后，测定消耗的糖精溶液体积。为便于测量，应预先确定标尺上每毫米对应的溶液体积，并将毫米读数转换为体积值。对于推荐使用的饮水管，每毫米对应0.366 ml。</li>
		<li>在第3天和第4天，使用含2.5%乙醇（v/v）和0.066%糖精的自来水溶液填充饮水管。每次阶段结束后，测定消耗的乙醇溶液量（以每千克体重消耗的克数表示）。</li>
		<li>从第5天起及之后，使用含5%乙醇（v/v）和0.066%糖精的自来水溶液填充饮水管。每次阶段结束后，测定消耗的乙醇溶液量（以每千克体重消耗的克数表示）。</li>
		<li>完成妊娠前饮水阶段后，称量大鼠体重，并计算整个组别的平均乙醇摄入量及其标准差。剔除摄入量高于或低于群体均值超过1个标准差的大鼠，以降低妊娠期间自愿饮酒行为的变异性。</li>
		<li>将剩余的大鼠分配至糖精对照组或产前乙醇暴露（PAE）组，确保两组在妊娠前的饮水水平尽可能匹配。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在1–14天内，将每只雌性大鼠与一只已验证的雄性繁殖鼠配对。雌鼠在繁殖阶段不摄入乙醇。通过观察阴道栓的存在确认是否怀孕，称量雌鼠体重，并将其单独饲养。此日定义为妊娠第1天。可选操作：让雌鼠与雄鼠共处最多5天，若未发现阴道栓，则将该雌鼠从实验中剔除。 
	注意：由于妊娠期间乙醇摄入从妊娠第1天的10:00开始，因此检查阴道栓应在该时间之前完成。</li>
	<li>在整个妊娠期间，每天提供4小时（10:00至14:00）的乙醇或糖精溶液。
	<ol>
		<li>从妊娠第1天开始，根据分组情况，向雌鼠提供含0%或5%乙醇及0.066%糖精的自来水溶液。确保糖精对照组大鼠摄入的0%乙醇溶液体积与乙醇组大鼠摄入的5%乙醇溶液的平均体积相匹配。每次饮水阶段结束后，测定消耗的乙醇溶液量（以每千克体重消耗的克数表示）或糖精摄入量。</li>
		<li>每周称量一次孕鼠体重，以评估母体增重情况。</li>
		<li>始终提供食物和自来水，包括在饮水阶段期间。</li>
		<li>当仔鼠出生后，停止乙醇暴露程序。记录活产仔鼠数量及出生时体重。将出生日定义为出生后第0天。</li>
		<li>在出生后第2–3天左右将每窝仔鼠数量调整至10只。尽量保持每窝中雄性和雌性仔鼠数量相等。若无法实现，则调整至总数10只，允许性别比例不均。</li>
		<li>在出生后2–3天记录仔鼠体重。</li>
		<li>大约在出生后第21–24天断奶，并将同性别且具有相同产前处理条件的仔鼠两两合笼饲养。每个实验中每窝使用的动物不得超过1–2只，以减少潜在的窝别效应。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 社会行为
<ol>
	<li>获取并准备所有必需的材料和设备。
	<ol>
		<li>准备用于社会交互的装置。使用顶部开放、由易于清洁和消毒的材料制成的实验箱。装置正面应覆盖一层坚固的透明塑料（约 2 mm 厚度），以便拍摄。在装置内壁和底部铺设透明塑料（约 2 mm 厚度），以方便清洁和控制气味。在后内壁放置镜子，以辅助后续分析。 
		注意：本文报告的代表性数据使用了定制实验箱（长 95 cm × 宽 47 cm × 高 43 cm），顶部开放，内部侧面和底部覆盖 2 mm 厚的坚固透明塑料，并在后壁放置镜子。虽然具体尺寸和材料对社会行为的测量并非关键，但建议尺寸应足够大，以确保能够将真正的社会交互与其他行为区分开来。即，装置应足够大，使动物不会始终彼此靠近。</li>
		<li>准备可在低光或无光条件下录像的摄像机，因为所有拍摄均在可见光谱内无或极少环境光照下进行。确保摄像机在红外光谱范围内具有高分辨率，但任何可在其原生夜间模式下或配合额外红外照明设备在黑暗条件下录像的摄像机均可满足要求。</li>
		<li>在装置周围布置红外照明器，以改善视频录制中的装置照明。</li>
		<li>准备实验室级木屑（白杨木屑）。</li>
		<li>准备刷子、簸箕、二氧化氯和异丙醇（70%），用于在每次实验间隔期间清洁装置并控制气味。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>装置适应与社会行为
	<ol>
		<li>在实验的这一阶段，对至少 90 日龄的成年大鼠进行测量。</li>
		<li>每次实验前，清除装置中的木屑，用异丙醇擦拭装置以控制实验间气味，并铺上新鲜木屑。确保木屑完全覆盖装置底部。根据需要使用适当的试剂（如二氧化氯）对装置进行清洁和消毒。</li>
		<li>连续三天，将一只动物与其笼伴放入实验箱中 30 分钟，使动物适应装置环境。在适应期期间，关闭房间内所有灯光。</li>
		<li>在第三次适应期结束后，将动物单独饲养于新笼中，提供新鲜垫料、食物和水，持续 24 小时，以促进其后续的社会交互动机。</li>
		<li>在动物分离后 24 小时的次日记录社会交互行为。
		<ol>
			<li>从装置中清除木屑，用二氧化氯清洁和消毒，再用异丙醇擦拭以控制气味，并在实验前更换新的木屑。</li>
			<li>放置一个或多个摄像机以记录交互过程。至少将一台摄像机置于装置前方，使装置后壁的镜子可为分析提供额外视角。</li>
			<li>依次取出动物，并将其置于摄像机前，以便记录毛发花纹的独特特征。这些毛发特征可用于分析时区分大鼠，而无需对动物进行人工标记。 
			注意：由于啮齿类动物的许多社会交互行为涉及嗅觉信号和嗅闻同伴，应尽可能避免引入外来气味。Long-Evans 大鼠通常具有可用于区分任意一对个体的毛发花纹特征。对于其他品系（例如，Sprague-Dawley 大鼠），可采用替代方法，如用无味染料标记尾巴。需注意的是，许多关注的行为是针对特定目标的（例如，针对尾基部附近的肛殖区嗅闻、针对颈背部的 playful 攻击，或针对体侧或腹部的攻击性攻击）。建议将标记位置靠近尾尖，远离这些关注的目标区域。</li>
			<li>至少录制 12 分钟的社会交互视频。</li>
			<li>在整个实验过程中监测动物是否发生打斗。如有可能，应通过监视器或观察窗进行观察，确保实验人员不在实验室内。 
			注意：在成年大鼠的研究中，打斗行为极为罕见，但仍需全程监测动物。若出现过度打斗或动物受伤迹象，应立即终止实验。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>行为编码与分析。
	<ol>
		<li>根据以往关于 PAE1,18 的研究，识别以下关注行为。量化以下行为的持续时间、发生频率及首次出现的潜伏期：扭打（包括压制）、拳击、从同伴上方或下方爬行穿越、肛殖区嗅闻、对同伴身体其他部位的嗅闻（身体嗅闻）、异体理毛（对同伴的理毛行为）、直立、以及在木屑中的嗅闻/挖掘行为。本文视频部分展示了每种行为的示例。</li>
		<li>从视频中量化关注的社会行为。获取每种关注行为的发生频率、总持续时间和首次出现的潜伏期。 
		注意：这些测量可通过人工完成，但建议使用计算机对数字化视频进行分析以实现量化。本文提供了一个 Matlab（www.mathworks.com）脚本作为补充材料，用于视频回放和行为量化。</li>
		<li>在完成所有大鼠的行为编码后，使用统计软件包对所得的持续时间、频率和潜伏期数据进行分析。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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<li>Meaney, M. J., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+descriptive+study+of+social-development+in+the+rat+%28Rattus-Norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">A descriptive study of social-development in the rat (Rattus-Norvegicus).</a> Anim. Behav. 29 (1), 34-45 (1981).</li>
<li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prejuvenile+onset+of+play+fighting+in+laboratory+rats+%28Rattus+norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">The prejuvenile onset of play fighting in laboratory rats (Rattus norvegicus).</a> Dev. Psychobiol. 31 (3), 193-205 (1997).</li>
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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

产前酒精暴露范式在此描述的是大鼠母体在妊娠期间自愿摄入乙醇（5% v/v）的过程。文献中存在多种用于在脑发育期间对非人类动物进行乙醇暴露的实验方案，这些方案在乙醇给药的时间、剂量、持续时间、给药途径以及所研究的物种方面各有不同。尽管本文未对各种暴露方案的优缺点进行详尽讨论，但重点强调了本方案所述的自愿饮酒法在产前酒精暴露（PAE）研究中的若干优势。此前，我们曾采用液体饮食方案——该方法在该研究领域中较为常见，即大鼠母体将5%乙醇作为主要食物来源的一部分进行摄入24对照条件包括一对喂养组，其热量摄入与摄入乙醇的母鼠相匹配，以及另一组 随意摄取 可自由取用鼠粮。在此描述的自愿饮酒范式中，两组大鼠（乙醇组与糖精组）均摄取相同的鼠粮饮食，这可降低组间在营养和热量摄入方面的变异性，并最大限度减少因被迫摄入不熟悉食物来源而可能产生的应激干扰。25这一自愿饮酒范式的特点还消除了对配对喂养对照组的需求，而液体饲料方法则需要此类对照组，因此带来了一些实际和伦理上的优势，包括减少实验组数量（从三组减至两组）、减少研究所用动物数量以及降低相关研究成本。自愿摄入乙醇的4小时间歇暴露模式所产生的饮酒水...

据估计，有1%至5%的儿童被诊断患有胎儿酒精谱系障碍（Fetal Alcohol Spectrum Disorders, FASDs）2，其中包括胎儿酒精综合征（Fetal Alcohol Syndrome, FAS）、部分性FAS（pFAS）以及酒精相关性神经发育障碍（Alcohol-Related Neurodevelopmental Disorders, ARNDs）3。社会行为和认知功能缺陷是FASD患儿中最常见的不良后果之一4-7。不良影响并不仅限于重度产前酒精暴露（PAE）；即使是中度PAE，虽未导致FAS典型的显著形态学、行为和认知缺陷，仍可在FASD人群8-10以及大脑发育期间接触乙醇的非人类动物中引起相对轻微但持续存在的功能缺陷11。鉴于目前估计显示，大多数FASD病例属于该谱系中较轻的范围，因此深入理解中度PAE所导致的行为及相应神经生物学后果显得尤为重要12。
多个独立实验室已报道，在大脑发育期间暴露于乙醇会导致啮齿类动物的社会行为发生改变，包括探究和互动行为减少1,13-15、玩耍行为异常14,16,17、攻击性互动增加17,18、对社会刺激反应性的改变19-21，以及社会获得性食物偏好和社会识别记忆的缺陷22。在重度（血液乙醇浓度（BEC）~300 mg/dL）22,23或较轻度（BEC ~80 mg/dL）1乙醇暴露后均观察到社会行为缺陷，且这些缺陷在其他重要因素的广泛参数范围内均存在，包括暴露时机、暴露持续时间以及行为测定时的年龄。
先前的研究表明，成年期特定社交行为的改变能够区分产前暴露于中等剂量酒精的幼鼠与暴露于糖精的对照组动物1,18。特别是，中等程度的产前酒精暴露（PAE）始终与成年期 wrestling 行为显著增加相关，提示攻击性行为增强，同时社交探究行为（e.g.，对同伴的嗅探）水平降低。由于社交行为的改变是 PAE 可靠的后果，因此在 PAE 后对社交行为进行量化，可能有助于更全面地理解 PAE 相关社交行为改变的神经基础，并推动干预策略的发展。本文及配套视频的目标是提供中等剂量 PAE 实验方案的详细操作指导，以及成年子代社交行为的量化方法，这些方法已可靠地区分了产前酒精暴露与未暴露的大鼠子代。

<table><tbody><tr><td>水合糖精钠盐</td><td>Sigma</td><td>S1002</td><td></td></tr><tr><td>190 proof 乙醇</td><td>Sigma</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>珠状玻璃饮水管</td><td>Fisher</td><td>14-955K</td><td></td></tr><tr><td>天然橡胶白色 #4 单孔塞</td><td>Plasticoid</td><td>LSG4M181</td><td></td></tr><tr><td>1&quot; 弯管-圆珠笔尖型</td><td>Ancare</td><td>TD-199-3&quot;</td><td></td></tr><tr><td>纸质直尺</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers">www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>社交互动实验装置</td><td>定制</td><td>N/A</td><td>95 cm × 47 cm × 43 cm</td></tr><tr><td>视频摄像机</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>可记录低光或无光条件</td></tr><tr><td>红外照明器</td><td>Vitek</td><td>VT-IR1-12</td><td></td></tr><tr><td>Teklad 实验级 Sani-Chips 垫料</td><td>Harlan</td><td>7090A</td><td></td></tr><tr><td>刷子和簸箕</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>异丙醇</td><td>Sigma</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>二氧化氯（1.5 mg 片剂）</td><td>Quiplabs</td><td>N/A</td><td>按生产商推荐方法配制</td></tr></tbody></table>

中度产前酒精暴露与成年大鼠社交行为的量化分析

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

社交行为的改变是胎儿酒精谱系障碍（FASDs）儿童中观察到的主要负面后果之一。多家独立实验室已证实，在大脑发育期间暴露于酒精的啮齿类动物，其社交行为在广泛的暴露持续时间、暴露时期、剂量和行为量化年龄条件下均表现出显著改变。本实验室先前的研究已确定，在大鼠中度产前酒精暴露（PAE）后，特定形式的社交互动出现可靠且持续至成年期的行为改变，包括扭打行为增加和探究行为减少。这些行为改变有助于识别受中度PAE影响的神经环路1，可能对推进对与产前酒精暴露（PAE）相关的社会行为改变的神经基础的更全面理解具有重要意义。本文描述了实施中度产前酒精暴露的实验流程，其中雌性大鼠在妊娠期间自愿摄入乙醇或糖精（对照），以及对成年后代社会行为的测量方法。

经过多轮繁殖，处于乙醇条件下的雌性大鼠在每次持续4小时的饮酒阶段中，平均每次摄入约2.1 g/kg的乙醇。母鼠在饮水管引入后的前15至30分钟内即消耗了4小时总量的大约一半，导致在45分钟时测得的母体血清乙醇浓度峰值约为60 mg/dl。在随后剩余的3.5小时饮酒期内，它们以较低但相对稳定的速率继续摄入5%乙醇，约为0.4 g/kg体重/小时。这种水平和模式的自愿性乙醇摄入对母体体重增长、子代出生体重、产仔数、母体护理行为、胎盘湿重、行为测试时子代体重，以及全脑、海马或小脑湿重均无显著影响。
雄性大鼠在糖精和乙醇暴露后各项行为指标的代表性均值及标准误（SEM）见表1。这些数据来自先前的实验，每种产前处理条件均包含16只雄性动物。所有动物均与同一种产前处理条件的同伴配对。在本研究采用这些实验程序的情况下，尚未观察到雌性动物社交行为中与酒精相关的显著改变1；然而，使用其他实验程序已记录到雌性社交行为中与酒精相关的差异15,23。使用Mac版SPSS 21版本进行的独立单变量方差分析（ANOVAs）显示，产前乙...

本方案旨在描述在产前大脑发育期间使大鼠暴露于中等水平酒精，并在成年期量化其社交行为变化的方法。

社交行为的改变是胎儿酒精谱系障碍（FASDs）儿童中观察到的主要负面后果之一。多个……

中度产前酒精暴露及成年大鼠社交行为的量化。本视频介绍了一种产前酒精暴露模型，随后对成年期的社交行为进行量化分析。本视频中描述的所有操作均已经过新墨西哥大学健康科学中心及主校区机构动物护理与使用委员会批准。实验开始时，选取6至7周龄、体重平均为125至150克的成年雌性大鼠，以及经过验证的雄性种鼠。通常使用12周龄的动物，并至少留出一周时间让动物适应新的饲养环境。总体而言，产前酒精暴露的时间安排包括两周的暴露前准备期、一段不允许动物接触酒精的交配期，以及贯穿整个妊娠期的产前暴露期。各阶段的具体细节如下。为了评估孕前饮酒水平，雌性大鼠在为期两周的时间内自愿饮用含有逐渐增加浓度酒精的糖精水。该评估的目的是筛选出饮酒量达到预期水平的大鼠，用于后续饮酒实验阶段。酒精暴露范式的这一部分还可确保所有雌性大鼠在怀孕前均已有过饮酒经历。通过准备以下材料来制备饮用管：水合蔗糖素钠盐、190 proof 乙醇、珠状玻璃饮用管、白色天然橡胶、一号英寸带孔四号橡胶塞、带圆珠头的一英寸弯管，以及纸质直尺。用自来水配制 0.066% 蔗糖素水溶液。取部分 0.066% 蔗糖素水溶液，配制含 2.5% 乙醇的蔗糖素储备液，另取部分配制含 5% 乙醇的储备液。通过将纸制刻度尺用胶带固定在试管上，制备饮水管。用当日所需的正确溶液将试管填充至 20 毫米刻度处。确保获取每只雌性大鼠的基础体重，饮水实验每天持续四小时，从暗周期开始后一小时起进行。在第一天和第二天，雌性小鼠可饮用含0.066%糖精的水。在第三天和第四天，雌性小鼠可饮用含有2.5%乙醇的糖精溶液。从第五天开始，雌性小鼠可饮用含有5%乙醇的糖精溶液，进行为期数天的5%乙醇溶液摄饮实验。继续进行，直至完成孕前饮酒阶段。在所有饮酒阶段期间，食物和自来水均自由供应。在4小时饮酒阶段结束时，计算每公斤体重消耗的乙醇溶液重量。完成孕前饮酒阶段后，计算整个组的平均乙醇消耗量及标准差，并剔除平均消耗量高于或低于组均值一个标准差及以上的大鼠。将剩余的大鼠分配至糖精对照组或产前乙醇暴露组，尽可能匹配两组雌鼠妊娠前的饮酒水平。对于这两组，将每只雌鼠与一只经证实具有繁殖能力的雄鼠配对。在繁殖阶段，雌性大鼠不摄入酒精。当通过观察到阴道栓的存在确认怀孕后，从妊娠第一天开始分别称量雌性大鼠和Hauser的体重。根据分组安排提供酒精或糖精溶液。每天允许进食和饮用自来水四小时，在整个妊娠期间持续进行每日饮水期。每日定量记录饮水量，每周称量大鼠母体体重。当后代出生时，停止酒精暴露操作。将出生日定为出生后第零天。在出生后第2至3天将每窝幼仔调整为10只，并记录幼仔体重。大约在出生后第21至24天断奶，按相同性别的配对方式饲养，每对幼仔应具有相同的产前处理条件。每次实验中，每个窝别使用的幼仔不得超过1至2只，以减少潜在的窝别效应。成年期社会行为的量化。准备所有必需的材料和设备。我们使用一个定制的实验箱，长95厘米，宽47厘米，高43厘米。该室由复合塑料材料制成，易于清洁和消毒，具有透明的塑料前壁和开放式顶部。地面和侧壁均衬有塑料层，便于清洁。后内壁覆盖有镜面瓷砖，以辅助分析。其他所需材料包括可在低光照或无光照条件下进行录制的视频摄像机。理想情况下，摄像机应具备较高的红外光谱分辨率，以及围绕装置设置的红外照明器，以改善装置的照明条件。在视频录制实验室中，还需准备用于实验间隙清洁装置的细沙屑、刷子和簸箕，以及用于消除大鼠气味的70%异丙醇。在成年期进行测量时，大鼠在实验开始阶段至少已满90日龄。连续三天，每天将一只动物及其笼伴放入装置中30分钟，以适应装置环境。每次实验 session 开始前，需清除所有木屑。使用异丙醇擦拭装置，并提供新鲜木屑，同时使用适当的清洁剂对装置进行清洁和消毒。必要时，木屑应完全覆盖装置底部。在适应期阶段，于第三次适应期结束时关闭房间内所有灯光。将动物单独饲养在新的笼子中，并提供新鲜木屑、食物和水。在动物分离24小时后，即次日，记录社会互动行为，以评估其社会行为。首先清洁实验装置并更换木屑。放置一个或多个摄像机以记录互动过程。在本实验室中，我们利用毛发花纹的独特特征来识别个体动物；文中还描述了用于标记动物的其他替代方法。完成社会互动录像后，在本实验室中识别出感兴趣的行为。我们已量化了针对同伴的行为以及其他针对环境的行为。在之前的研究中，扭打行为以及其他社会探究行为的测量指标（如肛门、生殖器嗅闻或相互理毛）能够可靠地区分乙醇暴露动物与蔗糖暴露动物。在接下来的视频片段中，展示了每种目标行为的示例。当一只或两只动物试图扑向对方时，就会发生摔跤行为，这通常会导致其中一方将另一方侧身或仰面压住。摔跤行为之前常伴有追逐，也可能由其他行为引发，例如拳击状对抗、从对方身下穿行以及生殖器嗅闻。当动物分开时，这些行为即告终止。偶尔，如果两只动物明显分开后迅速再次开始打斗，则应将第二次打斗记录为独立事件。由于打斗需要两只动物共同参与，因此在记录时，这对动物的测量指标应当一致。您可能还希望记录哪些动物最终将对方按住，以及哪些动物被按住，同时记录哪些动物表现出追逐和扑击行为。对构成摔跤回合的行为进行单独编码也可能有助于分析。如果需要对击打行为进行更细致的分析，可观察两只动物均以后肢直立，并用四只前爪相互推挤的动作。在交配或跨越行为中，一只动物会主动爬到另一只动物的上方或从其下方钻过。在此行为中，一只动物会嗅闻同伴的肛门生殖区域。嗅闻肛门生殖区域的一个功能是进行个体识别。身体嗅闻是指对伴侣身体的其他嗅闻行为，通常指向伴侣的侧面或 flank 部位。动物间理毛是指对伴侣进行的理毛行为。理毛通常集中在颈部背侧和头部区域。在饲养过程中，动物会以后肢站立，类似于直立行为，而在垫料中挖掘和嗅探是一种常见的朝向环境的行为，可用来评估动物对实验装置中所用基质的行为反应。为了对这些行为进行编码和量化，我们使用了本实验室开发的定制MATLAB程序。该程序的主要功能包括：以可变速度播放视频；为每种目标行为设置切换按钮，按钮的开启或关闭状态表示该行为的出现或消失；自动记录每种行为的起始和终止时间；以及输出数据，包括每种行为的总持续时间、发生频率和首次出现的潜伏期。在完成所有动物的行为编码后，所得的持续时间、频率和潜伏期数据将使用统计软件包进行分析。在本示例中，你可以看到，在接触糖精和乙醇的动物之间，扭打行为的发生频率、持续时间及首次出现的潜伏期，以及肛门-生殖器嗅探的持续时间均存在显著差异。其他行为学指标未能区分各组。本视频中介绍的方法简化了产前乙醇暴露后社会行为分析的流程，使其成为一种简单高效的实验方案。除了可用于区分产前发育期间暴露于中等剂量乙醇的大鼠与未暴露动物外，这些方法还可轻松适用于其他乙醇暴露方案的评估，包括行为分析时的时间点、剂量、持续时间以及年龄等方面的变异。此外，在分析过程中可针对不同发育阶段乙醇暴露的主要效应，定制化地量化特定行为。

moderate-prenatal-alcohol-exposure-quantification-social-behavior

Research

科研

JoVE Journal

Behavior

行为

适度的产前酒精暴露在成年大鼠社会行为的量化

为了理解乙醇诱导的发育损伤的分子机制，我们建立了一种乙醇暴露的斑马鱼模型，并正在探索乙醇暴露后发生的物理、细胞和遗传改变1。随后，我们试图在此动物模型中寻找潜在的干预措施并快速对其进行测试。...

评估酒精暴露胎儿斑马鱼模型中的致畸变化

本文提出的实验设计旨在研究妊娠期间酒精暴露对胎儿大脑细胞凋亡的影响以及神经营养肽的应用。文中详细描述了从动物配种到胎儿大脑组织采集的全过程，并详细介绍了细胞凋亡检测的相关技术。...

检测神经营养肽ADNF-9在C57BL/6小鼠妊娠期间对抗酒精诱导凋亡作用的实验方法

我们展示了利用 readily available...

用于在相当于人类发育全部三个孕期阶段对小鼠进行酒精暴露的蒸气舱构建方法

有氧运动和在复杂环境中给予的刺激性体验对啮齿类动物大脑神经可塑性的多种评估指标具有积极益处。本文将探讨将这些干预措施作为 "超级干预"...

轮转跑动与环境复杂性作为FASD动物模型中的一种治疗干预手段

采用痕迹性瞬眼经典条件反射（ECC）来评估成年大鼠海马依赖性关联学习能力，这些大鼠在新生早期脑发育阶段曾接受高浓度（11.9% v/v）酒精处理。总体而言，ECC...

采用痕迹性眼睑经典条件反射评估胎儿酒精谱系障碍大鼠模型中的海马功能障碍

本研究介绍了一种利用顶空气相色谱法测定斑马鱼胚胎中乙醇含量的实验方案，内容涵盖从适当的暴露方法到胚胎处理及乙醇分析的全过程。...

利用顶空气相色谱法测定斑马鱼胚胎中的乙醇含量

本文介绍了一种用于研究酒精使用障碍的小鼠2BC/CIE酒精依赖模型的实验方案。...

慢性间歇性乙醇蒸气暴露联合双瓶选择法模拟酒精使用障碍

本实验方案的目的是阐述建立和使用成年斑马鱼社会偏好检测方法的必要步骤，并证明该方法可用于表征乙醇诱导的社会行为缺陷。...

在斑马鱼中建立胎儿酒精谱系障碍模型以表征不良胚胎环境对成年社会行为的影响

本方案描述了一种标准的间歇性接触双瓶选择家庭笼具饮酒范式，用于模拟大鼠的酒精摄入行为。此外，本方案还提供了逐步指导，通过添加自制的舔舐检测系统来增强标准方案，从而实现对饮酒行为的微结构分析。...

使用双瓶选择家庭笼饮酒法与微观结构分析对啮齿类动物饮酒行为建模

随着立法限制的变化，大麻素产品的可及性增加，因此建立研究这些暴露影响的模型变得至关重要，尤其是在妊娠期间。目前已开发出一种通过自愿摄入实现产前中等程度大麻素暴露的临床前模型，可支持更深入的研究。...

产前暴露于Δ9-四氢大麻酚的临床前模型以评估其对神经发育结局的影响

了解大鼠产前酒精暴露方案及成年期社会行为量化方法。该实验使用Sprague-Dawley大鼠，通过行为学分析评估发育神经毒性影响，为神经科学研究提供可靠模型。

中度产前酒精暴露与成年大鼠社交行为的量化分析

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