在鼠背耳蜗核的听觉通路的光遗传学刺激直接可视化

该程序的总体目标是通过手术进入小鼠模型中的耳蜗核，以实现基于光遗传学的实验。这是通过首先为小鼠准备开颅手术并横向缩回覆盖在头皮上的皮肤、软组织和肌肉来实现的。作为第二步，在左侧顶骨间进行开颅手术，距离 lambda 缝合线约 2 毫米。

该区域覆盖在耳蜗核上。接下来，使用 5 French 抽吸管抽吸覆盖 DCN 的左小脑最外侧部分。结果显示 DCN 的无障碍视图。

与立体定向引导等辅助方法相比，该技术的主要优点是既可以实现耳蜗核的直接可视化，又可以将光源或电极阵列等神经模拟器放置在脑干表面。这种方法可以帮助我们回答光遗传学和听觉领域的关键问题。没有假体，例如基因转移可以使听觉脑干受到光线的刺激，具有足够的面部和颞叶分辨率。

通过腹膜内给药用氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉小鼠后，检查脚趾捏撤退反射，并监测其心率和呼吸频率以确认麻醉正常。然后在双眼涂抹兽医药膏以防止干燥。接下来，剃掉头皮上的毛发，以便畅通无阻地进入手术部位。

之后，将鼠标放入小动物立体定位支架中。调整鼻子夹，使其足够松动以允许足够的呼吸，但又足够紧以完全固定鼠标的头部。在显微镜下，在皮肤上做一个垂直切口，从耳廓之间的中线开始，一直延伸到枕骨的顶端部分。

然后横向移位皮肤。用手术刀或虹膜剪刀去除覆盖在颅骨左顶骨、顶骨间和枕骨上的肌肉。同时，用棉签涂抹器 10 到 15 秒轻轻按压，以尽量减少出血。

接下来，确定矢状缝合线和 lambda 缝合线。使用一对 Ron 珠宝。在左侧顶骨间进行开颅手术，约 2 毫米，靠近 lambda 缝合线。

开颅手术后，该区域覆盖在 DCN 上。应观察覆盖在小脑上的薄硬脑膜，使用手术刀刀片小心地将其去除。用棉签去除凝固的血液，或将生理盐水轻轻滴在小脑上以清除血液。

然后使用 5 French 抽吸管抽吸左小脑的最外侧部分，覆盖 DCN 以提供帮助。抽吸时，将显微镜的焦平面设置在耳蜗核的预期深度，以改善可视化并确保清晰的图像。切除大约四分之一到三分之一的左小脑。

毗邻 DCN 的主要地标是上半圆运河的 AM。抽吸后，进一步出血、脑脊髓液积聚和 DCN 上的小脑移位将迅速将生理盐水滴入开颅手术中，以防止血液凝固。将轻柔的轻拍与牙尖和抽吸相结合，为直接观察 DCN 扫清道路。

在 DCN 清晰可见且没有上覆的血液和 CSF 后，用 5 微升气密 Hamilton 注射器将载体压力微量注射到其中。使用带有浅斜面的 34 号针头，以尽量减少钝伤并将注射量定位在 DCN 内。然后用微型纵器慢慢引入针头，直到尖端在 DCN 表面下不再可见。

开始注射 1.5 μL 载体。完成后，慢慢抽出针头，然后重新接近皮肤，并让鼠标按照标准恢复程序恢复。经过 2 到 4 周的愈合和病毒介导的基因转移孵育后，重新麻醉载体注射的小鼠，然后去除开颅手术部位的疤痕组织。

之后，确定覆盖 DCN 的剩余小脑和瘢痕组织的组合。使用 5 French 抽吸吸出覆盖的小脑和疤痕组织。追随抱负。

快速将生理盐水涂抹到开颅手术中。为了防止血液凝固，请结合使用轻柔的牙尖轻拍和抽吸来清理路径，以便直接观察 DCN。DCN 现在可用于基于光遗传学的生理学实验，此处显示是将激光光纤直接放置在 DCN 的表面上，这允许在受感染的 DCN 表面对视蛋白感染的 DCNA 蓝光脉冲系列进行光学刺激，从而产生光驱动的听觉脑干反应。

使用微型机械手，将耦合到蓝光激光器的光纤直接放置在耳蜗核表面并打开。在这里，我们可以识别耳蜗核表面的脉冲蓝光。按照这个程序，可以执行其他方法，例如电模拟原子核，使我们能够直接比较声学诱发的神经反应，以及电诱发的神经反应与光学模拟诱发的神经反应。

看完这个视频后，你应该对如何准备和进行开颅手术和小脑穿刺术有一个很好的了解，最终目标是直接观察和进入耳蜗核。