神经活动的传播的展开海马准备具有穿透微电极阵列

该程序的总体目标是引入展开啮齿动物海马体并将扁平组织制备物放在穿透性微电极阵列上的过程。用于录制。这是通过首先将小鼠海马体与其大脑的一半分离来实现的。

第二步是用定制的工具展开海马体的弯曲结构。接下来，将展开的海马体转移到记录室并放置在记录阵列上。最后一步是在实验后从阵列中取出未折叠的海马体。

最终，在数据分析中使用个体归一化映射方法来显示穿透微电极阵列记录的神经活动传播。嗯，这种技术的主要优点是它允许我们记录横向和纵向两个方向的神经活动。为了看到神经活动的实际传播，您需要一个完整的海马体，展开凹陷罐并平放在记录室中，然后传播将横向和纵向进行。

然后我们能够计算出组织的传播速度。我们在两个方向上都进行了活动，我们能够研究传播机制，特别是非突触机制。我们能够看到活动通过间隙连接进行突触传递传播，并且由于速度，我们知道这不是扩散。

所以现在我们正在努力弄清楚这种传播的实际机制。通常，刚接触这项技术的人会很费力，因为展开海马体并将扁平组织制剂放在这个穿透性微电极阵列上而不会损坏组织或阵列的程序具有挑战性。要开始此过程，请将小鼠头部置于冰冷的含氧蔗糖中。

CSF 使用一把细剪刀去除颅骨的皮肤。接下来，沿中线切开头骨，并在颞叶附近切开两端。然后将切开的头骨向头部两侧剥皮。

为了暴露大脑，小心地用刮刀从头骨中取出大脑。之后，将大脑放在覆盖有湿滤纸的冰冷手术台上。用冰冷的刀片去除小脑。

随后通过切开大脑的中线来分离两个半球。然后将两个分开的半球放入装满冰冷蔗糖的烧杯中。脑脊液中含有 95% 氧气、5% 二氧化碳。

将一个半球转移到覆盖有滤纸的冰冷阶段。将普通纸巾或滤纸放在大脑周围以吸收多余的溶液。之后，使用两个火抛光玻璃移液器将皮层与大脑的中央部分分开，以暴露海马体。

接下来，在组织上滴两到三滴冰冷的 suse A CSF，并去除多余的溶液。切断与海马体两端皮层的连接。然后用火抛光玻璃工具从大脑中解剖海马体。

随后将整个海马体分开，其 ous 面朝上，海马沟朝下 再次在组织上快速滴入两到三滴冰冷的 sase CSF，并去除其周围多余的溶液。然后用火抛光玻璃工具把整个海马体翻过来。要暴露沟，请使用冰冷的刀片修剪海马体的间隔端和颞端。

如有必要，将定制的玻璃针插入脑沟，并从 DG 到 ca 3 切割纤维轨迹。然后使用金属丝环将 DG 拉过来并展开海马体。整个手术过程通常持续约两分钟。

在组织上再滴两到三滴冰冷的蔗糖 A CSF，并去除周围多余的溶液。然后用冰冷的刀片修剪展开的海马体的边缘。将制剂转移到装有正常 A CSF 的恢复室中，并在室温下用 95% 氧气、5% 二氧化碳鼓泡一小时，然后再转移到记录室。

在此过程中，用普通 A CSF 填充一瓶，用四个 AP A CSF 泡填充另一个瓶子。实验开始时含有 95% 氧气、5% 二氧化碳的溶液。使用三壳阀连接器来控制在实验期间将选择哪种溶液。

接下来，将真空管连接到腔室的出口。要将溶液取出到集尘容器中，请在将溶液输送到记录室之前加热管道，并将其保持在 35 摄氏度的受控温度下。关闭记录室的入口和出口后，使用定制的玻璃移液器滴管将展开的海马体转移到记录室。

在显微镜下，将展开的海马体，其 alvia 侧朝下，ca 一个区域指向远处，ca 一个区域指向研究人员，使用真空移液器从记录室边缘小心地吸出腔室中的溶液，直到腔室干燥并且组织位于阵列上。然后小心地在组织顶部放置一个定制的组织锚，以将展开的海马体固定在阵列上。用几滴溶液重新填充记录室。

逐渐打开入口和出口，将 IV trip 腔中的流速调整为每秒约 2 滴。将记录室中的组织与正常 A CSF 一起孵育约 1 分钟。然后切换解决方案。

应用于 4 个 AP 溶解的 A CSF 并适当调整流速。记录前，将组织在 4 个 AP 溶解的 A CSF 中孵育约 5 至 10 分钟。要从 PMEA 中取出组织，请通过微型纵器控制组织锚点，并逐渐将锚点从记录室中提起。

关闭入口和出口以停止流动。在记录室中，使用小画笔提起纸巾的一角。如果组织没有漂浮在溶液中，请使用真空管小心地干燥腔室，同时组织仍位于阵列上。

然后小心地打开进样口以逐渐重新填充腔室，并关闭进样口以停止液流。当记录室装满时，使用小画笔提起纸巾的一角。再。如果组织漂浮在溶液中，请使用真空管将组织吸走。

在入口处打开流动，在出口处打开真空。用蒸馏水清洗系统并晾干。这是从位于基底树突区域的一个微电极记录的 100 微摩尔 4 个 AP A CSF 诱导的自发活动的一个例子，信噪比为 34.9 分贝。

下面是红色矩形中放大的活动。这是来自另一个更靠近胞体的微电极的原始数据，显示信噪比为 27.2 分贝。这是从位于体细胞层内的电极获得记录的另一个示例。

在此示例中，信噪比为 18.53 分贝，这是从微电极记录的基线噪声。基线通常具有 150 到 200 微伏的峰峰值，单个电极的阻抗约为 1 到 2 兆欧姆。该视频显示了使用数组记录的神经传播，然后使用单独的归一化方法进行处理。

在数据分析中，整个组织的整个传播持续约 100 毫秒 遵循此程序。也可以执行其他方法，例如在未折叠的 vitu 海马体中进行神经成像，以回答其他问题，例如神经病灶的运动。看完这个视频后，你应该对如何原地展开海马体、将扁平组织准备到微讲座阵列上有一个很好的了解。