Name: 适用于鼠标机关高精度锌同位素测量 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 学习高精度测量小鼠器官锌同位素比值的方法，通过酸溶解、离子交换色谱纯化和质谱分析，揭示锌在器官间的分布与转运机制，为神经科学和疾病诊断提供重要数据。

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FM 承认获得以下资助：法国国家研究局（ANR）通过索邦巴黎西岱大学卓越讲席项目、法国国家宇宙科学研究所（INSU）的PNP资助项目、法国大学研究所，以及索邦巴黎西岱大学Labex UniverEarth项目（项目编号：ANR-10-LABX-0023 和 ANR-11-IDEX-0005-02）提供的经费支持。我们还感谢欧洲研究理事会（ERC）在欧盟“地平线2020”框架计划下的资助（资助协议号：#637503，Pristine项目）。

注意：涉及动物的实验程序已获得巴黎狄德罗大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
1. 材料准备
<ol>
	<li>对1升酸（HNO3、HBr）进行亚沸蒸馏，以去除其中的杂质。</li>
	<li>将烧杯和移液器吸头适配器在热的（约100 °C）浓HNO3酸浴中浸泡至少两天进行清洗。</li>
	<li>将移液器吸头在冷的3 N HNO3溶液中浸泡数天，然后用去离子水逐个冲洗三次。</li>
</ol>
2. 样品制备
<ol>
	<li>通过腹腔注射氯胺酮和赛拉嗪使小鼠麻醉。采用脚趾夹捏法评估麻醉效果。</li>
	<li>在含有肝素的1.5 ml离心管中，通过心脏穿刺采集血液。</li>
	<li>通过离心（10分钟，1,500 × g）将血浆与血细胞分离，并使用聚丙烯吸头将血浆转移至聚丙烯冻存管中。</li>
	<li>通过剪断肝静脉并经心脏注入DPBS，清除器官中的残留血液。通过颈椎脱位法确认小鼠死亡。</li>
	<li>使用无菌不锈钢器械取下器官，去除周围脂肪（如有），并在聚丙烯冻存管中迅速冷冻。</li>
</ol>
3. 化学纯化
<ol>
	<li>首先，将样品溶解于约 1 ml 浓（30%）H2O2 和约 1 ml 浓（~15 M）HNO3 的混合液中。所有步骤均需在通风橱内进行。
	<ol>
		<li>将目标器官整体放入一个 15 ml 聚四氟乙烯（Teflon）烧杯中，然后向烧杯中加入 H2O2/HNO3 混合液5。保持烧杯敞口数分钟，以避免因有机物氧化反应及 CO2 释放导致的溅出。</li>
		<li>最后，将烧杯置于约 100 °C 的加热板上加热数小时，直至溶液完全澄清。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>打开烧杯，继续在约 100 °C 的加热板上将溶液蒸干。</li>
	<li>样品干燥后，向其中加入 1 ml 1.5 N HBr；盖上烧杯并置于 100 °C 加热板上加热数小时，使其充分溶解。</li>
	<li>同时准备 500 µl 层析柱。
	<ol>
		<li>向层析柱中加入 500 µl AG1X8 200-400 目树脂，并将其安装在层析柱架上，下方放置废液收集烧杯。依次用 5 ml 18.2 MΩ ⋅ cm 水、5 ml 0.5 N HNO3、5 ml 水、5 ml 0.5 N HNO3 和 5 ml 水交替洗涤树脂。最后用 5 ml 1.5 N HBr 对树脂进行预平衡处理。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将烧杯从加热板上取下，放入超声浴中处理约 30 分钟，随后让烧杯冷却至室温。</li>
	<li>待烧杯冷却且树脂完成洗涤后，打开烧杯。将接头适配器安装至注射器上，连接移液枪头，吸取 1 ml 样品溶液，并缓慢加载至树脂柱上（避免扰动树脂床）。</li>
	<li>待全部液体流经层析柱后，加入 5 ml 1.5 N HBr。</li>
	<li>当 5 ml 1.5 N HBr 完全通过层析柱后，将下方的废液收集烧杯更换为洁净的 15 ml 烧杯。</li>
	<li>分次加入共 5 ml 0.5 N HNO3，每次 2.5 ml。此阶段锌（Zn）将从树脂上被洗脱下来。</li>
	<li>当 5 ml HNO3 完全通过层析柱后，取下收集烧杯并置于 100 °C 加热板上蒸干。</li>
	<li>从柱架上取下层析柱，弃去树脂（每个样品需使用新的树脂）。</li>
	<li>样品干燥后，在更小的层析柱（100 µl）上以相同体积的酸重复上述操作流程，随后置于加热板上蒸干。样品现已准备好用于质谱分析。</li>
</ol>
4. 质谱测量
<ol>
	<li>使用多接收器电感耦合等离子体质谱仪（MC-ICP-MS）分析锌（Zn）同位素组成。
	<ol>
		<li>采用 表1 中总结的仪器参数。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>调整法拉第杯位置，以采集质荷比（m/z）为 62Ni、63Cu、64Zn、65Cu、66Zn、67Zn 和 68Zn 的信号。</li>
	<li>配制含有 500 ppb Zn 的 0.1 M HNO3 溶液用于同位素分析。</li>
	<li>使用喷雾室结合 100 µl/min 聚四氟乙烯雾化器分析 500 ppb 的 Zn 溶液。每个样品测量 30 次扫描（1 个包含 30 个循环的区块），每次扫描的积分时间为 8.389 秒。</li>
	<li>通过从样品信号中扣除空白溶液（用于重新溶解样品的 0.1 M HNO3 溶液）的峰上零强度值来校正背景。</li>
	<li>通过测量 62Ni 峰的强度来控制并校正可能存在的 64Ni 同量异位素干扰。假设 64Ni/62Ni 比值为自然丰度比值（0.2548），根据仪器质量歧视效应校正该比值，然后按下式从质量数 64 处扣除 64Ni 的贡献： 
	64Zn实际 = 64Zn实测 - 64Ni = 64Zn实测 - (64Ni/62Ni)自然 × 62Ni实测。</li>
	<li>通过在每个样品前后插入 500 ppb 的 JMC Lyon Zn 标准溶液（或其它可用标准，如 IRMM-3702）进行标准样品夹心法校正仪器质量歧视效应。具体方法为：将样品的 66Zn/64Zn 比值除以该样品前后两次测得的标准溶液 66Zn/64Zn 比值的平均值，减去 1，再乘以 1,000（见 公式 1）。JMC Lyon Zn 标准物质的典型外部精度为 0.05‰/amu（2 倍标准偏差，2 s.d.）。</li>
</ol>

<ol><li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li>
<li>Marechal, C. N., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+fractionation+of+copper+and+zinc+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange fractionation of copper and zinc isotopes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 66 (9), 1499-1509 (2001).</li>
<li>Weiss, D. J., Mason, T. F. D., Zhao, F. J., Kirk, G. J. D., Coles, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+discrimination+of+zinc+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Isotopic discrimination of zinc in higher plants.</a> New Phytologist. 165 (3), 703-710 (2005).</li>
<li>Jouvin, D., Louvat, P., N, M. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotopic+fractionation%3A+why+organic+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Zinc isotopic fractionation: why organic matters.</a> Environ Sci Technol. 43 (15), 5747-5754 (2009).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+and+transport+mechanisms+of+Zn+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation and transport mechanisms of Zn in plants.</a> Chemical Geology. 267 (3-4), 125-130 (2009).</li>
<li>Moynier, F., Herzog, G., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+composition+of+zinc%2C+copper%2C+and+iron+in+lunar+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Isotopic composition of zinc, copper, and iron in lunar samples.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 70 (24), 6103-6117 (2006).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+of+zinc+in+tektites%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation of zinc in tektites.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 277 (3-4), 482-489 (2009).</li>
<li>Chen, H., Savage, P., Teng, F. Z., Helz, R., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+fractionation+during+magmatic+differentiation+and+the+isotopic+composition+of+the+bulk+Earth%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope fractionation during magmatic differentiation and the isotopic composition of the bulk Earth.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 369-370, 34-42 (2013).</li>
<li>Moeller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+the+new+certified+materials+ERM-AE633+and+ERM-AE6447+for+copper+and+IRMM+3702+for+zinc+isotope+amount+ratio+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Geostd.+Geoan.+Res%22%5BJournal%5D)">Calibration of the new certified materials ERM-AE633 and ERM-AE6447 for copper and IRMM 3702 for zinc isotope amount ratio determination.</a> Geostd. Geoan. Res. 36 (2), 177-199 (2012).</li>
<li>Bigeleisen, J., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+equilibrium+constants+for+isotopic+exchange+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Calculation of equilibrium constants for isotopic exchange reactions.</a> J. Chem. Phys. 15, 261-267 (1947).</li>
<li>Luck, J. M., Ben Othman, D., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+and+Cu+isotopic+variations+in+chondrites+and+iron+meteorites%3A+Early+solar+nebula+reservoirs+and+parent-body+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Zn and Cu isotopic variations in chondrites and iron meteorites: Early solar nebula reservoirs and parent-body processes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 69 (22), 5351-5363 (2005).</li>
<li>Moynier, F., Dauphas, N., Podosek, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Search+for+70Zn+Anomalies+in+Meteorites%5BTitle%5D)+AND+%22Astrophys.+J%22%5BJournal%5D)">A Search for 70Zn Anomalies in Meteorites.</a> Astrophys. J. 700 (2), L92-L95 (2009).</li>
<li>Paniello, R., Day, J., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+isotope+evidence+for+the+origin+of+the+Moon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zn isotope evidence for the origin of the Moon.</a> Nature. 490 (7420), 376-380 (2012).</li>
<li>Pichat, S., Douchet, C., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+variations+in+deep-sea+carbonates+from+the+eastern+equatorial+Pacific+over+the+last+175+ka%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+and+Planetary+Science+Letters%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope variations in deep-sea carbonates from the eastern equatorial Pacific over the last 175 ka.</a> Earth and Planetary Science Letters. 210 (1-2), 167-178 (2003).</li>
<li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bodily+variability+of+zinc+natural+isotope+abundance+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Com.+Mass.+Spec%22%5BJournal%5D)">Bodily variability of zinc natural isotope abundance in sheep.</a> Rapid Com. Mass. Spec. 24, 605-612 (2010).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+Cu%2C+Fe%2C+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep%2C+with+emphasis+on+cellular+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li>
<li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li>
<li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS%3A+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Geol%22%5BJournal%5D)">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li>
<li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Atom.+Spec%22%5BJournal%5D)">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

通过在不同分析批次中对同一样品进行重复分析，评估测量结果的可重复性。例如6，我们对同一种陆地岩石样品进行了7次重复分析，得到的结果如表2所示。
根据同位素分馏理论10以及迄今为止在所有已测的太阳系物质（例如，&#160;陨石11-13、植物3-5、深海沉积物14、动物15-17）中的测量结果，本研究结果符合质量依赖性规律（见图1）。δ68Zn的值约为δ66Zn的两倍（图1），因为68Zn与64Zn之间的质量差是66Zn与64Zn之间质量差的两倍。这表明我们的测量结果不受同量异位素干扰的影响（此类干扰会使数据偏离直线），且锌同位素来自相同的同位素储库并发生分馏。
<p class="jove_con...

由于多接收等离子体质谱仪的发展，高精度（优于100 ppm/原子质量单位）锌稳定同位素组成的测定仅在约15年前才成为可能，此后主要应用于地球与行星科学领域。在医学领域的应用是新兴的，对于改变锌代谢的疾病（例如，阿尔茨海默病）具有作为生物标志物的巨大潜力。本文报道了一种用于精确测定小鼠多种器官中天然锌稳定同位素比值的方法，该方法同样适用于人类样本。该方法包括器官的溶解、锌与其他元素的化学分离纯化，随后在质谱仪上进行同位素比值分析。
锌同位素测量的准确性取决于化学纯化的质量（锌的纯度高、相对于样品中锌含量的空白值低、化学回收率高）以及对仪器偏差的有效控制。最终锌组分的高纯度对于消除同量异位素干扰和引起基质效应的非同量异位素干扰至关重要。同量异位核素会产生直接干扰（例如，64Ni）。非同量异位干扰则产生所谓的“基质”效应，通过改变离子化条件而影响测量的分析精密度，这种离子化条件与作为比对基准的纯锌标准物质不同1。低空白值（&#60; 10 ng）表明样品未受到外来锌的污染，否则会扭曲测得的同位素组成。由于锌同位素在离子交换色谱过程中可能发生分馏2，因此必须完全收集所有锌原子，以确保不发生同位素分馏，这意味着化学处理过程应实现完全回收。最后，质谱测量过程中仪器引起的同位素分馏校正采用“标准品夹心法”进行。
因此，获得精确测量结果的主要困难在于控制外部污染（即， 低空白），实现完全产率的化学纯化，去除所有其他原子或分子，并校正质谱仪中的仪器同位素分馏效应。本文将描述我们从鼠类器官中分离锌的分析流程以及质谱测量方法。
提取过程采用微量稀释酸（HBr/HNO3 体系）在阴离子交换树脂的微柱（0.5 µl 和 0.1 µl）上进行。该方法回收率完全，对 66Zn/64Zn 比值的测量外部重复性优于 50 ppm。该方法的另一优势是速度非常快。因此，该方法特别适用于医学科学领域，相较于地球科学（这些分析方法最初在此领域开发），医学科学通常需要分析更大量的样品。

<table><tbody><tr><td>多通道电感耦合等离子体质谱仪</td><td>Thermo-Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>阴离子交换树脂 AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>特氟龙烧杯</td><td>Savillex&amp;nbsp;</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>自制特氟龙柱，采用可收缩特氟龙材料制成</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

高精度锌同位素测定在小鼠器官中的应用

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

我们介绍一种高精度测定小鼠器官中锌同位素比值的方法。锌由5种稳定同位素组成（64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn 和 70Zn），这些元素在小鼠器官中天然存在分馏现象。我们首先展示如何溶解不同器官以释放Zn原子；该步骤通过HNO₃和H₂O₂的混合液完成。3 和 H2O2然后，我们从所有其他元素中纯化锌原子，特别是去除同量异位素干扰（例如，Ni)，通过在稀 HBr/HNO₃ 中进行阴离子交换色谱分离3 培养基。前两步操作均在洁净实验室中使用高纯度化学试剂完成。最后，采用低分辨率多接收电感耦合等离子体质谱仪测定同位素比值。样品通过雾化室进样，并利用标准物质比值校正法（标准 Bracketing 技术）对质谱仪引起的同位素分馏进行校正。&#160;完整的典型&#160;该方法产生的同位素比值具有50 ppm（2倍标准偏差）的重现性。

在1.5 N HBr中，主要的锌物种（ZnBr₃⁻）与阴离子交换树脂形成非常稳定的络合物，而大多数其他元素不与树脂发生相互作用。随后通过将介质转换为稀释的HNO₃来回收锌。3，改变锌的形态为Zn2+ 从树脂中释放6,7.
同位素比值通常以相对于标准的千分之一偏差表示：
<img alt="δ⁶⁶Zn同位素比值公式，ΔZn=(样品/标准品)−1×1000，方程图示。" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52479/52479eq1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Equation 1">

其中 x = 66 或 68。所用标准物质为锌“里昂”标准 JMC 3-0749 L1。“里昂”标准...

我们介绍了在小鼠器官中高精度测定锌同位素比值的技术。

我们介绍一种高精度测定小鼠器官中锌同位素比值的方法。锌由5种稳定同位素组成（64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

本实验的总体目标是高精度测定小鼠器官中的锌同位素比值。首先将不同器官用酸溶解，使所有原子释放到溶液中；随后进行消解处理，将干燥后的样品重新悬浮于氢溴酸中，再使用经预处理的重力柱进行离子交换色谱分析，从而从样品的所有其他元素中纯化锌。最后用硝酸从树脂中洗脱锌。最后一步是使用多接收电感耦合等离子体质谱仪测量锌同位素比值。最终，通过测定锌同位素在不同器官中的平衡分布，利用同位素组成来诊断影响体内锌平衡的疾病。因此，该方法的开发旨在揭示锌在小鼠器官之间自然分布及转运机制。该方法可应用于任何动物，并最终用于诊断那些改变器官间锌平衡的疾病，例如阿尔茨海默病。开始实验前，请按照文本方案中的说明准备材料和样品，在通风橱中进行化学纯化操作，配制约1毫升30%过氧化氢与约1毫升浓硝酸的混合液。将目标完整器官放入一个15毫升聚四氟乙烯烧杯中。然后将混合物加入烧杯中。将烧杯敞口放置几分钟，以避免因有机物氧化反应及二氧化碳释放导致的溅出。最后，将烧杯置于约100摄氏度的加热板上加热数小时，直至溶液完全澄清。接下来，打开烧杯，将溶液在约 100 摄氏度的加热板上烘干。样品干燥后，向样品中加入 1 毫升溴化氢。盖上烧杯，于 100 摄氏度加热板上加热数小时，使其溶解。同时，准备500微升柱。将500微升Ag 1×8 200 400目树脂加入柱中，并将柱置于柱架上，下方放置废液杯。用5毫升18.2兆欧·厘米水和5毫升0.5当量硝酸交替洗涤树脂两次，然后用5毫升水洗涤。最后用五毫升溴化氢对树脂进行平衡处理。接着，将烧杯从加热板上取下，放入超声波浴中，静置约30分钟，使烧杯冷却至室温。待烧杯冷却且树脂完成洗涤后，打开烧杯。将吸头适配器安装到注射器上，并装上移液吸头。然后吸取一毫升样品，缓慢地将其加样至树脂上，注意不要搅动树脂。待所有液体流经层析柱后，加入五毫升溴化氢溶液。让溴化氢通过色谱柱，然后将废液烧杯更换为一个干净的15毫升烧杯。随后分两次加入共5毫升硝酸，每次2.5毫升。在此阶段，锌从树脂上被洗脱下来。当硝酸流经色谱柱后，取下烧杯并将其置于100摄氏度的加热板上加热至干燥。将色谱柱从柱架上取下，并弃去树脂。待样品完全干燥后，使用相同体积的酸在较小的100微升色谱柱上重复上述操作步骤，然后将其置于加热板上加热至干燥。样品现已准备好进行质谱分析。使用多接收电感耦合等离子体质谱仪分析锌同位素组成。按照文本方案中总结的参数设置仪器。将法拉第杯定位，以收集镍62、铜63、锌64、铜65、锌66、锌67和锌68的质荷比信号。接下来，使用喷雾室结合流速为100微升每分钟的聚四氟乙烯雾化器，分析0.1摩尔硝酸中含500十亿分之一浓度锌的溶液。每个样品测量30次扫描，每次扫描的积分时间为8.389秒。通过减去空白溶液对照的峰上零强度来校正背景，并校正可能存在的镍64同位素多原子干扰。通过测量镍62峰的强度，假设镍64与镍62的比值为自然丰度比值。根据仪器质量偏差对该值进行校正，然后按照文本方案中所述，从质量数64处去除镍64信号，并通过在每份样品前后交替测定500十亿分之一浓度的JMC Leon锌标准溶液，对仪器的质量偏差进行校正。以下是使用该方法获得的典型结果，即Delta Zinc 68与Delta Zinc 66的三同位素图。对于不同器官，所有器官的数据点均落在斜率为2的直线上。这表明同位素分馏具有质量依赖性，且小鼠各器官在同位素组成上具有可区分的特征。有趣的是，与血清、脑和肝脏相比，红细胞和骨骼中的锌-66同位素含量更高。这种分馏现象可通过锌在不同器官中不同化学键合环境之间同位素的平衡分布得到合理解释。观看视频后，您应能够充分理解如何获得小鼠器官中高精度的锌同位素测量结果。请务必注意，主要难点在于避免样品被外源性锌污染，因此必须在洁净的实验室中操作，并使用高纯度的化学试剂。

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化学

适用于鼠标机关高精度锌同位素测量

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使用生物正交化学进行预靶向的99mTc标记三齿螯合物的制备与评价

本方案描述了使用体成分分析仪和代谢动物监测系统来表征小鼠体成分及代谢参数的方法。以高脂饮食诱导的肥胖模型为例，展示了这些技术的应用。...

高脂饮食小鼠的身体成分与代谢笼分析

在使用动物模型之前，培养的原代细胞或永生化细胞系通常被用作研究基本生物学和机制问题的初步方法。本实验方案描述了如何制备全细胞提取物和亚细胞组分，用于通过原子吸收光谱法研究锌（Zn）及其他微量元素。...

原子吸收光谱法测定哺乳动物细胞内锌池

本实验方案的目的是通过从感染小鼠的多个器官中分离和定量寨卡病毒，展示研究病毒性疾病的常用技术。...

从小鼠多个器官中分离与定量寨卡病毒

我们提出一种稳健、经济且灵活的方法，用于检测固定或冷冻保存的组织样本中肝细胞数量和细胞核倍性的变化，该方法无需流式细胞术。本方法可提供理想的全样本肝脏细胞学特征，适用于追踪肝损伤和肝脏疾病的进展过程。...

一种用于评估小鼠肝细胞核多倍性的高通量原位方法

双重树脂铸型微计算机断层扫描，即 DUCT，可实现对两种管状系统的同步可视化、数字化和分割，从而促进器官结构的三维分析。DUCT 结合了 离体 注射两种造影树脂，随后进行显微计算机断层扫描及断层数据的分割。...

DUCT：双重树脂铸型结合显微计算机断层扫描用于肝脏三维分析

本文演示了如何制备和施用转铁蛋白结合的非放射性同位素铁，用于小鼠妊娠期间铁转运的研究。同时描述了定量胎盘胎儿各部分中同位素铁含量的方法。...

定量测定小鼠胎盘中的铁转运 在体 内 使用非放射性铁同位素

本文详细介绍了对一种人源特异性抗CD19单克隆抗体进行放射性标记的方法，以及如何利用该标记抗体在多发性硬化小鼠模型中定量中枢神经系统及外周组织中的B细胞 体内 PET成像， 离体...

使用正电子发射断层扫描在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型中成像 CD19+ B 细胞

本文描述了一种新型放射性标记探针（即68Ga标记的纳米抗体NM-02）的放射性合成、制剂制备、质量控制，及其在异种移植模型中小动物PET/CT成像中的应用。...

68Ga标记纳米分子的放射性合成、质量控制及小动物正电子发射断层成像

学习高精度测量小鼠器官锌同位素比值的方法，通过酸溶解、离子交换色谱纯化和质谱分析，揭示锌在器官间的分布与转运机制，为神经科学和疾病诊断提供重要数据。

高精度锌同位素测定在小鼠器官中的应用

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