小鼠气味辨别与习惯化测试

本实验的总体目标是提供一种方法，用于研究小鼠检测、习惯化以及对新异气味和社会性气味产生去习惯化的能力。首先准备一系列非社会性新异气味（如果味和坚果味提取物）以及社会性气味（如鼠笼垫料）。第二步是向小鼠呈现这些气味，先呈现三种新异气味，随后呈现两种不同的社会性气味。

在每次试验中，评估并记录小鼠的嗅探行为。最终，通过气味识别、辨别和适应性测试来评估动物的嗅觉功能，以证明动物能够对新气味产生反应，能够对气味产生适应，随后在呈现另一种新气味或社交气味时表现出去适应的能力。该方法可用于回答神经科学领域中的关键问题，例如动物对新动物或新刺激无反应，是否是因为其无法察觉该气味所致。

开始准备非社会性气味，戴上手套后，取三个15毫升的锥形管，每管加入10毫升水。用移液器向第一管中加入100微升杏仁提取物，向第二管中加入100微升香蕉提取物，第三管仅保留纯水，作为对照。接着，获取两个至少三天未清洁的小鼠笼，每个笼内小鼠数量相等，且性别与测试小鼠相同。

使用棉签以之字形方式擦拭脏鼠笼的底部。将棉签上附着的垫料抖落，然后将棉签有绒毛的一端朝下放入一个带有紧密盖子的大玻璃罐中。为每只需要检测的小鼠，从两个鼠笼中各重复此操作三次，共获得三根棉签。

将罐子置于室温下保存，并在4至6小时内使用棉签。为保持气味稳定且一致，实验当天应将气味样本笼子移至测试区域外的房间。请勿使用有香味的香水或乳液，避免食用气味强烈的食物。

在测试开始前，将准备好的社交性与非社交性气味物质、实验室用胶带、新的棉签、带盖废液瓶以及两个计时器放入测试房间。戴上洁净手套，称量第一只小鼠的体重，然后将其转移至一个带有金属网盖且无水瓶的洁净笼子中。

将笼子放置在无异常气味或噪音的区域，让小鼠在新笼子中适应45分钟。适应期结束后，将装有小鼠的笼子移至测试区域，并开始对另一只小鼠进行适应。将已适应的小鼠连同其笼子放置在操作台上，高度应便于坐着时观察。

接着，按照文本方案中所述顺序，准备一种非社会性气味：将100微升气味液体滴加到一根新棉签的尖端，供立即使用。对于社会性气味，则从相应的容器中取出一支预先制备好的棉签直接使用。

抬起笼子的金属网盖，从网盖下方将无味棉签的末端插入水瓶口内。避免棉签头部接触任何物体，包括手指，以防气味污染。当约一英寸长的带气味棉签仍留在笼内时，用实验室胶带将棉签的木质末端固定在笼子底部的网盖下方。

然后轻轻将笼盖放回笼子上。为避免干扰测试小鼠，立即开始计时两分钟。使用第一个计时器，同时用第二个秒表记录测试小鼠嗅闻气味的累计时间。

主动嗅探定义为小鼠在距离棉签两厘米范围内时，将其鼻部朝向棉签。试验结束后，抬起金属网盖，小心地将棉签从网盖底部向下拉出并移除。为避免棉签携带气味的一端接触网盖，应将使用过的棉签立即密封于废弃瓶中，同时让小鼠休息一分钟，并准备下一个供体棉签。

每种气味连续呈现三次，每次持续两分钟。所有试验完成后，将测试室外垃圾桶中装有已使用棉签的废液瓶清空，并将小鼠放回其饲养笼中。每种气味物质首先呈现给具有 C57BL/6J 背景的小鼠，每种气味依次连续呈现。

小鼠用于探究提示有居住迹象的气味的时间更短。无论是社交气味还是非社交气味，均可观察到相似的居住与辨别模式。然而，小鼠用于探究社交气味的时间更长。

当向雄性FVB混合背景品系小鼠呈现相同的非社会性气味时，也观察到类似的适应模式。每次引入新的气味，都会引起主动嗅闻行为的增加，而随着同一种气味的反复呈现，该行为逐渐减少。然而，FVB小鼠在面对社会性气味时表现出不同的模式：在重复暴露过程中，其嗅闻时间未出现显著减少。

数据表明，小鼠对重复呈现的两种社交气味不会产生习惯化。观看本视频后，您应能充分理解如何测试小鼠检测新气味或社交气味的能力，使其对该气味产生习惯化，并在呈现新气味时出现去习惯化现象。